正交試驗優選寬心口服液提取工藝Δ

侯林中，張熙潔，王玉，劉曉紅（河北唐山市工人醫院，唐山市063000）

正交試驗優選寬心口服液提取工藝Δ

侯林中＊，張熙潔，王玉，劉曉紅#（河北唐山市工人醫院，唐山市063000）

目的：優選寬心口服液的提取工藝。方法：以干浸膏得率及丹參中的丹參素鈉含量為評價指標，以加水量、提取時間、提取次數為考察因素，采用正交試驗選取最佳工藝。結果：最佳工藝為加10倍量水，提取3次，每次提取2h。結論：優化的工藝簡單、可行，適用于實際生產。

寬心口服液；正交試驗；提取工藝；丹參素鈉

寬心口服液是我院中藥制劑，由丹參、赤芍、水蛭、當歸、川芎、黃芪等10味藥材組成，具有活血化瘀、益氣通絡的功效，用于治療氣虛血瘀、脈絡閉阻所致的胸痹、心痛證。動物實驗研究表明[1，2]，本制劑可以降低心肌梗死模型大鼠血清內皮因子的表達，保護內皮功能；具有清除氧自由基、減少心肌細胞破壞、保護線粒體結構功能作用；能夠提高兔血管成形術后血漿tpa活性，預防動脈血管成形術后局部血栓形成。本制劑由于當歸、川芎所含成分相似，其共同的有效成分阿魏酸遇熱不穩定，故在進行工藝研究時將二者單獨用乙醇提取，并優化了醇提工藝[3]；方中其余藥材用水提取。本試驗以干浸膏得率及丹參中丹參素（以丹參素鈉計）的含量為考察指標，對該口服液水提取工藝進行優選。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括2010色譜管理系統、510泵、996二極管陣列紫外檢測器、7725i進樣器（美國Waters公司）。

丹參素鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：200507）；寬心口服液（我院自制）；丹參、黃芪、赤芍、水蛭、地龍、桃仁、紅花、半夏、當歸、川芎飲片均購于唐山藥材站第二批發部，批號分別為 20070228、20070108、20070122、20070211、20070211、 20070130、 20070120、 20061228、 2007203、20070211；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 丹參素鈉的含量測定

根據筆者前期研究并已另文發表的文獻[4]，精密量取口服液1mL，置于10mL容量瓶中，加適量30%甲醇振搖，用30%甲醇稀釋至刻度，離心（1500r·min-1）15min，吸取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，備用。另精密稱取丹參素鈉對照品適量，加30%甲醇溶解，配制成濃度為0.5mg·mL-1的對照品溶液。按色譜條件進樣測定，計算丹參素鈉含量。

2.2 寬心口服液最佳水提工藝研究

2.2.1 因素水平的確定 從提取物的性質并結合實際生產考慮，選取影響水提工藝的加水量（A）、提取時間（B）、提取次數（C）為考察因素，每個因素選3個水平，用L9（34）正交表進行試驗。因素水平見表1。

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

2.2.2 試驗樣品的制備及結果 依處方比例，稱取丹參、黃芪、赤芍、水蛭、地龍、桃仁、紅花、半夏，加入醇提取后的當歸和川芎殘渣共9份，依正交設計方案于不同條件下提取，抽濾，得濾液，減壓濃縮，定容于容量瓶中。取藥液10mL，水浴蒸干，105℃烘5h，得干浸膏，稱量，按下式計算干浸膏得率：干浸膏得率＝（VW1/10W）×100%。式中，V為每份藥材提取液總體積；W1為10mL提取液中干浸膏質量；W為每份藥材的質量。按“2.1”項下方法測定丹參素鈉含量。正交試驗結果見表2；方差分析結果見表3。

表2 正交試驗結果Tab 2 Result of orthogonal test

表3 方差分析結果Tab 3 Results of variance analysis

從表2、表3可知，影響干浸膏得率的因素大小依次為C＞B＞A＞D，最佳提取工藝為A3B3C3；而影響丹參素鈉含量的因素大小依次為C＞A＞B＞D，最佳提取工藝為A3B3C3。其中，提取次數對干浸膏得率和丹參素鈉含量均具有顯著性影響。最后確定以A3B3C3為佳，即加10倍量水，提取3次，每次2h。

2.3 驗證試驗

稱取3份處方藥材，按照優選工藝提取，用上述方法測定干浸膏得率和丹參素鈉的含量。結果，干浸膏得率和丹參素鈉含量均高于正交試驗，表明優選工藝可行。驗證試驗結果見表4。

3 討論

中藥提取過程對于中藥質量、療效有著舉足輕重的影響。眾所周知，中藥的療效是通過一系列相似結構的化合物群（有效成分）的協同作用而體現的。要保證中藥產品的質量穩定、療效可靠，就必須對中藥提取物生產過程進行研究和標準化建設[5]。

丹參為方中君藥，丹參素為其水溶性代表成分之一[6]。現代藥理研究證明[6，7]，丹參素對實驗性心肌缺血有明顯的保護作用，能顯著縮小心肌梗死范圍和減輕病變程度；具有抗血栓形成、抑制血小板聚集等作用。丹參素的藥理作用決定了其在制劑中的地位，故本研究參照有關文獻[8]以丹參素（以丹參素鈉計）含量為考察指標。

在測定含量時[4，9]，曾采用流動相甲醇-0.5%冰乙酸溶液，并根據文獻調整比例1∶6、1∶8、1∶10、1∶12。結果，丹參素鈉峰與其他成分色譜峰分離不佳。后改用現在的流動相：乙腈-水-磷酸（1∶30∶0.5），丹參素鈉峰能夠與其他色譜峰完全分離。通過方法學考察，含量測定方法簡便、可靠、重復性好。

表4 驗證試驗結果Tab 4 Results of verification test

[1] 張春來，尚小明，徐 丹，等.心肌梗死大鼠外周血中血管內皮因子水平與參芍寬心合劑的干預作用[J].中國組織工程研究與臨床康復，2007，11（45）：9039.

[2] 李 霞，尚小明，許 丹，等.寬心合劑對大鼠急性心肌梗死后心室重構作用影響的研究[J].河北中醫，2007，29（3）：257.

[3] 侯林中，劉曉紅，張熙潔.正交試驗優選寬心口服液中當歸、川芎提取工藝[J].中國藥學雜志，2007，42（10）：794.

[4] 侯林中，劉曉紅，張熙潔.高效液相色譜法測定寬心口服液中丹參素鈉的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2008，14（10）：18.

[5] 倪力軍，史曉浩，高秀蛟，等.提取時間、溶劑對丹參提取物質量的影響研究[J].中成藥，2003，25（10）：780.

[6] 呂亞青.丹參的化學成分及臨床應用進展[J].中國藥房，2007，18（12）：947.

[7] 李艷杰，孫玉華.丹參素藥理作用研究[J].延邊大學醫學學報，2006，29（1）：73.

[8] 譚建偉，楊天才，馬秀芬，等.乳安合劑的制備與質量標準研究[J].中國藥房，2007，18（33）：2588.

[9] 侯林中，劉曉紅，張熙潔.寬心口服液質量控制[J].中國醫院藥學雜志，2009，29（13）：1126.

Optimization of the Extraction Technology of Kuanxin Oral Liquid by Orthogonal Test

HOU Lin-zhong，ZHANG Xi-jie，WANG Yu，LIU Xiao-hong（Tangshan Gongren Hospital of Hebei Province，Tangshan 063000，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of Kuanxin oral liquid.METHODS：The extraction technology of Kuanxin oral liquid was optimized by orthogonal test with the content of dry extract and sodium danshensu as index and with amount of water，extraction time and extraction times as factors.RESULTS：The optimized extraction technology was as follows：adding 10-folds water，extracting 3times for 2hours each time.CONCLUSION：The optimized extraction technology is simple，practicable and suitable for industrial production.

Kuanxin oral liquid；Orthogonal test；Extraction technology；Sodium danshensu

R284.2；R283.612

A

1001-0408（2010）47-4447-02

Δ河北省科學技術研究與發展計劃項目（03276196D-60）

＊副主任中藥師，碩士。研究方向：中藥工藝和質量標準。電話：0315-3722354。E-mail：tshlz2004@yahoo.com.cn

#通訊作者：主任藥師，碩士研究生導師。研究方向：醫院藥學。電話：0315-3722435。E-mail：liuxiaohong@medmail.com.cn

2010-06-30

2010-10-29）