香菇水提取液對蠶豆根尖微核率的影響

陳曉麟，王強

（重慶教育學院生化系，重慶 400067）

香菇水提取液對蠶豆根尖微核率的影響

陳曉麟，王強

（重慶教育學院生化系，重慶 400067）

采用蠶豆根尖細胞微核試驗方法研究香菇水提取液對環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率的影響。結果表明，香菇水提取液具有一定的抗突變作用，其濃度在0.1 g/mL～1.0 g/mL之間，不誘導蠶豆根尖微核率的增加，其微核指數保持在1.0左右；香菇水提取液能有效地抑制環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率的增加，抑制率在46%～50%之間，與濃度存在劑量-反應關系，相關系數R2=0.9782。表明香菇水提取液具有一定的抗突變作用。

香菇；水提取液；微核；環磷酰胺

香菇（Lentinus edodes）為擔子菌綱、傘菌目、口蘑科的真菌，又名香菌、花菇、香蕈、冬菇、厚菇等，是世界上著名的食用菌之一[1]。香菇滋味鮮美，不僅具有很高的食用價值，而且它的保健功能越來越受到人們的重視。研究表明，香菇含有的香菇多糖和雙鏈核糖核酸具有抗病毒、抑制腫瘤和提高免疫功能的作用，因此香菇是不可多得的保健食品原料[2]。

微核（micronucleus，MCN）是指位于細胞質中并獨立于主核、直徑為主核1/3～1/20、完全與主核分開的圓形或橢圓形的微小核[3]。蠶豆根尖細胞在外界誘變因子的作用下，在分裂時形成的染色體片斷不能隨細胞分裂進入細胞核而形成了微核，產生的微核數量與外界誘變因子的強弱成正比，因此可用微核率來評價誘變因子對生物遺傳物質的影響程度。上世紀70年代，蠶豆根尖細胞微核試驗就作為一種檢測化學品遺傳毒性的方法被廣泛采用，不僅具有簡便、經濟、快速和重復性好、靈敏度高的優點，而且其檢測結果與動物試驗結果具有很高的一致性[4]。隨著該技術的不斷完善，其測試的范圍也擴展到了對食品致突變性的檢測中[5]。本文通過蠶豆根尖細胞微核試驗，探討香菇的水提取液對微核產生的影響，研究其抗突變作用，為香菇的深度開發利用提供依據。

1 材料和方法

1.1 材料和試劑

鮮香菇：購于重慶普通農貿市場，挑選大小勻稱、色澤均一、無破損的香菇進行破碎、均勻混合，制成試驗用樣本。

環磷酰胺：中國醫藥（集團）上海化學試劑公司；其他試劑均為分析純或生化試劑。

1.2 方法

1.2.1 香菇水提液的制備

稱取搗碎的香菇樣本100.0 g，加約1000 mL蒸餾水，煮沸提取1 h，在這個過程中適當添加蒸餾水保持體積相對不變，提取后用雙層紗布過濾，保留濾液。濾渣加水同上重提2次，過濾。合并3次提取的濾液，濃縮至約70 mL～80 mL，冷卻后定容至100 mL，冰箱保存備用。該提取液每毫升提取液相當于1 g鮮香菇。

1.2.2 蠶豆根尖細胞微核率的測定

蠶豆根尖微核試驗方法參見文獻[4]。

以 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/mL 的香菇水提取液作試驗1組，6個不同濃度的香菇水提取液中分別加入等體積的10 mg/L環磷酰胺溶液作試驗2組（溶液中環磷酰胺濃度為5 mg/L），分別用蒸餾水作陰性對照，5 mg/L環磷酰胺作陽性對照，按參考文獻[4]的方法處理蠶豆的根尖，每個處理鏡檢5個根尖，每個根尖至少觀察1000個間期細胞，統計觀察到的微核數，按下式計算微核率和微核指數：

結果判定：測試樣本所致的微核率與陰性對照比較，如果有顯著性差異且微核指數≥1.5判斷樣本具有致突變性。

上述試驗均作3次以上的重復，結果均為重復試驗測得的平均值，試驗數據用excel（2003版）進行計算處理。

2 結果與分析

2.1 香菇水提取液對蠶豆根尖微核率的影響

用 6 個濃度梯度（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/mL）的香菇水提取液作為試驗組，蒸餾水作陰性對照，5 mg/L環磷酰胺作陽性對照，觀察它們對蠶豆根尖微核率的影響，試驗結果見表1。

由表1可知，0.1 g/mL～1.0 g/mL的香菇水提液對蠶豆根尖的微核率無明顯影響，微核指數均在1.0左右（陽性對照的微核指數為2.83），表明香菇水提液中不含或含有很少能引起微核率增高的成分。

表1 香菇水提取液對蠶豆根尖微核率的影響Table1 MCN of Viciafaba root tip cells dealed with the water abstracted of Lentinus edodes

2.2 香菇水提取液對環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率的影響

環磷酰胺是一種染色體斷裂劑，很多對突變的研究采用它作陽性對照[6-7]。本試驗用不同濃度的香菇水提液和5 mg/L的環磷酰胺同時處理蠶豆根尖，觀察微核率的改變。試驗結果見表2。

表2 香菇水提取液對環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率的影響Table2 Effect of MCN‰of Viciafaba root tip cells by cyclophoshomide and the water abstractedof Lentinus edodes

從表2可知，香菇水提取液對環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率有顯著的抑制作用。香菇水提取液的濃度由0.1 g/mL增加到1.0 g/mL，酰胺誘導的蠶豆根尖微核率由24‰左右降低到13‰～11‰左右；微核指數由2.83降到了1.5～1.4左右。上述試驗結果表明，香菇水提液中不僅不含或含很少的導致微核數增加的物質，而且含有抑制環磷酰胺誘導蠶豆根尖微核率增加的成分。香菇水提液對環磷酰胺誘導蠶豆根尖微核率的抑制作用與香菇水提液的濃度之間存在劑量-反應關系，相關方程式為 y=1.9577Ln（x）+50.335，式中：x為香菇水提液的濃度，（g/mL）；y為抑制率；相關系數R2=0.9782。

根據調查結果，鮮香菇甲醛含量一般為4 mg/kg～50mg/kg，干香菇甲醛含量達到 100mg/kg～300mg/kg[8-9]。選定1.0 mg/L～250 mg/L的甲醛溶液做試驗材料，觀察該濃度范圍內的純甲醛溶液對蠶豆根尖微核的影響，間接評價香菇中甲醛對遺傳作用的影響。試驗結果見表3。

表3 甲醛溶液對蠶豆根尖微核率的影響Table3 Effect of MCN of Viciafaba root tip cells by Formaldehyde

表3的結果表明，當甲醛濃度低于200 mg/L時，蠶豆根尖微核指數均等于或低于1.5，即基本不具有致突變作用；當甲醛濃度等于或高于200 mg/L以上，蠶豆根尖微核指數可到達2.47以上，有很強的致突變作用。

對這批香菇中甲醛含量進行了測定，其均值為12.12 mg/kg。在香菇水提液對蠶豆根尖微核率影響的試驗中，水提液的香菇濃度范圍是0.1g/mL～1.0g/mL，甲醛含量范圍為1 mg/L～12.12 mg/L。因此蠶豆根尖微核試驗的香菇水提液中甲醛含量遠遠低于引起微核指數超過1.5的濃度，而且水提液中還含有一定濃度的香菇多糖。結果反映出香菇多糖具有較強的抗突變作用，這一點與Sugui等結論相似[10-11]。此外，香菇水提取液能有效抑制環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率的增加，造成這種現象的原因可能是與其中含有的甲醛濃度很低同時含有香菇多糖等抗突變成分有關。

3 結論

通過試驗發現，0.1 g/mL～1.0 g/mL香菇水提液對蠶豆根尖微核率無明顯影響，微核率保持在1.0左右，較對照組有效地降低了微核率。除此之外，香菇水提取液對環磷酰胺誘導的蠶豆根尖微核率有顯著的抑制作用，且抑制作用與香菇水提液存在劑量-反應關系。作為香菇中有效成分的香菇多糖，有可能是香菇提取液抗突變的重要成分之一。因此，香菇可作為抗突變保健品進一步開發利用。

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[4]孔志明.環境毒理學[M].2版.南京：南京大學出版社，2004：196-198

[5]Marcato-Romain,Pinelli C E，B E Pourrut，et al.Guiresse.Assessmentof the genotoxicity of Cu and Zn in raw and anaerobically digested slurry with the Vicia faba micronucleus test[J].Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis,2009,672(2):113-118

[6]Huilan Yi,Ziqiang Meng.Genotoxicity of hydrated sulfur dioxide on root tips of Allium sativum and Vicia faba[J].Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis,2003,53(1):109-114

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Effect of Water Extract of Lentinus Edodes on Micronucleus Rate of Vicia Faba Root Tips

CHEN Xiao-lin，WANG Qiang
（Department of Life Science and Chemistry,Chongqing Education College,Chongqing 400067，China）

Vicia faba root tips micronucleus test to study on effect of water extract of Lentinus edodes on micronucleus rate of Vicia Faba root tips induced by cyclophosphamide,which provide experiment basis for exploiting antimutation function of Lentinus edodes.When the concentration of water extract of Lentinus edodes was between 0.1 g/mL-1.0 g/mL,the micronucleus rate did not increase and micronucleus index kept at 1.0.In addition,it can inhibit micronucleus rate of vicia faba root tip cells induced by cyclophosphamide，rate of inhibitation was 46%-50%,which is in dose-effect relationship with the concentration of water extract of Lentinus edodes,R2=0.9782.The water extract of Lentinus edodes has some antimutation function.

Lentinus edodes;water extract;micronucleus；cyclophoshomide

陳曉麟（1958—），女（漢），副教授，學士，主要從事植物生物學教學與科研工作。

2009-10-22