刺五加質量分析研究進展

閆麗麗 邱友紅 宮宏斌 劉廣鳳

（1、黑龍江完達山藥業股份有限公司，黑龍江 密山 158306 2、黑龍江省八五八農場職工醫院，黑龍江 虎林 158419）

刺五加為五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr.et Maxim)Harms的干燥根、根莖及莖。其性溫，味微苦、辛，具有益氣健脾、補腎安神的功能，原用于脾腎陽虛、體虛乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多夢[1]。隨著對刺五加化學成分和現代藥理作用研究的不斷深入，刺五加中總黃酮、紫丁香苷、刺五加總苷、異嗪皮啶等化合物被證實為其有效成分，具有多種藥理作用。現對其近年來報道的刺五加各類化學成分分析方法研究進展進行綜述，為刺五加深度研究利用提供文獻線索。

1 紫丁香苷的測定方法

1.1 薄層層析--紫外分光光度計法

將樣品粗粉置索氏提取器中，加無水乙醇回流提取，吸取50μl 提取液點于硅膠GCMC 板上，用氯仿-甲醇（8∶2）展開，紫外燈下定位，切下紫丁香苷暗藍色熒光部分，置試管中，另至薄層板上切取空白硅膠為對照，分別準確加甲醇5.0ml，充分攪拌溶解，離心，取上清液在266 ±1nm 處測吸收度，丁香苷線性范圍是 5～25μg/ml[2]。

1.2 光密度計法

用乙醇和氯仿-乙醇（5∶1）從粉碎試樣中萃取苷，用Silufol層TLC 分析萃取液，氯仿-甲醇-水（61∶33∶7）作展開劑，與 254nm 輻射檢測刺五加苷B[2]。

1.3 高效液相色譜法

1.3.1 樣品中的甲醇提取液進樣測定，以氯仿-異辛烷-甲醇-冰醋酸（30∶15∶2∶3）為流動相（1.0ml/分鐘），YWG-80 硅膠為固定相，270nm 為檢測波長，外標法定量[2]。

1.3.2 樣品加甲醇，超聲處理（功率250W，頻率 33kHz）30 分鐘，放冷，提取液進樣測定；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（20∶80）為流動相；檢測波長為265nm。理論板數按紫丁香苷峰計算應不低于2000[1]。

1.3.3 樣品用60%甲醇作提取溶劑，超聲波提取1.5h,提取溫度為 55℃；檢測波長 266 nm；流動相為甲醇-水（28∶72）；流速（1.0ml/min）；柱溫 25℃,進樣量為 10μl[3]。

1.3.4 樣品使用乙醇為提取劑，采用超聲萃取技術提取，用高效液相色譜法測定丁香苷的含量。色譜柱為C18（4.16mm×150mm，5μm），流動相為乙腈-水（1∶4），檢測波長266nm，流速 1.0ml/min；柱溫 25℃[4]。

2 異秦皮啶的含量測定

2.1 比色法

異秦皮啶在堿性溶液中下色反應1小時，在400nm 處測吸收度，計算含量。

2.2 薄層層析-比色法

精密稱定生藥粗粉，置索氏提取器中加乙醇回流提取，抽取100μl 濾液，點于硅膠G-CMC 板上，用己烷-乙酸乙酯-甲醇（24∶12∶3）展開，紫外燈下定位，切下，置試管中，另自薄層板上切取空白硅膠對照，分別加0.5%氫氧化鉀70%乙醇溶液5.0ml，充分攪拌溶解，離心，取上清液在400nm 測定吸收度，異秦皮啶的線性范圍為 0.84～6.72μg/ml。

2.3 薄層掃描法

樣品的氯仿提取液點于硅膠G 板上，以環己烷-氯仿-95%乙醇（4∶2∶1）展開，將異秦皮啶與其它成分分離后，再用島津CS-910 型雙波長薄層掃描儀進行熒光掃描測定，激發波長為365nm，發射寶成為500nm[2]。

2.4 高效液相色譜法

2.4.1 利用色譜柱為PhenomenexeC18 柱（4.6mm ×150mm，5μm）， 流 動 相 ： 乙 腈 -0.05mol/l 一磷酸二氫鉀（5∶85），流速：0.9ml/min，檢測波長：344nm，進樣量：20u1 測定了刺五加藥材中總異秦皮啶含量[5]。

2.4.2 利用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動相，檢測波長343nm，理論板數按異秦皮啶峰計算應不低于1500，測定了刺五加原藥材中異秦皮啶含量[6]。

3 刺五加苷B、E(丁香苷和紫丁香樹脂苷)的測定

3.1 樣品用50%甲醇作提取溶劑回流提取，色譜柱：YMC C18；流動相：A 為 0.1%磷酸水溶液，B 為乙腈，梯度洗脫：0 min：B(10%)，15 min：B(10%)，30 min：B(16%)，40 min：B(16%)，40.1 min：B(10%)；檢測波長:220nm；柱溫：35℃[7]。

3.2 樣品使用50%甲醇處理，色譜柱：diamonsil(250mm×4.6mm，5μm)；大連物化所保護柱；流動相：乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脫：乙腈由13%等度2 min，再10min 內線性變化到21%，然后在21min 中內線性變化到22%。柱溫：40℃；流速：1ml/min；檢測波長刺五加苷B 為265nm，刺五加苷E 為271nm。進樣量2Oμl[8]。

4 總黃酮的含量測定

4.1 以蕓香甙為對照品，繪制標準曲線。取生藥粗粉，用石油醚除色素，干燥。精密稱量樣品，乙醇熱回流提取，稀釋一定倍數，使用721 型分光光度計在420nm 波長測定吸收度，根據標準曲線，計算總黃酮百分含量[9]。

4.2 以蘆丁為對照品,采用分光光度法測定刺五加莖中黃酮含量，以甲醇為溶劑連續回流提取。使用UV-7530 紫外分光光度計于510nm 處測定吸收度，按濃度與吸收度相關關系求得回歸方程為A=9.4000C-0.0320，R=0.9998（n=5），樣品平均回收率為98.77%，RSD 為1.34%[10]。

[1]國家藥典委員會：中華人民共和國藥典.化學工業出版社，2005.143-144

[2]鄭虎占等：中藥現代研究與應用.學苑出版社，1999

[3]張艷華等：HPLC 法測定黑龍江省不同地區刺五加紫丁香苷的含量.植物研究，2005，25（4）：123-125

[4]曹建國等：刺五加丁香苷和總黃酮含量及其季節動態.植物學通報，2006，23（3）：269-274

[5]周國平等.刺五加中游離型和結合型異皮定的高效液相色譜法研究.藥物分析雜志，2001，21(3)：180

[6]鄭偉然.HPLC 法測定中藥材刺五加中異嗪皮啶的含量.現代中藥研究與實踐，2003，17(1)：29

[7]楊敬芝等：HPLC 法測定不同產地的刺五加中刺五加苷B 和E 含量.中藥材，2005，28（8）：669-670

[8]孟祥才等；刺五加不同藥用部位及不同組織有效成分含量比較研究.時珍國醫國藥，2009，2O（8）：1899-1900

[9]王雨亭等：刺五加與臨床.吉林科技出版社，1990，14-15

[10]王麗英等：分光光度法測定刺五加莖中黃酮含量. 時珍國醫國藥，1999，10（12），884