HPLC法測定杠板歸不同藥用部位槲皮素的含量

2011-01-09 05:32:06李元宏楊務彬湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部十堰市442000

中國藥房 2011年39期

李元宏，楊務彬，蘭鴻（湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部，十堰市 442000）

杠板歸為蓼科蓼屬植物貫葉蓼Polygonum perfoliatum L.的全草，別名蛇倒退、梨頭刺、河白草、蛇不過、穿葉蓼等[1]，具有清熱解毒、利水消腫的作用，主治水腫、小便不利、痢疾、腹瀉、百日咳、癰癤瘡毒、皮炎、濕疹、毒蛇咬傷等，是一種具有很高藥用價值的傳統中草藥。在實際應用中，筆者發現其不同藥用部位的治療效果不同，故本文以其主要活性成分槲皮素作為定量指標，采用高效液相色譜（HPLC）法對杠板歸不同藥用部位槲皮素含量進行測定。

1 儀器與試藥

LC-10A型HPLC儀、SPD-10A型紫外檢測器（日本島津公司）；HW-2000型色譜工作站（南京千譜軟件有限公司）；FA2004型電子分析天平（上海精科公司）。

槲皮素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100081-200406）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；杠板歸采自武當山八仙觀3個不同地點，經湖北醫藥學院生藥學教研室陳吉炎教授鑒定為貫葉蓼P.perfoliatum L.。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DiamonsilTMC-18（200 mm×4.6 mm，5 μm），加裝Phenomenex保護柱；流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：360 nm[2]；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.槲皮素對照品；B.供試品Fig 1 HPLC chromatogramsA.quercetin control；B.test sample

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取經真空干燥至恒重的槲皮素對照品適量，用甲醇配成每1 mL含槲皮素0.50 mg的對照品貯備液。精密量取該貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含槲皮素0.050 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取杠板歸藥材粉末（過三號篩）約2.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足失重，搖勻，濾過。精密量取續濾液20 mL，加入鹽酸10 mL，置水浴中加熱水解3 h[3]，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 線性關系考察

精密量取上述對照品貯備液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分置6支10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，每一濃度重復進樣3次，求平均峰面積。以平均峰面積積分值（Y）為縱坐標，槲皮素進樣量（X，μg）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y＝3.679×103X+19.746（r＝0.999 8，n＝18）。結果表明，槲皮素進樣量在0.05～1.00 μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。