土壤有效磷檢測中改變標準溶液磷濃度和顯色劑含量的試驗

□楚雄州動物疫病預防控制中心 675000 楊冬月

□楚雄州農(nóng)產(chǎn)品質量檢測中心 675000 虞繼權

按照《云南省測土配方施肥暨地力評價技術》一書檢測土壤有效磷，配制的一系列標準溶液中，最高濃度是0.50ug.ml-1，此濃度相對應的吸光度值是0.2，而依據(jù)相關資料證明，當標準曲線吸光度范圍是0.2～0.8（透射比為15%～65%）時，在此范圍中測定的樣品濃度相對誤差較小。為此，可采用的方法之一是調節(jié)標準溶液的濃度。根據(jù)《云南省測土配方施肥暨地力評價技術培訓教材》、《化驗員讀本儀器分析》，證實顯色劑的用量影響標準溶液濃度，而且顯色劑的用量與標準溶液濃度之間的關系可通過實驗確定。鑒于此，所做的實驗分兩步，第一步：配制一組磷含量是1.0ug.ml-1，而顯色劑含量不同的溶液，顯色劑的含量從低到高，依次增加，測定這組溶液的吸光度。根據(jù)吸光度—濃度之間的關系，在一定的濃度值之間（此處濃度值指顯色劑的濃度）吸光度出現(xiàn)穩(wěn)定值，與這個穩(wěn)定的吸光度值相對應的顯色劑的量就是實驗需確定的數(shù)據(jù)，它是配制標準溶液濃度達1.0ug.ml-1時所需添加的顯色劑的量。第二步：為了比較在標準曲線中加入第一步試驗得出的顯色劑的量后所檢測的樣品結果，與按照《云南省測土配方施肥暨地力評價技術培訓教材》一書配制的標準曲線檢測的樣品結果是否一致，從第一步試驗中選定一個在范圍內的顯色劑的用量，配制成一組磷濃度是0.0ug.ml-1到1.0ug.ml-1的標準曲線，檢測樣品，記錄吸光度值，再按照教材配制一組磷濃度是0.0ug.ml-1到0.5ug.ml-1的標準曲線，檢測同一個樣品，記錄吸光度值，判定兩個吸光度值是否一致，從而進一步驗證磷濃度是0.0ug.ml-1到1.0ug.ml-1的標準曲線中所添加的顯色劑的量是否正確。

1 材料與方法

1.1 材料

1）磷標準溶液[C（P）=100mg.L-1]。稱取經(jīng)105℃下烘干2h的磷酸二氫鉀（優(yōu)級純）0.4390g，用水溶解后，加入5ml濃硫酸，定容至1L。

2）5mg.L-1磷標準溶液。吸取5.00ml濃度為100mg.L-1的磷標準貯備液于100ml容量瓶中，定容。

3）鉬銻抗顯色劑。稱取1.50g抗壞血酸（分析純），溶于100ml7.5mol.L-1硫酸鉬銻貯備液中。

4）7.5mol.L-1硫酸鉬銻貯備液。取蒸餾水約400ml，燒杯浸在冷水內，然后緩緩注入分析純濃硫酸208.3ml，并不斷攪拌，冷卻至室溫。另取分析純鉬酸銨20g溶于約60℃的200ml蒸餾水中，冷卻。然后將硫酸溶液徐徐倒入鉬酸銨溶液中，不斷攪拌再加入100ml酒石酸銻鉀溶液（濃度是0.5%），用蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻，貯于棕色試劑瓶中。

5）分析天平。感量0.0001g。

6）分光光度計。可在660nm下測定吸光度，北京普析TU1901雙光束紫外分光光度計。

1.2 方法

1）磷含量是1.0ug.ml-1，顯色劑含量不同的各溶液吸光度的測定。分別吸取5mg.L-1磷標準溶液10.00ml于八個50ml的容量瓶中，依次加入釩鉬酸銨顯色劑 0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml、14ml，充分搖動逐盡 CO2后用水定容，即為含磷是1.0ug.ml-1，含顯色劑濃度不同的一組溶液，在室溫高于20℃處放置30min后，用1cm光徑比色皿在波長660nm處測定吸光度。

2）樣品的制備。吸取5mg.L-1的磷標準溶液5ml于50ml的容量瓶中，加入顯色劑5.00ml，充分搖動逐盡CO2后用水定容，作為待測樣品。

3）濃度最高點1.0ug.ml-1的標準曲線的繪制：吸取50mg.L-1磷標準溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于 50ml容量瓶中，各加入顯色劑10ml，充分搖動逐盡CO2后用水定容，即為含磷 0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ug.ml-1磷標準系列溶液，在室溫高于20℃處放置30min后，用1cm光徑比色皿在波長660nm處比色測定經(jīng)過2）條處理的樣品濃度。

4）濃度最高點是0.5ug.ml-1標準曲線的繪制：按照《云南省測土配方施肥暨地力評價技術培訓教材》操作，吸取5mg.L-1磷標準溶液 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于 50ml容量瓶中，各加入顯色劑5.00ml，充分搖動逐盡 CO2后用水定容，即為含磷0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ug.ml-1磷標準系列溶液，在室溫高于20℃處放置30min后，用1cm光徑比色皿在波長660nm處比色測定經(jīng)2）條處理的樣品濃度。

2 結果與分析

1）磷的濃度值是 1.00ug.ml-1，加入 8ml、10ml、12ml顯色劑的溶液測得的吸光度值分別是0.470、0.467、0.467，根據(jù)紫外分光光度計光度準確度是±0.004Abs（0.5～1.0Abs），這三個值可以看作是相同。檢測結果見表1。所以當標準曲線的最高濃度值是1.00ug.ml-1時，加入 8ml、10ml或 12ml的顯色劑，檢測結果都相同。為了節(jié)省試劑用量，為了移液方便、快速，確定顯色劑用量是10ml。

表1 濃度是1.00ug.ml-1溶液加入不同量顯色劑的吸光度

2）按照3）條檢測樣品，結果濃度是0.466ug.ml-1，另外按照4）條檢測同一個樣品，結果濃度是0.465ug.ml-1，兩個檢測值可視為相同。所以，配制含磷濃度是0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ug.ml-1的標準曲線，各溶液加入10ml顯色劑，這個標準曲線中測定的樣品與按《云南省測土配方施肥暨地力評價技術培訓教材》測定的同一個樣品比較，結果相同。在實際檢測中，按照3）條配制的標準曲線適用可行。

3 討論

1）由于各地方的土壤含磷量不同，不同類型的土壤含磷也不同，在檢測中，可適度調整檢測磷的標準曲線的濃度，繼而相應調整顯色劑的含量。

2）在檢測過程中，如果樣品的顏色比標準曲線中1.0ug.ml-1的溶液顏色深，則可用目測法把樣品先作適當稀釋，直到稀釋的樣品顏色淺于1.0ug.ml-1的溶液顏色時，用紫外分光光度計測定。但是在稀釋過程中，建議將樣品移至容量瓶內稀釋，提高檢測的準確度。

3）在此實驗中，進行樣品處理時，為了減少誤差，采用了樣品處理與標準曲線配制相同的方法。但在實際檢測中，樣品的處理方法應按標準執(zhí)行。

4 結論

1）土壤有效磷的檢測中，在標準曲線磷含量濃度達1.0ug.ml-1的情況下，每50ml的溶液中加入8～12ml顯色劑，各溶液檢測到的吸光度相同，即在實際檢測中可用的顯色劑的量是 8～12ml。

2）配制磷濃度最高達1.0ug.ml-1，顯色劑是每50ml的溶液加入10ml的標準曲線，在此標準曲線中檢測樣品，結果準確、可靠，這個標準曲線的配制方法可在實際檢測中運用。

[1]竇曉黎，等.云南省測土配方暨地力評價技術培訓教材.

[2]劉珍，等.化驗員讀本[M].北京:化學工業(yè)出版社，1983.

[3]北京普析通用儀器有限責任公司編.Uvwin5使用指南.