白藜蘆醇對高脂高膽固醇飼料喂養小鼠脂質過氧化水平的影響

任亞浩，李巖溪，于飛，趙越，鄭曉南，王博涵，詹志鵬，袁媛，康思雯，楊軍

（中國醫科大學1.公共衛生學院營養與食品衛生教研室；2.第90期臨床醫學七年制，沈陽 110001）

白藜蘆醇對高脂高膽固醇飼料喂養小鼠脂質過氧化水平的影響

任亞浩1，李巖溪2，于飛1，趙越1，鄭曉南1，王博涵1，詹志鵬1，袁媛1，康思雯1，楊軍1

（中國醫科大學1.公共衛生學院營養與食品衛生教研室；2.第90期臨床醫學七年制，沈陽 110001）

目的觀察不同劑量的白藜蘆醇對喂飼高脂高膽固醇飼料的小鼠血清和肝臟脂質過氧化水平的影響。方法 將50只昆明種小鼠按體質量隨機分為基礎組（n=10）和高脂組（n=40），分別喂飼基礎飼料和高脂高膽固醇飼料。4周后，按體質量和血清總膽固醇水平將高脂組隨機分為 4組：高脂對照組、白藜蘆醇低（5mg·kg-1·d-1）、中（22.5mg·kg-1·d-1）、高（45mg·kg-1·d-1）組。基礎組和高脂對照組均給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃；白藜蘆醇低、中、高組小鼠分別經灌胃給予相應劑量的白藜蘆醇羧甲基纖維素鈉溶液。干預6周后測定小鼠血清和肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛和總抗氧化能力的水平。結果 基礎組、白藜蘆醇低、中、高組小鼠肝臟丙二醛水平均低于高脂對照組小鼠（P<0.05）。結論白藜蘆醇能夠抑制喂飼高脂高膽固醇飼料小鼠肝臟中丙二醛水平的升高。

白藜蘆醇；脂質過氧化；丙二醛

心血管疾病已成為嚴重危害健康的疾病，而脂質過氧化在其發生發展中扮演著重要角色［1］。白藜蘆醇是一種天然多酚類物質，廣泛存在于葡萄、虎杖和花生等多種植物中。近年來，越來越多的研究證明，白藜蘆醇具有降血脂、抗氧化和抗癌等多種生物學作用［2～4］。但有關白藜蘆醇對高脂高膽固醇飲食小鼠肝臟脂質過氧化水平影響的報道很少，本研究以不同劑量的白藜蘆醇對喂飼高脂高膽固醇飼料的小鼠進行干預，觀察了白藜蘆醇對其血清和肝臟脂質過氧化水平的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑與儀器：膽固醇、膽鹽（北京奧博星生物技術有限責任公司）；白藜蘆醇（西安冠宇生物技術有限公司）；羧甲基纖維素鈉（國藥集團化學試劑有限公司）。總膽固醇（total cholesterol，TC）試劑盒（北京中生北控生物科技股份有限公司），谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）和考馬斯亮蘭試劑盒（南京建成生物工程研究所）。KDC-1042低速離心機（安徽科大創新股份有限公司中佳分公司）；IKA T10 Basic分散機（德國IKA公司）；Multiskan MK3酶標儀（美國Thermo公司）；LIBROR AEL-40SM電子天平（日本Shimadzu公司）；恒溫攪拌循環水浴箱（江蘇省常州國華電器有限公司）。

1.1.2 實驗動物：SPF級雄性昆明種小鼠50只，8周齡，體質量18～22g，由中國醫科大學實驗動物部提供。實驗動物生產許可證號：SCXK（遼）2003-0009；使用許可證號：SYXK（遼）2003-0013。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與處理：將50只小鼠適應性飼養1周后，按體質量隨機分為：（1）基礎組（n=10）：喂飼基礎飼料（由中國醫科大學實驗動物部提供）；（2）高脂組（n=40）：喂飼高脂高膽固醇飼料（92%的基礎飼料、6.75%豬油、1%膽固醇和0.25%膽鹽混合而成，脂肪總含量為10%）。4周后，由內眥靜脈采血0.5ml，測定血清TC水平，按TC水平和體質量均衡原則再將高脂組隨機分為4組：高脂對照組、白藜蘆醇低、中、高組，每組10只。基礎組與高脂對照組分別繼續喂飼基礎飼料和高脂高膽固醇飼料，并給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃；白藜蘆醇低、中、高組小鼠喂飼高脂高膽固醇飼料，同時分別經灌胃給予不同濃度（5mg·kg-1·d-1、22.5mg·kg-1·d-1和 45mg·kg-1·d-1）的白藜蘆醇羧甲基纖維素鈉溶液進行干預，干預時間為6周。動物分組和高脂高膽固醇飼料配方參照文獻［5］，并對飼料配方略作調整。實驗期間，小鼠自由攝食、飲水，每周稱2次體質量。

1.2.2 血清及肝臟MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平檢測：干預期末，禁食12h，將小鼠用乙醚麻醉后摘眼球取血0.5～1.0ml，分離血清；分離肝臟，取0.2g肝組織，加1.8ml 0.85%冷生理鹽水，在冰浴中用IKA T10Basic分散機制成勻漿，離心后取上清；按試劑盒說明在Multiskan MK3酶標儀上測定小鼠血清和肝臟勻漿上清液中MDA、SOD、GSH-Px和TAOC的含量，并測定肝臟勻漿上清液中蛋白含量。

1.3 統計分學析

2 結果

2.1 干預前各高脂組小鼠血清TC水平

干預前，高脂對照組、白藜蘆醇低、中、高組小鼠血清 TC 水平分別為（3.03±0.36），（2.98±0.41），（2.98±0.39），（3.00±0.41）mmol/L，各組間差異無統計學意義（P>0.05）。

2.2 不同劑量白藜蘆醇對小鼠血清MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平的影響

如表1所示，各組小鼠血清中MDA、SOD、GSHPx和T-AOC水平的差異均無統計學意義（P>0.05），但相對于基礎組和高脂對照組，不同劑量的白藜蘆醇干預組均顯示出小鼠血清SOD水平較高的趨勢。

2.3 不同劑量白藜蘆醇對小鼠肝臟MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平的影響

如表2所示，高脂對照組小鼠肝臟MDA水平高于基礎組，各白藜蘆醇干預組MDA水平均低于高脂對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。各組小鼠間SOD、GSH-Px和T-AOC水平無統計學差異（P>0.05）。

3 討論

表2各組小鼠肝臟MD A、S O D、G S H-P x和T-A O C的水平（±s）T a b.2T h e l e v e l s o f MD A，S O D，G S H-P x a n d T-A O Ci n l i v e r i n a l l g r o u p s（±s）Group n MDA（nmol/mg·prot） SOD（U/mg·prot） GSH-Px（U/mg·prot） T-AOC（U/mg·prot）Control 10 2.02±0.381） 118.31±14.87 2004.98±338.32 0.34±0.07High-fat diet control 10 2.92±0.91 117.55±29.46 1707.65±625.87 0.33±0.12Low-dose resveratrol 10 2.05±0.471） 111.52±27.30 1657.87±482.83 0.27±0.09Intermediate-dose resveratrol 10 2.33±0.731） 106.67±37.27 1865.61±175.80 0.36±0.12High-dose resveratrol 10 2.05±0.471） 108.43±23.76 1809.40±507.89 0.38±0.041）P<0.05vs high-fat diet control group.GSH-Px，glutathione peroxidase；SOD，superoxide dismutase；MDA，malondialdehyde；TAOC，total antioxidant capacity.

生理狀態下，機體自由基的產生與清除處于動態平衡中，一旦產生過多而不能及時清除，就會有較多的自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，導致脂質過氧化，從而可能引發動脈粥樣硬化和衰老等。作為一種多酚類物質，白藜蘆醇具有酚羥基結構，是活性氧自由基的清除劑、金屬螯合劑和某些抗氧化酶的調節劑［6］。朱立賢等分別用 30mg·kg-1·d-1和70mg·kg-1·d-1的白藜蘆醇對喂飼高脂高膽固醇飼料的大鼠進行干預，結果表明這兩種干預劑量的白藜蘆醇均能降低大鼠血清MDA水平，還能升高大鼠血清 SOD、過氧化氫酶（catalase，CAT）、GSH-Px和T-AOC水平［7］，但沒有觀察其對肝臟脂質過氧化水平的干預效果。國外有關白藜蘆醇抗脂質過氧化作用的研究多采用鏈脲霉素誘導的糖尿病動物模型［8，9］，因為采用高脂高膽固醇飼料喂飼的方法所需時間較長，但是考慮到后者更接近自然的病理過程，所以本研究觀察了不同劑量的白藜蘆醇對喂飼高脂高膽固醇飼料的小鼠血清及肝臟脂質過氧化水平的影響，結果表明 5、22.5、45mg·kg-1·d-1的白藜蘆醇均降低了小鼠肝臟MDA水平，與Silan和Roghani等［8，9］的研究結果一致。Pfluger等[10］的研究證明，沉默信息調節因子（silent information regulator 1，SIRT1）至少可通過以下兩種機制對高脂膳食誘導的代謝損傷起保護作用：誘導錳-超氧化物歧化酶和核呼吸因子，刺激過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α的表達；并減少促炎細胞因子如腫瘤壞死因子α和白細胞介素6的激活，抑制核因子κB的活性等。而白藜蘆醇是SIRT1的天然激動劑，Ahn等［2］證明，白藜蘆醇可使小鼠肝臟中SIRT1表達增加，所以白藜蘆醇降低小鼠肝臟MDA水平的作用可能是由于它上調了SIRT1表達的結果。MDA是機體脂質過氧化反應的終產物之一，它的降低表明了機體脂質過氧化程度的減弱。本研究結果表明，5～45mg·kg-1·d-1的白藜蘆醇均可抑制高脂高膽固醇飼料導致的小鼠肝臟脂質過氧化，而脂質過氧化是心血管疾病發生發展的一個重要危險因素［1］，本研究結果對心血管疾病的防治可能會產生有益作用。但本研究并未發現白藜蘆醇降低小鼠肝臟MDA水平的作用在5～45mg·kg-1·d-1的范圍內具有劑量依賴性，因此我們認為從抗脂質過氧化作用來看，低劑量的白藜蘆醇（5mg·kg-1·d-1）即是最佳劑量。

［1］Walter MF，Jacob RF，Jeffers B，et al.Serum levels of thiobarbituric acid reactive substances predict cardiovascular events in patients with stable coronary artery disease：a longitudinal analysis of the PREVENT study ［J］.J Am Coll Cardiol，2004，44（10）：1996-2002.

［2］Ahn J，Cho I，Kim S，et al.Dietary resveratrol alters lipid metabolismrelated gene expression of mice on an atherogenic diet ［J］.J Hepatol，2008，49（6）：1019-1028.

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［4］Nakagawa H，Kiyozuka Y，Uemura Y，et al.Resveratrol inhibits human breast cancer cell growth and may mitigate the effect of linoleic acid，a potent breast cancer cell stimulator ［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2001，127（4）：258-264.

［5］徐超，王曉紅，王松濤，等.大豆蛋白和高鈣攝入對高血膽固醇模型大鼠血脂水平的影響 ［J］.中華預防醫學雜志，2001，35（5）：318-321.

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［7］朱立賢，金征宇.白藜蘆醇苷對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響及其抗氧化作用［J］.中成藥，2006，28（2）：260-261.

［8］Silan C.The effects of chronic resveratrol treatment on vascular responsiveness of streptozotocin-induced diabetic rats［J］.Biol Pharm Bull，2008，31（5）：897-902.

［9］Roghani M，Baluchnejadmojarad T.Mechanisms underlying vascular effect of chronic resveratrol in streptozotocin-diabetic rats［J］.Phytother Res，2010，24（Suppl 2）：S148-S154.

［10］Pfluger PT，Herranz D，Velasco-Miguel S，et al.Sirt1protects against high-fat diet-induced metabolic damage ［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2008，105（28）：9793-9798.

（編輯王又冬，英文編輯鄭華川）

Effects of Resveratrol on Lipid Peroxidation in Mice with High Fat and High Cholesterol Diet

REN Ya-hao1，LI Yan-xi2，YU Fei1，ZHAO Yue1，ZHENG Xiao-nan1，WANG Bo-han1，ZHAN Zhi-peng1，YUAN Yuan1，KANG Si-wen1，YANG Jun1
（1.Department of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，China Medical University，Shenyang 110001，China；2.The 90th Class，Seven-Year System，Clinical Medicine，China Medical University，Shenyang 110001，China）

ObjectiveTo study the effects of resveratrol on lipid peroxidation in mice with high fat and high cholesterol diet.MethodsFifty mice were randomly assigned to the following two groups：the mice of control group （n=10）were given a normal diet，and the mice in high-fat diet group（n=40）given high fat diet for 4weeks.And then the mice in high-fat diet group were randomly assigned to the following four groups according to body weight and serum total cholesterol level：high-fat diet control group；low-dose resveratrol group（5mg·kg-1·d-1）；intermediate-dose resveratrol group（22.5mg·kg-1·d-1）；high-dose resveratrol group（45mg·kg-1·d-1）.The resveratrol was dissolved in 0.5%sodium carboxymethyl cellulose and given by intragastric administration.The levels of glutathione peroxidase（GSH-Px），superoxide dismutase（SOD），malondialdehyde（MDA），total antioxidant capacity（T-AOC）were measured after the treatment lasted for 6weeks.ResultsThe MDA levels in high-fat diet control group are higher than those in other groups（P<0.05）.ConclusionResveratrol（5～45mg/kg·d-1） could decrease MDA levels in liver of mice with high fat and high cholesterol diet.

resveratrol；lipid peroxidation；malondialdehyde

R151.3

A

0258-4646（2011）01-0017-03

遼寧省教育廳高校科研計劃項目（2009A720）

任亞浩（1982-），男，助教，碩士.

楊軍，E-mail：yangjun@mail.cmu.edu.cn

2010-10-19