齊墩果酸含量測(cè)定的研究進(jìn)展

李全斌何開勇

（1湖北中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，湖北 荊州 434020；2湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北 武漢 430071）

齊墩果酸(Oleano lic acid)是一種齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物，廣泛存在于青葉膽全草、女貞子果實(shí)、白花蛇舌草等藥用植物中，國(guó)內(nèi)外研究表明齊墩果酸有護(hù)肝、解肝毒、降糖、降脂、治療胃潰瘍、抗炎、抗HIV病毒、抗癌、抗突變、抗氧化、利尿等作用[1-6]。目前許多中藥及其制劑常選用齊墩果酸的含量作為其質(zhì)量控制的指標(biāo)。本文擬對(duì)齊墩果酸含量測(cè)定方法的研究進(jìn)展作一綜述。

1 分光光度法

1.1 可見分光光度法

孫忠文等[7]據(jù)齊墩果酸與5%香草醛-冰醋酸溶液及高氯酸加熱后，再加冰醋酸在548 nm處有最大吸收的特性，建立可見分光光度法測(cè)定齊墩果酸的含量，平均回收率為99.66%，RSD=1.02%(n=5)。周昕等[8]用該法測(cè)定白花蛇舌草注射液中齊墩果酸的含量。

1.2 紫外分光光度法

李必波等[9]用尤尼柯UV-2102PCS型紫外可見分光光度計(jì)，在207 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定齊墩果酸緩釋滴丸的藥物含量，齊墩果酸在20～80μg/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好r=0.9995(n=7)，回收率在98%～102%之間，RSD＜1%(n=3)。鄧世星等[10]在210 nm波長(zhǎng)下，以甲醇作溶劑，用紫外光譜法測(cè)定齊墩果酸含量，齊墩果酸在4～120μg/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r= 0.999 3，平均回收率為99.0%，RSD為0.8%(n=5)。該法簡(jiǎn)便，快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

2 薄層掃描法

楊波等[11]用薄層色譜掃描法測(cè)定黃花敗醬總皂苷膠囊中齊墩果酸的含量。供試品溶液制備如下：取內(nèi)容物，精密稱定，加10%硫酸溶液，于水浴中回流，放冷，置分液漏斗中，用15 m L醋酸乙酯分3次萃取，分取醋酸乙酯層，合并，水浴蒸干，加少量醋酸乙酯溶解殘?jiān)D(zhuǎn)入10m L量瓶中，用醋酸乙酯定容作為供試品溶液。薄層條件：薄層板為含0.3%羧甲基纖維素鈉的硅膠H板，石油醚-醋酸乙酯(3∶1)為展開劑，預(yù)飽和15 min，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，置105℃干燥箱烘約10 m in至呈紫紅色斑點(diǎn)，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定。波長(zhǎng)：λs=530nm，λR=700 nm，SX=3，此系統(tǒng)分離效果好，斑點(diǎn)前后無雜質(zhì)干擾，適于定量分析。該法靈敏，簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確。

3 高效液相色譜法

3.1 HPLC法

萬元松等[12]采用高效液相色譜法用于腸泰顆粒中齊墩果酸的含量測(cè)定。以Kromasil KR100-C18為分離柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺 (85∶15∶0.04∶0.02)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，柱溫20℃，齊墩果酸進(jìn)樣量在在2.04～10.21μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 2，平均回收率為98.60%，RSD=1.76%，方法可靠，簡(jiǎn)單可行。田吉等[13]以KromasilC18為色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，建立楤木及其提取物中齊墩果酸的HPLC含量測(cè)定方法。

3.2 RP-HPLC法

鄒盛勤等[14]采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測(cè)定冬凌草中齊墩果酸的含量。樣品處理基本步驟：將樣品恒溫干燥，粉碎，精密稱取，加95%乙醇溶液超聲提取，冷卻至室溫，濾過，濾渣洗滌2次，合并濾液置50 m L量瓶中，乙醇定容，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，得樣品溶液。色譜柱為NUCLEO.DURC18RP柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(87∶13)，流速0.8 m L/m in，光電二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫25℃，在選定色譜條件下線性范圍良好，齊墩果酸的樣品加樣回收率為98.7%，RSD為0.9%。鄒盛勤等[15]用反相高效液相色譜-光電二極管陣列檢測(cè)器聯(lián)用法對(duì)紫蘇子、白蘇子中的熊果酸和齊墩果酸進(jìn)行了分離和含量測(cè)定，色譜柱為Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-水(87∶13)，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫28℃，流速0.8 m L/m in；齊墩果酸進(jìn)樣量在0.05～2.00μg之間線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為98.7%，RSD為1.2%（n=6）。江鐵軍[16]以固相萃取(SPE)進(jìn)行樣品供試液的前處理，用RP-HPLC法測(cè)定齊墩果酸的含量，用SPE對(duì)供試品溶液進(jìn)行前處理，可有效消除女貞子藥材中雜質(zhì)成分對(duì)末端吸收波長(zhǎng)的干擾，該法靈敏、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

3.3 UPLC法

喻喜華等[17]建立山茱萸藥材中齊墩果酸的超高效液相色譜含量測(cè)定方法。以ACQUITY UPLCTMHSSCl8色譜柱（2.1 mm×100mm，1.8μm），以甲醇-0.1%甲酸水(85∶15)為流動(dòng)相，流速：0.2 m L/m in，檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm，齊墩果酸在0.010～0.500 mg/m L(r=0.999 9)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率分別為100.4%，RSD為1.8%，該法快速，簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確。

3.4 RP-HPLC-MS法

3.5 LC-MS法

楊宜華等[19]用液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法測(cè)定了白花蛇舌草中齊墩果酸含量。色譜柱HypersilODSC18(150mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相甲醇-0.005%冰醋酸(75∶25)，二極管陣列檢測(cè)器，流速0.2 m L/min，柱溫45℃，質(zhì)譜采用大氣壓化學(xué)離子化探頭，選擇性離子流模式(正離子)，齊墩果酸加樣回收率為98.87%，RSD為3.09%，該法快速簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

3.6 HPLC-ELSD法

吳柳春[20]建立三姐妹藥材的TLC鑒別法以及藥材中齊墩果酸和熊果酸的HPLC-ELSD含量測(cè)定法。色譜柱為Shim-pack VP-ODS（4.6mm×250 mm，5μm），甲醇-0.5%醋酸銨(85∶15)為流動(dòng)相，流速1.0 m L/min，Alltech ELSD 2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，用HPLC-ELSD法對(duì)藥材中齊墩果酸和熊果酸進(jìn)行定量。齊墩果酸線性范圍為0.42～2.5μg（r=0.999 8），加樣回收率為98.3%（RSD=1.4%），李文春等[21]用該法測(cè)定紅果槲寄生中齊墩果酸的含量，本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

4 毛細(xì)管電泳法

黃雅燕等[22]用毛細(xì)管電泳法快速測(cè)定齊墩果酸片的含量，未涂層彈性石英毛細(xì)管(75μm×50cm，有效長(zhǎng)度40 cm)，壓力：3.0kPa；進(jìn)樣時(shí)間：5 s；分離電壓：25 kV；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：200 nm；運(yùn)行緩沖液：含5%(體積分?jǐn)?shù))甲醇的20mmol/L硼砂溶液(pH9.4)；運(yùn)行時(shí)間：10min。齊墩果酸的線性范圍為2.58～660μg/m L(r=0.999 7)，平均回收率為99.47%，RSD=1.28%(n=6)。朱培儀等[22]用毛細(xì)管區(qū)帶電泳、高頻電導(dǎo)測(cè)定水線草中齊墩果酸的含量測(cè)定方法：未涂層彈性融硅石英毛細(xì)管柱(55 cm×75μm ID)，有效長(zhǎng)度50cm；以1.2mmol/L三乙胺-鹽酸 (pH10.0)，0.24mmo1/L β-環(huán)糊精為運(yùn)行緩沖液，分離電壓12.5 kV，重力進(jìn)樣10 s (高度20 cm)，布洛芬為內(nèi)標(biāo)。在3.9～39.0μg/m L(r=0.999 1)范圍內(nèi)齊墩果酸的測(cè)定濃度與峰面積積分值的線性關(guān)系良好；平均回收率為96.5%，RSD=1.98%(n=6)。本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，快速，重現(xiàn)性好。

5 其他

齊墩果酸的含量測(cè)定方法很多，較早應(yīng)用的是比色法，但操作復(fù)雜，顯色誤差較大，對(duì)酸性雜質(zhì)無分辨力和選擇性，故近年來應(yīng)用較少；藥典也曾用酸堿非水滴定法測(cè)定含量，但終點(diǎn)不易掌握，專屬性差，誤差較大；有學(xué)者利用齊墩果酸具有旋光性的特點(diǎn)，建立了旋光法測(cè)定齊墩果酸的含量[24-25]，該法準(zhǔn)確、可靠、簡(jiǎn)便、靈敏、快速，但專屬性差；薄層掃描法應(yīng)用較廣泛；高效液相(HPLC)法具備操作快速和準(zhǔn)確性高的優(yōu)勢(shì)，有正在取代其他方法的趨勢(shì)，但以上方法也存在費(fèi)時(shí)長(zhǎng)、儀器價(jià)格貴等問題。隨著含齊墩果酸中藥的指紋圖譜和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面研究的不斷深入，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)方法將會(huì)不斷涌現(xiàn)，齊墩果酸的分離和含量測(cè)定技術(shù)將會(huì)日臻完善，為制劑中齊墩果酸的質(zhì)量控制提供更可靠的依據(jù)。

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