KLF4蛋白在結腸癌組織中的表達及臨床意義

陳 濤 謝黎明

（南華大學附屬第一醫院，湖南 衡陽 421001）

結腸癌是常見的消化道腫瘤之一，隨著人民生活方式、飲食結構的改變，其發病率呈上升趨勢，此趨勢在大中城市較明顯。據我國統計資料估計，我國2005年結腸癌發病數和死亡數分別達17.2萬和9.9萬，嚴重影響人類健康。要治愈和預防結腸癌的發生，關鍵問題是了解結腸的病因及其發病機制[1]。KLF家族（krüppel-1ike factors）是真核生物中廣泛存在的一類基礎轉錄元件結合蛋白（BTEB），KLF4是該家族的一名重要分子[2]。本研究采用免疫組織化學檢測KLF4在結腸癌及癌旁組織中的表達，探討KLF4與結腸癌臨床病理參數之間的關系，為進一步闡明結腸癌發生發展、浸潤轉移的分子機制提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

收集南華大學附屬第一醫院病理科2010至2011年間結腸癌切除標本58例，患者術前均未接受化療及放療。其中男性27例，女性31例；年齡41～79歲，年齡（54±9）歲，Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期21例，有淋巴結轉移17例。所有樣本均按照WHO結腸癌組織學分類及分級標準，并經病理學證實。

1.2 試劑

所用鼠抗人KLF4單克隆抗體購自美國Santa cruz公司，免疫組織化學SP 試劑盒及BAD顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 免疫組織化學染色

所有標本經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μL 厚切片，SP免疫組織化學染色。所用抗KLF4抗體濃度為1∶50，染色步驟按說明書進行。

1.4 結果判定

KLF4陽性結果判定標準：根據染色強度和分布范圍進行半定量處理，以如下標準：根據光鏡下觀察陽性染色的細胞比例（5個高倍視野下的均數） 分為：①陰性（-），染色細胞數少于10%；②陽性（+），染色細胞數在10%～50%；③強陽性（++），染色細胞數多于50%。

1.5 統計學處理

2 結 果

2.1 KLF4在結腸癌及癌旁組織中的表達情況

免疫組織化學結果顯示，58例結腸癌組織中KLF4表達陽性12例，陽性表達率為20.7%，58例癌旁正常組織中KLF4表達陽性44例，陽性表達率75.9%。二者比差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 KLF4表達與的表達與結腸癌臨床病理參數之間的關系

KLF4表達與結腸癌患者性別、年齡、大體類型之間無顯著相關（P＞0.05），KLF4在結腸癌不同的臨床分期中的表達分別是Ⅰ期4/9（44.4%），Ⅱ期4/13（30.8%），Ⅲ期2/15（13.3%），Ⅳ期2/21（9.5%），分別與癌旁對照組比差異均有統計學意義（P＜0.05）；KLF4在有無淋巴結轉移中陽性表達分別為2/17（11.8%），10/41（24.4%），二者比差異有統計學意義（P＜0.01）。

3 討 論

KLF家族是真核生物中一大類基礎轉錄因子（BTEB）[2]，最早發現于果蠅胚胎中的發育調控因子Krüppel，具備羧基端三個串連的Cys2His2類型的鋅指結構，負責結合靶基因富含Gc的啟動子序列，促進或抑制靶基因的表達，參與早期胚胎發育、癌癥形成以及血管形成及其病理發生，進而影響細胞的各種代謝途徑。KLF4是典型的KLF因子參與的轉錄激活作用，在平滑肌細胞（SMC）分化過程中，KLF4可以抑制血清反應因子的表達及其和SMC基因啟動子的結合，進而抑制SMC的分化，也可通過結合SMC細胞中的肌動蛋白基因啟動子中TCE元件來抑制SMC基因過表達，還可以促進PDGF-BB的表達。研究發現在癌變膀胱上皮細胞中，KLF4表達下調，而過表達KLF4后，癌變膀胱上皮細胞的生長被抑制，說明KLF4的表達下調和膀胱癌的發生相關[3]。

本研究運用免疫組織化學檢測KLF4在結腸癌和癌旁組織中的表達水平變化，以及KLF4表達與結腸癌的臨床分期以及淋巴結轉移之間的關系。結果表明，KLF4在結腸癌組織中陽性表達率達20.7%，而在相應癌旁對照組織中陽性表達率為75.9% （P＜0.01），隨著結腸癌的臨床分期演進KLF4表達逐漸降低，且有淋巴結轉移的KLF4表達明顯低于無淋巴結轉移組。提示KLF4可能作為腫瘤抑癌基因參與結腸癌的發生發展，與結腸癌臨床分期、淋巴結轉移密切相關，可能成為結腸癌潛在的治療靶點和預后判斷提供了更有力的實驗證據。

[1]廖前進,蘇堅,何潔,等.二烯丙基二硫對人結腸癌SW480細胞周期的阻滯作用[J].癌癥,2009,28(2):138-41.

[2]Yang HW,Xia T,Chen ZL,et al.Cloning,chromosomal localization and expression patterns of porcine Kruppel-like factors 4,-5,-7 and the early growth response factor 2[J].Biotechnol Lett,2007.29(1):157-163.

[3]Ohnishi S,Ohnami S,Laub F,et al.Downregulation and growth inhibitory effect of epithelial-type Kruppel-like transcription factor KLF4,but not KLF5,in bladder cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2003,308(2):251-256.