流式細(xì)胞術(shù)和腫瘤標(biāo)志物在婦科腫瘤早期診斷中的研究進(jìn)展

蔡元菊 黃文波 馬占忠

（1 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)系，廣東 韶關(guān) 512026；2 汕頭大學(xué)附屬粵北人民醫(yī)院醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 韶關(guān) 512026）

目前，婦科腫瘤的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且出現(xiàn)年輕化趨勢(shì)[1]。其中卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌是最常見的三大婦科惡性腫瘤，已成為嚴(yán)重威脅婦女生命的主要頑癥，其主要原因是早期診斷困難及高復(fù)發(fā)率，特別是卵巢癌在婦科惡性腫瘤中的病死率最高，其發(fā)病隱匿，約70%～80%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期，5年存活率僅為20%～30%，而早期卵巢癌患者的生存率可達(dá)90%。因此，提高腫瘤的早期診斷水平、爭取有利的治療時(shí)機(jī)、對(duì)改善預(yù)后尤為重要。

長期以來，組織病理學(xué)檢查一直作為腫瘤診斷的重要手段，但組織病理學(xué)作為形態(tài)學(xué)檢查方法存在檢測(cè)時(shí)間長、主觀性強(qiáng)、陽性率低等缺點(diǎn)，尤其是對(duì)癌前病變和臨界瘤的惡變傾向缺乏有效判斷，常見腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于臨床疾病診治，但因其特異性不高，敏感性差，至今沒有一種腫瘤標(biāo)志物能完全滿足臨床需求。尋找早期診斷婦科惡性腫瘤的檢測(cè)方法，一直是婦科臨床所面臨的主要任務(wù)，它對(duì)于早期診治和預(yù)后評(píng)估有著極為重要的意義。近年來，流式細(xì)胞術(shù)作為新技術(shù)在腫瘤診斷中也取得了一定的進(jìn)展，它們?cè)谀[瘤早期診斷中展示了良好的應(yīng)用前景。

1 腫瘤標(biāo)志物在婦科腫瘤診斷中的應(yīng)用

腫瘤標(biāo)志物是與腫瘤的生長密切相關(guān)的一組蛋白質(zhì)，是腫瘤細(xì)胞分泌或脫落到體液或組織中的物質(zhì)，也有一部分是宿主對(duì)體內(nèi)寄生物反應(yīng)后產(chǎn)生的物質(zhì)。近年來，應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物監(jiān)測(cè)惡性腫瘤的生長狀況是腫瘤診斷學(xué)上的巨大進(jìn)步。

1.1 癌胚抗原125（cancer antigen 125，CA125）

CA125 是卵巢上皮性癌最常用的腫瘤標(biāo)記物，在Ⅰ期卵巢上皮性癌患者中只有50 %～60 %為陽性，Ⅱ～Ⅳ期在80%以上。且存在一定假陽性。雖然CA125升高較臨床上能檢查到腫瘤通常要早3～6個(gè)月，但其在卵巢癌篩查中的價(jià)值尚未肯定，因此CA125不能單獨(dú)用于卵巢癌篩選或早期診斷。CA125在卵巢漿液性上皮性癌、卵巢上皮性交界性腫瘤、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌中均有升高，存在一定假陽性[2]。臨床多用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，血清CA125參考值為＜35 U/ml。Moss 等[3]對(duì)799 例接受過血清CA125 測(cè)定的患者進(jìn)行回顧性研究表明其在卵巢癌早期患者中CA125升高者僅占20%。因此是否適用于卵巢癌早期診斷有待于進(jìn)一步研究。

1.2 癌胚抗原（carcinoembryonic，CEA）

CEA是一種酸性糖蛋白，編碼基因位于19號(hào)染色體，是由29個(gè)分離基因組成的基因家族。臨床常用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，血清CEA的參考值為＜3.4ng/mL。CEA對(duì)卵巢上皮性腫瘤較敏感，特別是在卵巢黏液性腫瘤時(shí)的陽性率為32.5%，是診斷卵巢黏液性腫瘤較好的標(biāo)志物，血清CEA水平與卵巢腫瘤手術(shù)分期、組織學(xué)分級(jí)、病理學(xué)類型及患者預(yù)后均呈正相關(guān)。CEA也可做為子宮內(nèi)膜癌組織分級(jí)及早期診斷復(fù)發(fā)的一項(xiàng)標(biāo)志物，特別是與CA125聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，對(duì)子宮內(nèi)膜癌診斷、評(píng)價(jià)患者預(yù)后等方面均有較大意義[4]。

1.3 甲胎蛋白（alpha-feto protein，AFP）

AFP是由胚胎的卵黃囊和不成熟肝細(xì)胞合成的一種血清糖蛋白。正常情況下，主要在胎兒組織中存在。肝癌時(shí)血清AFP明顯升高。生殖腺胚胎性腫瘤血清AFP水平也升高。血清AFP參考值為＜5.8IU/mL。婦科常用血清AFP作為卵巢胚胎性腫瘤的標(biāo)志物。

1.4 人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）

HCG為一種糖蛋白激素，在正常妊娠時(shí)由胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生，非孕期多為腫瘤產(chǎn)生。由α、β兩個(gè)亞基組成，其β亞基具有較高特異性，β-HCG是各種腫瘤標(biāo)志物中敏感性和特異性最高的一種，對(duì)卵巢原發(fā)性絨癌、胚胎癌具有特異性診斷價(jià)值。

另外，CA19-9、CA72-4、CA50等腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)也已廣泛應(yīng)用于臨床，在疾病診治中提供了一定幫助，但因單獨(dú)檢測(cè)某一項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物其特異性不高，敏感性差，即使治療后仍然有腫瘤生長，也有可能因?yàn)閱雾?xiàng)檢測(cè)的局限性而不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)。至今沒有一種腫瘤標(biāo)志物能完全滿足臨床要求。聯(lián)合檢測(cè)多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的方法來提高對(duì)腫瘤的檢出率、特異性和敏感性，并在治療后對(duì)患者的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)也可以及早發(fā)現(xiàn)治療措施的合適與否，及時(shí)提醒醫(yī)師對(duì)其做出恰當(dāng)處理，為患者贏得寶貴的治療時(shí)間和治療機(jī)會(huì)。但婦科領(lǐng)域的腫瘤標(biāo)志物甚多，敏感性及特異性各異，采用何種聯(lián)合檢測(cè)方式才是最經(jīng)濟(jì)、最實(shí)用的仍值得深入研究和探討。

2 流式細(xì)胞術(shù)在婦科腫瘤診斷中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM） 是20 世紀(jì)70 年代發(fā)展起來對(duì)單細(xì)胞定量分析的一種新技術(shù)。它借鑒了熒光標(biāo)記技術(shù)、激光技術(shù)、單抗技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，具有極高的檢測(cè)速度和統(tǒng)計(jì)精確性，而且從單一細(xì)胞可以同時(shí)測(cè)得多個(gè)參數(shù)，為生物醫(yī)學(xué)與臨床檢驗(yàn)提供了一個(gè)全新視角和強(qiáng)有力手段。隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展，流式細(xì)胞術(shù)已廣泛應(yīng)用在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐的各個(gè)方面。在細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)及臨床檢驗(yàn)學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)發(fā)揮著重要的作用。目前，流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用主要集中在免疫功能檢測(cè)、腫瘤早期診斷、預(yù)后評(píng)估和多藥耐藥基因相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)等方面。

2.1 在腫瘤早期診斷中的應(yīng)用

FCM 對(duì)DNA、RNA 含量及細(xì)胞周期的分析具有獨(dú)到之處，人體正常的體細(xì)胞均有較恒定的DNA 二倍體含量，細(xì)胞癌變過程中伴隨細(xì)胞DNA 含量的改變，DNA 非整倍體細(xì)胞是惡性腫瘤的特異性標(biāo)志。根據(jù)DNA 分布直方圖，可對(duì)細(xì)胞周期的分布狀態(tài)進(jìn)行分析，計(jì)算出G0/ G1期、S 期和G2/M期的比率并了解細(xì)胞的增殖能力。在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S 期比率（S-phase fraction，SPF） 作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標(biāo)。此外，DNA 指數(shù)（DI）對(duì)腫瘤的早期診斷、鑒別診斷、判斷預(yù)后及評(píng)價(jià)療效有重要意義。大量研究表明：癌前病變的癌變率與病變的增生程度一致，而增生程度與DNA 含量的異常改變又呈平行關(guān)系。FCM 通過精確定量DNA 含量，能對(duì)癌前病變的性質(zhì)和發(fā)展趨勢(shì)作出判斷，有助于癌前病變的早期判斷。

黃紅梅等[5]用細(xì)胞DNA定量分析宮頸癌及早期癌前病變發(fā)現(xiàn)DNA定量分析方法在篩查宮頸病變的敏感性為86%，特異性為71%；而常規(guī)細(xì)胞學(xué)方法則為57%和91%。黃宏思等[6]將l 206例婦科檢查分別采用傳統(tǒng)宮頸細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞DNA倍體分析進(jìn)行宮頸早期病變篩查，結(jié)果顯示DNA 倍體分析宮頸上皮內(nèi)瘤樣變檢出率為82.22%，明顯高于傳統(tǒng)宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，證實(shí)DNA 倍體分析是早期篩查宮頸癌和癌前病變敏感而準(zhǔn)確的方法。

FCM對(duì)宮頸癌的早期診斷較之形態(tài)學(xué)方法更為敏感、準(zhǔn)確，它可以測(cè)得正常細(xì)胞與異常細(xì)胞間的微小差異，在形態(tài)學(xué)還不能作出確診癌變之前，使從DNA 定量的分子水平進(jìn)行超早期癌變?cè)\斷成為現(xiàn)實(shí)。因此，F(xiàn)CM在腫瘤的早期診斷中有很好的應(yīng)用前景。

2.2 作為判斷良惡性腫瘤的輔助診斷指標(biāo)

目前，組織病理學(xué)進(jìn)行腫瘤良惡性分級(jí)時(shí)，切片的厚度可以影響計(jì)數(shù)結(jié)果，視野的人為選擇更可使計(jì)數(shù)結(jié)果相差倍之多，組織切片計(jì)數(shù)的有絲分裂指數(shù)作為衡量細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)的不準(zhǔn)確性，足以影響到腫瘤良惡性的判斷。另外，通過病理學(xué)尚不能證實(shí)為惡性的交界瘤，經(jīng)FCM檢測(cè)出DNA 非整倍體細(xì)胞時(shí)可考慮為惡性腫瘤，而病理學(xué)認(rèn)為良性的腫瘤經(jīng)流式細(xì)胞儀測(cè)出非整倍體則提示有惡性轉(zhuǎn)變的可能。流式細(xì)胞術(shù)對(duì)腫瘤組織進(jìn)行細(xì)胞周期分析作為增殖指標(biāo)，較全面了解細(xì)胞增殖情況，用于評(píng)價(jià)不典型、惡性腫瘤的侵襲性已得到許多學(xué)者的認(rèn)可。

2.3 DNA 異倍體與惡性腫瘤預(yù)后的關(guān)系

國內(nèi)外大量病理和臨床資料已證明：腫瘤細(xì)胞倍型異常是惡性腫瘤的特征之一，用FCM分析DNA 含量和DNA 倍體及S 期分析對(duì)腫瘤的惡性程度判定、治療方案選擇、預(yù)測(cè)預(yù)后具有重要價(jià)值。通常認(rèn)為，較高的S 期比率和非整倍體的腫瘤惡性程度高、預(yù)后差、復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移和病死率均較高，而二倍體或近二倍體腫瘤預(yù)后則較好[7]。

相信通過新技術(shù)的轉(zhuǎn)化應(yīng)用能找出檢出率高、特異性強(qiáng)和敏感性高的生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，為婦科腫瘤的早期診治和預(yù)后評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

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