替米沙坦對高脂喂養大鼠血清NO及iNOS的影響

葛 進 鄭喜蘭 雒 瑢 田鳳石

NO是一種重要的病理生理因子，一氧化氮合酶（NOS）是NO合成過程中的關鍵酶,分為構成型一氧化氮合酶（cNOS）和細胞因子誘導型一氧化氮合酶（iNOS）。iNOS在靜息細胞內不表達，當細胞受到細胞因子或免疫微生物刺激時，iNOS將催化合成非生理濃度的大量NO，過多的NO通常伴隨有炎癥、免疫紊亂及動脈粥樣硬化等[1]。本實驗旨在觀察替米沙坦對高脂喂養的OLETF大鼠血清NO和iNOS的影響，探討NO及NOS在糖尿病合并高脂血癥的動脈粥樣硬化中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級LETO雄性大鼠12只和OLETF雄性大鼠20只，均4周齡，體質量150～200 g，均購自日本大冢制藥有限公司。大鼠標準飼料、高脂飼料由中國醫學科學院放射科研究所提供。標準飼料配方為玉米粉34%、大麥粉30%、麩皮18%、豆粕12%、骨粉4%、酵母1%、植物油0.5%、鹽0.5%。高脂料配方為60%標準飼料，蛋黃粉10%、豬油12%、無糖全脂奶粉12%、蔗糖4%、水2%。

1.2 模型制備與分組 32只大鼠均適應性喂養4周，分籠喂養（2～4只/籠），自由攝水，明暗周期為12 h（7：00～19：00），溫度控制在（23±2）℃，相對濕度（55±5）%。OLETF大鼠8周開始高脂喂養，自由獲取食物和水，22周將OLETF大鼠隨機分為2組，每組10只：高脂組（O組），繼續給予高脂喂養；用藥組（L組），給予高脂飼料喂養的同時，給予替米沙坦5 mg/（kg·d）[2]。12只LETO大鼠飼以標準飼料，為對照組（NC組）。采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定3組大鼠的游離脂肪酸（FFA）、單核細胞趨化蛋白（MCP）-1、NO、NOS及iNOS。

1.3 統計學方法 采用SPSS 11.0統計軟件，符合正態分布的計量資料以±s表示。多組間比較采用單因素方差分析，進一步組間比較用LSD-t法，相關分析采用Spearman相關，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組間NO、NOS、iNOS、FFA及MCP-1的比較 O組較L組NO升高（P=0.011），較NC組上升，但差異無統計學意義（P=0.075）。各組間NOS、iNOS差異無統計學意義（P＞0.05）。O組FFA及MCP-1明顯高于NC組，L組較O組FFA及MCP-1顯著下降，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組大鼠血清NO、NOS及iNOS等比較（±s）

表1 各組大鼠血清NO、NOS及iNOS等比較（±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 n NC組（1）O組（2）L組（3）F P（1）∶（2）（1）∶（3）（2）∶（3）12 10 10 NO（μmol/L）4.85±2.35 6.42±2.00 4.04±1.26 3.883＊0.075 0.349 0.011 NOS（U/mL）15.55±11.31 16.60±14.23 18.43±8.65 0.830 iNOS（U/mL）10.80±4.53 15.86±4.96 16.65±7.04 0.405 ------FFA（mmol/L）2.53±1.59 5.31±1.84 2.85±0.68 165.266＊＊＜0.001 0.156＜0.001 MCP-1（ng/L）33.85±8.92 43.90±6.73 34.65±7.60 5.223＊0.006 0.814 0.014

2.2 NO及iNOS與MCP-1、FFA相關分析結果 NO與MCP-1、FFA均呈正相關（r分別為0.510和0.499，均P＜0.05），iNOS與MCP-1、FFA無相關性（r分別為-0.012和0.365，均P＞0.05）。

3 討論

NO具有免疫調節、神經傳遞、血壓生理調控和抑制血小板凝聚等生理功能。但NO濃度持續增高會對機體造成危害[3]。大量NO與超氧陰離子反應產生較高濃度的過氧亞硝酸陰離子（ONOO-），對重要蛋白進行氮化修飾，改變信號途徑，直接和間接介導了NO的細胞毒性效應[4]。此外，多重聯級信號被活化，形成炎癥級聯瀑布反應，將信號波及范圍擴大，推動炎癥發展[5]，造成組織細胞功能和結構的損傷。通常糖尿病被認為是一種慢性炎癥，而高脂喂養大鼠可加重炎癥反應。有研究顯示，在培養的成年小鼠心肌細胞中，由于高糖高脂引起的iNOS大量表達使NO和還原型輔酶Ⅱ（NADPH）氧化酶生成增多，從而使過氧化亞硝基產生增多，引起心肌細胞損傷和凋亡[6]。MCP-1是一種炎性因子，能下調成熟脂肪組織中的脂蛋白脂酶（LPL）及其他脂肪來源基因表達,抑制脂肪細胞對外源性脂質的攝入，促進細胞內脂肪分解,使FFA水平升高，同時促進脂肪組織中炎癥反應的發生，激活核因子（NF）-κB。本研究顯示，高脂喂養的OLETF大鼠NO升高,同時MCP-1及FFA明顯增高，且NO水平與MCP-1、FFA水平呈正相關，而經替米沙坦干預后NO、MCP-1及FFA水平均下降，表明糖尿病合并高脂血癥大鼠存在著明顯的內皮細胞功能受損和動脈內膜的炎癥反應，而經替米沙坦治療后NO顯著降低，FFA及MCP-1亦顯著下降，提示替米沙坦治療可顯著減輕內皮功能損傷和動脈內膜的炎癥反應，與Pan等[7]實驗結果一致。

替米沙坦是一種長效血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑，有研究以為其可能通過阻斷血管緊張素Ⅱ的作用而減少脂肪組織MCP-1的表達；同時替米沙坦還有激活過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）γ的作用[8]，PPARγ的活化使皮下脂肪細胞FFA轉化為三酰甘油，可降低血漿FFA；減輕炎癥，抑制脂肪細胞分泌腫瘤壞死因子（TNF）-α，增強脂聯素分泌；在血管壁細胞有抗炎作用，能減輕動脈硬化病變。亦有研究認為替米沙坦可能通過拮抗血管緊張素Ⅱ引起的NF-κB的活化作用使iNOS生成較少而降低NO水平，從而減輕高濃度NO對機體的損害[9]。NO通過調節NF-κB水平產生一個自動調整作用，低濃度NO時NF-κB水平上升，上調iNOS表達，相反，在高濃度NO時，NF-κB水平和DNA結合活性被抑制，減少iNOS轉錄[10]。本研究中各組NOS和iNOS差異無統計學意義亦可能與此有關。

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