淺談固相萃取

周大慶 許永國 譚培棟 王秀穎 （山東諸城綠安檢測有限公司 262200）

?

淺談固相萃取

周大慶 許永國 譚培棟 王秀穎 （山東諸城綠安檢測有限公司 262200）

固相萃取(SPE)又稱固相分離，在分離純化效果、回收率、重線性等多個方面具有無可比擬的優勢，并在藥物純化、精細化學品制備、食品分析、環境分析、生命科學等多個領域發揮著不可或缺的作用，是常用的凈化方法。

1 固相萃取的組成

固相萃取柱一般由柱體、固定相和濾板三部分組成。固定相是固相萃取柱中最重要的部分，種類較多，最常見的是硅膠基鍵合固定相。固定相又分為正相固定相、反相固定相、離子交換固定相等

正相固定相都是極性的，用來保留(萃取)極性物質，而反相固定相是用來保留(萃取)非極性物質的。對于正相和反相來說，組分在固定相上的保留或洗脫直接與溶劑有關，溶劑的極性決定溶劑的強度。在洗脫被保留組分時，強溶劑的用量比弱溶劑的小。對于正相固定相，溶劑強度隨其極性增加而增加，而對于反相固定相，溶劑強度隨其非極性增加而增加，對于離子交換固定相，更多的取決于溶劑的pH值、離子強度和反離子強度，而與溶劑強度關系不大。

2 固相萃取的操作過程

固相萃取操作過程一般包括活化、上樣、淋洗、洗脫四個步驟。

2.1 活化 指固定相活化，目的是除去柱子內的雜質并創造一定的溶劑環境。通常需要兩種溶劑，第一種溶劑用于凈化固定相，第二種溶劑用于建立一個合適的固定相環境，從而使樣品中的分析物得到適當的保留。每一活化劑的用量約為1~2ml/100mg固定相。活化過程中應避免小柱干涸。活化對凈化效果十分重要，不當的活化經常是導致凈化失敗和產生分析誤差的來源。

2.2 上樣 指預處理的樣品加入到固相萃取柱并通過固定相的過程。這時分析物和一些樣品干擾物會保留在固定相上。流速越低凈化效果越好，但在整個上樣過程中一般采用3~10ml/min(離子交換柱應更低)。流速的穩定性也非常重要，如果流速發生大的變動，特別是對于大體積高流速的情況，將會導致較低的回收率和較差的重復性。要選擇合適的柱容量(柱容量一般為固定相重量的1%~3%)，防止柱穿透。

2.3 淋洗 最大程度的除去干擾物。淋洗溶劑的洗脫強度應略強于或等于樣品溶劑，淋洗溶劑應盡量的強以洗掉盡量多的干擾組分，但不能強到可以洗脫任何一個分析物的程度。淋洗的溶劑體積一般為0.5~0.8ml/100mg固定相。

2.4 洗脫 用小體積的溶劑將被測物質洗脫下來并收集。洗脫溶劑必須進行認真選擇，溶劑太強，一些更強保留的不必要組分將被洗下來；溶劑太弱，就需要更多的洗脫液來洗出分析物，這樣固相萃取的濃縮功效將會大大折扣。洗脫溶劑的用量一般為0.5~0.8ml/100mg固定相。

3 注意事項

離子交換固相萃取在操作過程中還應注意以下幾方面：（1）活化：用不含或含弱反離子的低離子強度的溶劑活化固定相，活化溶劑必須有合適的pH值，從而使固定相和分析物帶上相反電荷。（2）保留：調節樣品液的pH值，使分析物和固定相仍保持離子狀態，樣品液的離子強度和反離子強度要盡可能的低。（3）淋洗：使用不至洗脫分析物的最強溶劑體系進行淋洗，同樣，淋洗溶劑的pH值要保證分析物和固定相仍帶電荷。（4）洗脫：洗脫溶劑的pH值要高于陽離子的pKa或低于陰離子的pKa 2個IU，離子強度和反離子強度都必須高。

另外，在溶劑的選擇上，有的溶劑太強，有的溶劑太弱，可以使用混合溶劑。通過改變互溶性溶劑的比例，使混合溶劑的強度滿足要求。在固相萃取操作過程中，后一種溶劑必須與前一種溶劑互溶。如不互溶，就必須干燥柱床。還有，有時候固體樣品必須用一個很強的溶劑進行提取，這樣是不能直接上樣的，可以先用一個弱溶劑進行稀釋，稀釋到合適的溶劑強度后再上樣。

（2011–05–19）

S8

B

1007-1733(2011)09-0093-02