奧曲肽對兔小梁切除術后瘢痕增殖的影響

劉麗霞，衛玉彩*，楊 濤

（1.河北醫科大學第二醫院眼科，河北石家莊 050000；2.河北省玉田縣醫院眼科，河北玉田 064100）

奧曲肽對兔小梁切除術后瘢痕增殖的影響

劉麗霞1，衛玉彩1*，楊 濤2

（1.河北醫科大學第二醫院眼科，河北石家莊 050000；2.河北省玉田縣醫院眼科，河北玉田 064100）

目的觀察兔小梁切除術中鞏膜瓣下應用奧曲肽（octreotide，OCT）和（或）術前3d點眼對術后濾過道瘢痕增殖的影響，并與絲裂霉素C（mitomycine-C，MMC）作對比。比較2種用藥方式作為青光眼濾過抗瘢痕增殖藥物的安全性及有效性。方法新西蘭大白兔40只隨機分成A、B、C、D、E 5組。各組均行雙眼標準小梁切除術。A組作為空白對照組，僅行標準小梁切除術。B組作為標準對照組，術中切小梁前用蘸有0.2g/LMMC的棉片鞏膜瓣下作用5min。C組，術中切小梁前用蘸有0.1g/LOCT的棉片鞏膜瓣下作用5m in。D組，在行C組處理的同時聯合術前3d 0.1g/LOCT點眼，4次/d。E組，單純術前3d 0.1g/LOCT點眼，4次/d。術后3、7、14、28d時分別觀察眼前節及眼底情況，并每組隨機處死2只兔，取手術區全層眼球壁做組織病理學觀察。結果與A組相比，C、D、E各組均未出現對角膜、結膜以及對視神經和視網膜功能的明顯不良反應。HE染色，術后除第3天，各組增殖均不明顯外，其余各時間點B、C、D、E 4組術后瘢痕的增殖均較A組減輕。濾過泡和濾過道也更明顯。濾過道內增殖程度術后7d時，A＞E＞C＞D＞B組。術后14d時，A＞B＞E＞C＞D組。術后28d時，A＞E＞C=B＞D組。Masson三色染色，各組的增殖程度與HE染色結果一致。PCNA染色，細胞的標記指數，術后7、14d時，C、D、E 3組均低于A組，差異有統計學意義（P＜0.05），術后14d時C、D、E 3組均低于B組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論OCT鞏膜瓣下應用或術前3d局部點眼，能有效抑制手術區域瘢痕的增殖。OCT鞏膜瓣下應用抗瘢痕增殖，遠期效果優于術前3d局部用藥點眼。鞏膜瓣下應用聯合術前3d局部點眼抗增殖作用明顯增強。濃度為0.1g/LOCT與濃度為0.2g/L MMC抗增殖效果相近。OCT局部點眼及鞏膜瓣下應用無明顯不良作用。

奧曲肽；小梁切除術；瘢痕

小梁切除術是目前最常見的青光眼手術方式之一，術后濾過泡的瘢痕化濾過道閉鎖是手術失敗的最主要原因。絲裂霉素C（mitomycine-C，MMC）可以選擇性的干擾DNA的復制，抑制有絲分裂和蛋白的合成，因MMC可明顯提高難治性青光眼小梁切除術的成功率，目前將MMC作為金標準。但是MMC在發揮抗瘢痕作用的同時也產生諸多不良作用。本實驗通過在兔小梁切除中局部應用奧曲肽（octreotide，OCT），以及聯合或單純術前點眼并與MMC做對比，從而探討OCT在小梁切除術中的安全性和有效性。

1 材料與方法

1.1 OCT注射液：由北京四環制藥有限公司提供，規格0.1g/L。

1.2 實驗動物與分組：3.5～4.0個月齡的健康新西蘭大白兔（購自河北省鹿泉市獲鹿鎮六街養殖場）40只，體質量約2.5kg，雌雄不拘，檢查除外眼部疾病，測定術前各指標后，隨機分為A、B、C、D、E 5組，均行雙眼標準小梁切除術。

A組為空白對照組，單純行小梁切除術；B組為標準對照組，術中小梁組織切除前先用蘸有0.2g/L MMC的棉片放置于鞏膜瓣及結膜瓣下5min，然后用生理鹽水100mL充分沖洗；C組術中小梁組織切除前先用蘸有0.1g/L OCT的棉片放置于鞏膜瓣及結膜瓣下5min，然后用生理鹽水100mL充分沖洗；D組術前3d用OCT點眼，0.025mL，4次/d，并聯合應用C組的給藥方式；E組單純術前3d用OCT點眼，0.025mL，4次/d。

1.3 手術方法及術后處理：耳緣靜脈緩慢注射3%戊巴比妥鈉1mL/kg麻醉。愛爾卡因滴眼表面麻醉，15%磺胺醋酰鈉反復沖洗結膜囊，消毒鋪巾，開瞼器開瞼，作以穹窿部為基底的結膜瓣，瓣高約6mm。作以角膜緣為基底4mm×4mm的約2/3鞏膜厚度的鞏膜瓣，前端分離至透明角膜內1mm。在鞏膜瓣下切除約1.5mm×3.0mm角鞏膜緣組織，作虹膜根部切除。用9-0尼龍線縫合鞏膜瓣2針，球結膜切口兩端各縫合1針。

術畢各組均用紅霉素眼膏涂雙眼。用15%磺胺醋酰鈉滴眼液點眼4次/d，連續點3d。

1.4 觀察指標

1.4.1 裂隙燈觀察：各組分別于術后3、7、14、28d行裂隙燈檢查角膜有無混濁、水腫、后彈力層皺褶等。前房情況，觀察前房深淺及有無前房出血、滲出等炎癥反應。觀察有無晶狀體混濁發生。

1.4.2 眼底鏡檢查：觀察有無視網膜出血，滲出，有無視乳頭水腫及脈絡膜脫離等。

1.4.3 組織病理學檢查：經耳緣靜脈行空氣栓塞隨機處死兔2只。摘取眼球，取手術區域全層眼球壁，置于4%多聚甲醛固定液中固定，按常規進行脫水，透明，石蠟包埋，切片。做HE染色觀察濾過道內、濾過泡下、鞏膜表面組織的炎性反應、增殖情況，以及濾過道開放情況。做Masson三色染色，觀察濾過道新生膠原纖維的增殖情況。免疫組織化學方法顯示細胞增殖相關的增殖核抗原（pro1iferative ce11 nuc1eus antigen，PCNA），PCNA陽性者細胞核呈棕黃色，計算濾過道內標記細胞與細胞總數的百分比，即標記指數，從而評價濾過道內細胞的增殖程度。

1.5 統計學方法：應用SPSS13.0軟件進行分析，計數資料以百分率表示，比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 裂隙燈檢查：術后3～7d時，各組手術區結膜均輕度局限充血，14d后充血癥狀均消失。各組在各個時間段均未出現切口感染，亦無結膜切口滲漏。角膜熒光素染色，術后各組角膜都有不均勻著色點出現，與A組相比無顯著加重，考慮與兔子瞬目少有關。各組在各個時間段均未出現角膜水腫、混濁、淺前房，未見浮游物、出血及滲出，無晶狀體混濁出現。

2.2 眼底鏡檢查：各個時間段均未見出血和滲出及視網膜或脈絡膜脫離。

2.3 組織病理學觀察（HE染色，圖1～6）：術后除第3天各組增殖均不明顯外，其余各時間點B、C、D、E 4組術后濾過道內瘢痕的增殖均較A組減輕。濾過泡和濾過道也更明顯。

術后7d時A組濾過泡腔隙消失，鞏膜表面及濾過道區域均可見大量增生的纖維組織，其內可見中量成纖維細胞和炎性細胞及大量成纖維細胞和少量炎性細胞。其余各組濾過泡腔隙存在，濾過道開放，鞏膜表面及濾過道區域B組無明顯細胞增生。C組內可見大量成纖維細胞和少量炎性細胞。濾過道內可見少量炎性細胞和成纖維細胞。D組鞏膜表面可見少量增生的纖維組織，內含中量炎性細胞和成纖維細胞，濾過道區域可見中量增生的纖維組織，內可見中量成纖維細胞和少量炎性細胞。E組結膜下可見大量增生的纖維組織，內含中量炎性細胞和中量成纖維細胞，鞏膜表面增殖較少。濾過道區域可見大量增生的纖維組織，內可見中量成纖維細胞和少量炎性細胞。濾過道內增殖程度，A＞E＞C＞D＞B組。

術后14d時各組增生的纖維組織變得較致密，A組濾過泡腔隙部分閉鎖，鞏膜表面可見中量增生的纖維組織，內有大量成纖維細胞和中量炎性細胞。濾過道接近愈合，纖維組織大部分轉化為膠原組織。B組濾過泡腔隙存在，結膜下與鞏膜之間可見一增生的纖維組織窄帶，其內可見中量成纖維細胞和炎性細胞。鞏膜表面無增生的纖維組織。濾過道殘留階段性腔隙，其余被增生的纖維組織代替，其內可見大量成纖維細胞和少量炎性細胞。C組濾過泡腔隙存在，結膜下與鞏膜之間可見一增生的纖維組織帶，比B組略窄，其內可見大量成纖維細胞和少量炎性細胞。鞏膜表面無增生的纖維組織。可見濾過道的殘留窄腔，其余少量增生的纖維組織被膠原組織替代，其內有中量成纖維細胞。D組濾過泡腔隙存在，鞏膜表面可見少量增生的纖維組織，內含少量炎性細胞和成纖維細胞。可見濾過道階段性被增生纖維組織代替，其內被少量炎性細胞和成纖維細胞填滿。E組濾過泡腔隙存在，鞏膜表面可見一增生的纖維組織窄帶，比B組窄，但比C組略寬，其內可見大量成纖維細胞和炎性細胞。可見濾過道中心留有一個窄腔，周圍大部分被增生的纖維組織代替，內可見少量成纖維細胞和炎性細胞。濾過道內增殖程度，A＞B＞E＞C＞D組。

術后28d時A組濾過泡及濾過道均已閉鎖。其余各組濾過泡腔隙存在，濾過道殘留多個小腔隙。濾過道內增殖程度，A＞E＞C=B＞D組。

2.4 Masson三色染色（圖7，8）：術后3d時各組膠原纖維增生均不明顯。7d時除B組外各組膠原纖維增生均較明顯，均較為纖細、疏松。成纖維細胞較多，按增生多少依次是A、E、D、C組。14d時B、E組有中量的膠原纖維生成，其余各組濾過道區域均為粗大的膠原纖維，與濾過道周圍原有膠原纖維融合。28d時各組濾過道區域均為粗大的膠原纖維，與濾過道周圍原有膠原纖維融合。各組濾過道內增殖程度與HE染色結果一致。

2.5 PCNA染色（圖9，10）：術后各個時間點濾過道內細胞的標記指數見表1，因術后3d時各組濾過道內增殖均不明顯，未予統計。各組總體上在術后7d和14d時差異有統計學意義（P＜0.05），術后7d時A組高于B、C、D、E 4組，差異有統計學意義（P＜0.05），B、C、D、E 4組之間差異無統計學意義（P＞0.05）。術后14d時，A、B 2組高于C、D、E 3組，差異有統計學意義（P＜0.05），A、B 2組之間以及C、D、E 3組之間差異無統計學意義（P＞0.05）。術后28d時，A、B、C、D、E 5組之間差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 術后各個時間點細胞的標記指數Tab le1 The cell label index in all the post operative tim e points（%）

術后觀察各組兔子行雙眼手術未對其進食及二便造成影響。

3 討 論

OCT是一種人工合成的長效生長抑素類似物，可與廣泛存在于人體的生長抑素受體結合產生生物學效應，對人類激素分泌的抑制強度是人類天然的生長抑素的1.3～45倍，研究表明［1］在接受生長激素受體拮抗劑培維索孟治療的肢端肥大癥患者聯合OCT治療能明顯降低血漿中生長激素的水平。OCT對其他腫瘤［2-3］的治療研究也不斷進行，OCT能明顯減輕“淋巴水腫-雙行睫綜合征”患兒水腫癥狀，且無明顯不良作用。近些年OCT的抗增殖作用研究逐步擴展到眼科領域，如治療糖尿病性視網膜病變、增殖性和非增殖性視網膜病變、Graves'眼病［4］、角膜新生血管、視網膜新生血管［5］等。國外已有實驗證實術后OCT 10μg皮下注射或局部點眼，3次/ d，共14d，能減少手術區和結膜下成纖維細胞和巨噬細胞的數目。

組織病理學觀察，HE染色顯示，術后各階段B、C、D、E濾過道均較A組明顯，濾過道內組織細胞的增殖程度亦較A組減輕。B組術后14d、28d增殖程度與C組相近，Masson染色的結果與HE染色一致。PCNA染色顯示C、D、E 3組的細胞標記指數在術后7、14d均小于A組，術后7d時與B組差異無統計學意義，術后14d時小于B組，差異有統計學意義（P＜0.05）。術后28d各組之間差異無統計學意義。說明OCT無論是術中鞏膜瓣下應用還是術前3d點眼對濾過道瘢痕的增殖均有抑制作用。OCT聯合應用比單純術中應用在術后各時間點均顯示出優勢。

A組HE染色術后7d時出現明顯增殖術后14d時濾過道閉鎖，術后28d時濾過泡閉鎖。PCNA染色與增殖相對應術后7d時細胞標記指數最高，術后14d時開始下降，到術后28d時最低。B組術后增殖較少，在術后14d和28d時出現明顯增殖，由此推斷MMC抗增殖作用持續時間大約為2周。C、D、E 3組PCNA染色在術后14d細胞標記指數小于B組，差異有統計學意義，說明OCT的抑制增殖作用持續時間較MMC長。A、B 2組差異無統計學意義，考慮與A組因濾過道愈合細胞增殖出現接觸性抑制，而B組MMC作用開始減弱有關。

Akyo1等［6］用蘸有0.4g/LMMC和0.1g/LOCT等不同藥液的海綿放于兔眼鞏膜瓣下作用2min和5min，術后第14d在手術部位取標本做組織病理學檢查，結果OCT組僅有輕度的非色素上皮細胞內空泡變性和色素上皮細胞的色素脫失，而MMC組非常明顯。有報道［7］OCT治療13例色素膜炎性黃斑水腫20mg臀部肌內注射，1次/月，平均隨訪12.4個月，9眼中有7眼黃斑水腫明顯改善或者痊愈，所有眼的視力得到改善，無有害事件發生，不良反應是胃腸道不適和膽結石。本實驗中裂隙燈和眼底鏡檢查，與A組相比C、D、E各組術后各個時間段均未出現對角膜、結膜以及視神經和視網膜功能的明顯不良反應。

由此可見OCT鞏膜瓣下應用或術前3d局部點眼，均能有效抑制手術區域瘢痕的增殖。前者抗瘢痕增殖遠期效果優于后者，并且聯合應用抗瘢痕增殖效果優于二者單獨用藥。濃度為0.1g/L的OCT與濃度為0.2g/L的MMC抗增殖效果相近。OCT局部點眼及鞏膜瓣下應用不良反應輕微。可見OCT作為濾過手術的一種抗增殖藥物，安全有效。至于當OCT濃度加倍或延長點眼時間時作用效果是否加強，以及不良反應是否出現都還有待于進一步研究。（本文圖見封三）

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（本文編輯：趙麗潔）

EFFECTS OF OCTREOTIDE ON THE SCARRING AFTER TRABECULECTOMY IN RABBITS

LIU Lixia1，WEIYucai1*，YANG Tao2
（1.Departmentof Ophthalmology，the Second Hospital of HebeiMedicial University，Shijiazhuang 050000，China；2.Department of Ophthalmology，the Hospital of Yutian County，Hebei Province，Yutian 064100，China）

ObjectiveTo determine the effectand safety of octreotide（OCT）app1ied under the sc1era1 f1ap and/or as preoperative drops on scarring after trabecu1ectomy in rabbits and compare with mitomycine-C（MMC）.MethodsStandard trabecu1ectomy was carried out by the same surgeon on forty New Zea1and a1bino rabbits，which were random1y divided into five groups.Group A as the b1ank contro1group underwent trabecu1ectomy a1one.In group B，a sponge soaked in MMC was app1ied under the sc1era1 f1ap for fiveminutes before trabecu1ar tissue was excised.MMCwas rep1aced by OCT in group C.Group E received OCT drops qid topica11y for three days before the operation.Group D received the combined treatments of both group C and E.On Post-trabecu1ectomy 3d，7d，14d and 28d，the condition of ocu1ar anterior segments and funduswas observed.Two rabbits in each group were random1y sacrificed and the operation areaswith over1ying conjunctivawere excised tomake histopatho1ogic staining，eva1uatedby 1ightmicroscope.Resu lts Compared with group A，group C，D and E appeared no adverse reaction to neither cornea and conjunctiva nor retina.HE staining showed 3 days after the operation，there was few pro1iferation in the fi1tering passage in five groups but at the other time points the postoperative scarring were a111ightened in group B，C，D and E than that in group A，at the same time the fi1tering b1ebs and the fi1tering passagesweremore obvious than group A too.the pro1iferation 1eve1was：A＞E＞C＞D＞B at 7d，A＞B＞E＞C＞D at 14d and A＞E＞C=B＞D at 28d.Masson immunohistochemistry staining showed the co11agen fiber pro1iferation 1eve1 in a11 the time points was equa1 to HE staining.PCNA immunohistochemistry staining showed compared with group A，the ce11 1abe1 index was significant1y decreased in group C，D and E（P＜0.05），at 7，14d.The ce11 1abe1 index of group C，D，E were 1ower than that of group B at14d（P＜0.05）.ConclusionOCT administration either under the sc1era1 f1ap or as eyedrops before the operation can effective1y reduce scarring after trabecu1ectomy in rabbits.The antipro1iferation effect of OCT administration under the sc1era1 f1ap is better than as eyedrops before the operation.Combination of those twoMethodscan bring enhancement according to the one app1ied under the sc1era1 f1ap.OCT in 0.1g/L p1ayed a simi1ar antipro1iferative ro1e as MMC in 0.2g/L.No obvious1y adverse reactions appeared by OCT administration.

octreotide；trabecu1ectomy；cicatrix

R775.2

A

1007-3205（2011）10-1148-04

2011-05-17；

2011-07-03

劉麗霞（1981-），女，河北玉田人，河北醫科大學第二醫院醫學碩士研究生，從事眼科疾病診治研究。

*通訊作者。weiyc2y@sina.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2011.10.013