聯(lián)合檢測(cè)妊娠相關(guān)蛋白A在化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清人絨毛膜促性腺激素中的應(yīng)用

張文霞，王玉新

（河北省衡水市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北衡水 053000）

聯(lián)合檢測(cè)妊娠相關(guān)蛋白A在化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清人絨毛膜促性腺激素中的應(yīng)用

張文霞，王玉新

（河北省衡水市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北衡水 053000）

目的探討在化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，HCG）中，聯(lián)合檢測(cè)妊娠相關(guān)蛋白A（pregnancy associated p1asma protein-A PAPP-A），以避免假陽(yáng)性及假陰性的價(jià)值。方法收集膠體金早早孕試驗(yàn)為弱陽(yáng)性的89例患者血清，用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定未稀釋及1∶500倍稀釋的HCG水平；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-1inked immunosorbentassay，ELISA）檢測(cè)PAPP-A。結(jié)果化學(xué)發(fā)光法未稀釋及稀釋500倍后的結(jié)果，在檢測(cè)值高于試劑檢測(cè)限時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；有1例因后帶效應(yīng)產(chǎn)生了假陰性，PAPP-A檢測(cè)結(jié)果驗(yàn)證陽(yáng)性；4例HCG結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)本，PAPP-A檢測(cè)結(jié)果為陰性，加入中和試劑后，HCG結(jié)果變?yōu)殛幮裕瑸槭犬愋钥贵w的干擾。結(jié)論對(duì)于膠體金早早孕試紙初篩為弱陽(yáng)性的標(biāo)本，可采用PAPP-A與HCG聯(lián)合檢測(cè)的方法，避免漏診及誤診。

絨毛膜促性腺激素；胎盤催乳激素；化學(xué)發(fā)光測(cè)定法

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，HCG）是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室常用的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)。在臨床檢驗(yàn)工作中，經(jīng)常在用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定HCG前，先用膠體金早早孕試紙初篩，以判斷是否需要稀釋及大致稀釋倍數(shù)。而對(duì)于膠體金早早孕試紙篩選為弱陽(yáng)性的標(biāo)本，化學(xué)發(fā)光法容易存在假陽(yáng)性及假陰性的問題。采用妊娠相關(guān)蛋白A（pregnancy associated p1asma protein-A，PAPP-A）與HCG聯(lián)合檢測(cè)的方法，可提高HCG檢測(cè)的靈敏度，避免漏診及誤診。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2007年7月—2010年12月門診和住院孕婦的血液標(biāo)本，且用早孕試紙初篩為弱陽(yáng)性的血清標(biāo)本89例，年齡18～41歲，平均36歲。

1.2 試劑與方法

1.2.1 膠體金早早孕試驗(yàn)：空腹抽取3mL血液，離心后取血清。將試紙有箭頭一端插入血清中，5s后取出平放，5min之內(nèi)觀察結(jié)果。檢測(cè)線出現(xiàn)紅色，且較對(duì)照線位置紅色反應(yīng)線顏色淡為弱陽(yáng)性。檢測(cè)早早孕試紙由藍(lán)十字生物藥業(yè)（北京）有限公司提供。

1.2.2 化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定HCG：儀器為德國(guó)Lumino化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑盒購(gòu)自深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程公司。檢測(cè)限為2 000U/L。我室化學(xué)發(fā)光免疫法正常參考范圍為＜5U/L，測(cè)定結(jié)果＜5U/L判為陰性、≥5U/L判為陽(yáng)性。本試劑采用單克隆抗體標(biāo)記，抗體血清來源為小鼠，能同時(shí)檢測(cè)血清中的全分子HCG及游離的β-HCG，且不與促黃體生成素、卵泡刺激素、促甲狀腺激素發(fā)生交叉反應(yīng)。將收集到的血清同時(shí)檢測(cè)未稀釋及稀釋500倍時(shí)的HCG水平，稀釋后血清檢測(cè)值需乘稀釋倍數(shù)500，得到檢測(cè)值。

1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)PAPP-A：PAPP-A的檢測(cè)使用荷蘭-雷勃MK-3酶聯(lián)檢測(cè)儀，試劑盒購(gòu)自美國(guó)Association Gene公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

未稀釋血清HCG陰性8例，稀釋500倍后，陰性結(jié)果為7例，另1例為高檢測(cè)值（7 435～7 648U/ L），是因后帶效應(yīng)產(chǎn)生了假陰性。PAPP-A驗(yàn)證了這一結(jié)果，即陰性結(jié)果7例，另1例為強(qiáng)陽(yáng)性（18.49U/L）。未稀釋血清HCG陽(yáng)性81例，未稀釋及稀釋500倍后的結(jié)果在高于檢測(cè)限組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），低于檢測(cè)限組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

未稀釋血清HCG陽(yáng)性81例，PAPP-A結(jié)果陰性4例，其余均為陽(yáng)性。4例PAPP-A陰性的標(biāo)本，加入本試劑所來源的小鼠血清（中和試劑）后，重新檢測(cè)HCG，結(jié)果變?yōu)殛幮浴ＷC明為嗜異性抗體引起的假陽(yáng)性。

表1 未稀釋及稀釋500倍后血清HCG陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果Table 1 Positive Results of HCG for undiluted and 1∶500 diluted serum

3 討 論

HCG主要是在妊娠期由胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的糖蛋白，在滋養(yǎng)細(xì)胞疾病時(shí)因滋養(yǎng)細(xì)胞高度增生，也可產(chǎn)生大量的HCG。在人的血液中存在多種形式，除包括同時(shí)含有一分子α亞基和一分子β亞基的完整的HCG分子（稱為全分子HCG又稱為整分子HCG、規(guī)則HCG）外，還有其他幾種不同形式的HCG分子，如糖基化HCG、缺刻HCG、β-亞基C末端肽缺失HCG、游離-β亞單位、游離-α亞單位等。不同的試劑由于使用的抗體和結(jié)合位點(diǎn)不同，故對(duì)不同HCG分子檢測(cè)的側(cè)重不一樣［1］。金標(biāo)試紙條法操作簡(jiǎn)便、快速，在臨床檢驗(yàn)工作中，經(jīng)常是在用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定HCG前，先用膠體金早早孕試紙初篩，以判斷是否需要稀釋及大致稀釋倍數(shù)。對(duì)于金標(biāo)試紙條檢測(cè)為弱陽(yáng)性的標(biāo)本，可能會(huì)因本身方法學(xué)原因，受到非HCG分子的影響，或因?yàn)槟承┰驒z測(cè)到其他無活性的HCG分子造成假陽(yáng)性。另外，金標(biāo)試紙條初篩為弱陽(yáng)性的標(biāo)本，化學(xué)發(fā)光法更容易出現(xiàn)假陽(yáng)性及假陰性的問題。當(dāng)血清中HCG濃度過高時(shí)，會(huì)出現(xiàn)高濃度后帶現(xiàn)象（“鉤狀效應(yīng)”），此時(shí)免疫反應(yīng)被明顯抑制，測(cè)定結(jié)果偏低，甚至出現(xiàn)假陰性。要消除此干擾，只有對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后重新測(cè)定［2］。本研究中有1例在未稀釋時(shí)HCG表現(xiàn)為陰性，稀釋500倍后為強(qiáng)陽(yáng)性；另外，在檢測(cè)值高于試劑檢測(cè)限時(shí)，未稀釋及稀釋后的檢測(cè)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，正是印證了這一說法。同時(shí)，因受嗜異性抗體及交叉污染的影響，結(jié)果可呈假陽(yáng)性。人嗜異性抗體是指源于其他種類動(dòng)物的蛋白產(chǎn)生反應(yīng)的人類抗體。據(jù)報(bào)道［3］經(jīng)常與動(dòng)物密切接觸的人群，其血中存在嗜異性抗體的可能性比較大。而要判斷是假陽(yáng)性或者是假陰性，或者對(duì)樣本進(jìn)行稀釋，或者加入中和試劑后重新進(jìn)行檢測(cè)，既費(fèi)時(shí)又浪費(fèi)試劑。PAPP-A是一種與妊娠相關(guān)聯(lián)的大分子糖蛋白，是由胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞和蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生的巨球蛋白，從妊娠第5周即可檢測(cè)到，且隨孕周的增加，其含量逐漸升高，孕末期達(dá)高峰，產(chǎn)后下降。PAPP-A在早期配子的發(fā)育、孕卵的著床、妊娠的維持以及胎兒和胎盤的生長(zhǎng)、發(fā)育等諸方面均起著至關(guān)重要的作用［4］。同時(shí)，有研究發(fā)現(xiàn)［5］，PAPPA檢測(cè)可能早期診斷良、惡性葡萄胎，并有助于早期預(yù)測(cè)葡萄胎惡變。ELISA法檢測(cè)PAPP-A快速（1h左右）、簡(jiǎn)單，試劑、設(shè)備價(jià)格低廉，可在基層推廣。本研究表明，ELISA法檢測(cè)PAPP-A與化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HCG聯(lián)合使用，可提高HCG檢測(cè)的靈敏度和特異性，避免漏診及誤診，是一種值得推廣的方法。

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［2］吳健民.影響腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的因素［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28（4）：352-354.

［3］林敏，農(nóng)天雷.人絨毛膜促性腺激素檢測(cè)及臨床應(yīng)用［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（4）：281-282.

［4］楊萍，王英紅.妊娠相關(guān)血漿蛋白-A、孕激素水平在異位妊娠和稽留流產(chǎn)早期診斷中的價(jià)值［J］.中國(guó)婦幼保健，2010，25（34）：5051-5053.

［5］方靜，茍文麗.妊娠相關(guān)血漿蛋白A對(duì)妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病診斷及預(yù)后價(jià)值的探討［J］.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2007，23（2）：129-130.

（本文編輯：趙麗潔）

STUDY ON APPLICATION OF DETECTING PREGNANCY ASSOCIATED PLASMA PROTEIN-A IN CHEM ILUM INESCENCE DETECTION OF HUMAN CHORIONIC GONADOTROPH IN

ZHANGWenxia，WANG Yuxin
（Department of Laboratory，the Fourth People’s Hospital of Hengshui City，Hebei Province，Hengshui053000，China）

Ob jective To exp1ore the va1ue of detecting pregnancy associated p1asma protein-A（PAPP-A）in chemi1uminescence detection of human chorionic gonadotrophin（HCG）.MethodsEighty-nine weak positive serum caseswith ear1y pregnancy test paperwere co11ected to detect the va1ue of HCG for undi1uted and 1∶500 di1uted serum particu1ar1y by chemi1uminescence，and the va1ue of PAPP -A by enzyme-1inked immunosorbent assay（ELISA）.ResultsThe resu1ts of HCG for undi1uted and 1：500 di1uted serum were apparent1y differentwhen the va1ueswere outside of the test1imit（P＜0.05）；One fa1se negative case occurred because of the post banding effect，which was verified by the resu1t of PAPP-A；For the 4 HCG positive cases，the resu1ts of PAPP-A were negative.After putting neutra1ization reagent in the serum，the resu1ts of HCG appeared to be negative.ConclusionFor the weak positive caseswith ear1y pregnancy test paper，combined detection of PAPP-A and HCG can avoid missed diagnosis and misdiagnosis.

chorionic gonadotrophin；p1acenta11actogen；1uminescence

R446.62

A

1007-3205（2011）10-1169-03

2011-04-08；

2011-06-04

張文霞（1973-），女，河北衡水人，河北省衡水市第四人民醫(yī)院主管技師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事化學(xué)發(fā)光免疫學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2011.10.020