甲硝唑氯化鈉注射液中甲硝唑的含量測定(HPLC)

王麗波 任德娟 吳保深

(四平巨能藥業有限公司 吉林 四平 136000)

甲硝唑氯化鈉注射液屬于抗厭氧菌、抗滴蟲藥[1]。治療滴蟲性陰道炎,細菌性陰道病[2]。采用高效液相色譜法對甲硝唑進行含量測定。同時分別按處方、制法制備陰性對照,結果如下。

1 儀器與試藥

大連依利特UV-230+的高效液相色譜儀,P230泵,EC-2000色譜工作站。甲醇為一級色譜純。甲硝唑氯化鈉注射液是四平巨能藥業有限公司生產的產品,批號是A1010008、A1010009、A1010010。甲硝唑對照品購于中國藥品生物料制檢定所,批號是100191-200305。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱是C18(250mm×4.6mm,5μm(Agi1entXDB);流動相:以甲醇-水(20∶80)為流動相;檢測波長:320nm;流速:1.2mL/min。

2.2 系統適用性試驗

按上述的色譜條件,取甲硝唑對照品適量,加流動相定量稀釋制成每1mL中含甲硝唑0.25mg的溶液。精密量取10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,理論板數按甲硝唑峰計算不低于2000,實際塔板數是37129.38n/m,保留時間是7.53min。

2.3 線性關系測定

精密稱取甲硝唑對照品適量,加0.9%氯化鈉溶液溶解并定量稀釋制成每1mL中含甲硝唑0.25mg的溶液,分別精密量取1、5、10、15、20μL注入液相色譜儀,分析測定峰面積,以進樣量為橫坐標,以峰面積為縱坐標,作圖,得回歸方程:Y=677.17x-111.23,相關系數R=0.9999,結果表明進樣量與峰面積呈良好的線性關系。見線性關系(圖1)。

2.4 精密度試驗

取上述2.2項對照品溶液,按上述色譜條件測定,精密量取20μL注入液相色譜儀,連續進樣6次,峰面積分別是8658.96、8637.00、8643.14、8617.24、8633.92、8625.02,RSD值為0.08%。

2.5 回收率試驗:

供試品溶液的制備:取0.9%氯化鈉溶液9份,3份為一組,分別添加甲硝唑對照品,添加量分別為80%、100%、120%,按含量測定法項下制備供試品溶液。

分別精密吸取對照品溶液20μL與供試品溶液20μL,注入色譜儀,按上述色譜條件進行測定,計算甲硝唑的含量,平均回收率是99.8%,RSD是0.33%。

2.6 穩定性試驗

將同一供試品溶液在室溫下放置,每間隔2h測試1次,在上述色譜條件下,測定峰面積,其RSD值為0.11%,結果表明樣品在8h內穩定。

2.7 重復性試驗

取同一供試品5份進行重復性試驗,按含量測定項下方法制備供試品溶液,計算甲硝唑含量,其RSD為0.09%。

2.8 專屬性試驗

2.8.1 強光照射試驗 將供試品放在照度為(4500±500)1x的光照箱內放置10d,于第5天和第10天取樣,按含量測定項下方法制備供試品溶液,照上述色譜條件測定峰面積,其RSD值為0.12%。

2.8.2 高溫試驗 將供試品在60℃條件下放置10d,于第5天和第10天取樣,按含量測定項下方法制備供試品溶液,照上述色譜條件測定峰面積,其RSD值為0.10%。

圖1

2.8.3 高濕試驗 將供試品在25℃、相對濕度(90±5%)條件下放置10d,于第5天和第10天取樣,按含量測定項下方法制備供試品溶液,照上述色譜條件測定峰面積,其RSD值為0.28%。

2.9 樣品測定

按上述色譜條件,對三批樣品進行含量測定,其RSD值分別為0.07%、0.12%、0.09%。

3 結語

通過以上的試驗充分證明,甲硝唑氯化鈉注射液可以采用上述的色譜條件對其甲硝唑的含量進行檢測。測定法:精密量取本品適量,用流動相定量稀釋制成每1mL中約含甲硝唑0.25mg的溶液,搖勻,精密量取10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取甲硝唑對照品適量,精密稱定,加流動相溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.25mg的溶液,同法測定。按外標法以峰面積計算,即得。

4 討論

本試驗的流動相流速是1.2mL/min,其保留時間為7.5min,當將其降為1.0mL/min時,其保留時間是9.3min,經過多次試驗,確定流速是1.2mL/min時,其分離度和峰形比較好,且減少分析時間。

[1]國家藥典委員會,中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2]中華人民共和國藥典.臨床用藥須知·化學藥和生物制品卷[M].北京：人民衛生出版社，2005：1025.