注射用雷貝拉唑鈉有關物質的HPLC法優化檢測

丁 琛，李曉婷，劉留成

1江蘇省中醫院藥劑科，南京 210029；2江蘇奧賽康藥業有限公司，南京 211112

雷貝拉唑鈉（rabeprazole sodium）為苯并咪唑類化合物[1]，其結構式見圖1。

圖1 雷貝拉唑鈉結構式

它是日本衛材公司發現和開發的一種質子泵抑制劑[2]，代號 E-3810，于 1997年首先在日本上市，1999年本品已在美國和瑞典上市，商品名：Pariet，劑型為腸溶片。用于治療胃潰瘍，十二指腸潰瘍，吻合口潰瘍，反流對食管炎，卓-艾氏綜合癥等適應癥。雷貝拉唑鈉作為新一代質子泵抑制劑，具有較高的pKa值，口服后可在體內快速活化，與質子泵結合發揮抑酸作用[3]。雷貝拉唑鈉在抗分泌作用、抗幽門螺桿菌作用、藥物的相互作用、藥物的安全性及代謝的多態性等方面與第一代質子泵抑制藥相比具有明顯的優點[4-6]。

現有注射用雷貝拉唑鈉有關物質HPLC測定方法靈敏度低、專屬性差，當樣品經過酸、堿、光照、氧化、加熱破壞后，含量有明顯降低，而有關物質檢測變化不明顯，同時該測定方法不能靈敏地檢測雜質峰的個數及峰面積。為了提高雷貝拉唑鈉有關物質檢查的分離度、兼顧峰形和分析時間，建立一個靈敏性高，專屬性強，耐用性好的色譜條件是必須的。本實驗首先找出雷貝拉唑鈉及雜質的最大吸收波長，確定有關物質的檢測波長；通過對流動相的摸索，找出準確、可靠、主峰與雜質分離效果好的流動相色譜條件。

注射用雷貝拉唑鈉在生產及貯存過程中可能帶入或產生有關物質，因此本品須進行有關物質檢查。國內常用磷酸鹽、乙腈作為流動相，但雜質峰與主峰分離效果不佳，因此在參考國內外文獻的基礎上，通過大量預實驗，采用磷酸鹽-乙腈-甲醇做流動相，專屬性強，靈敏度高，適用于注射用雷貝拉唑鈉中有關物質的檢測。

1 儀器、試劑與試藥

島津LC-10A高效液相色譜儀系統，包括LC-10ATvp泵，SPD-10A紫外檢測器，C-R8A色譜數據處理儀。

乙腈、甲醇為色譜純；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀為分析純。

對照品雷具拉唑鈉：由江蘇奧賽康藥業有限公司提供，批號：20080508，含量：99.97%；供試品：注射用雷貝拉唑鈉，規格：20 mg（以C18H21N3O3S計），由江蘇奧賽康藥業有限公司提供，批號：20080511、20080515、20080519。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：(a)磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉1.119 g和磷酸二氫鈉0.179 g，加水1000 mL溶解，混勻）-乙腈 （60︰40），(b)0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖溶液(0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液調 pH7.0)-乙腈 （70︰30），(c)0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖溶液-甲醇-乙腈 （50︰30︰20，1.0 mol·L-1氫氧化鉀溶液調 pH 7.0）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：286nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供試品溶液的制備取本品內容物50 mg（相當于雷貝拉唑鈉15 mg），置50 mL量瓶中，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.3 mg·mL-1的供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備取雷貝拉唑鈉對照品15 mg，精密稱定，置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 流動相篩選

[7-9]，注射用雷貝拉唑鈉有關物質檢查流動相常用的成分有磷酸鹽、乙腈、甲醇等，在查閱國內外資料的基礎上，通過摸索，本文采用流動相(a)、(b)、(c)對供試品溶液進行檢測。由圖2結果表明：在流動相(a)、(b)、(c)中，有關物質 2 與主峰 1 之間的分離度分別為1.5、1.5、2.4，有關物質2與主峰1面積百分比分別為0.64%、0.64%、0.65%。即流動相(c)在主峰的保留時間、主峰與雜質峰的分離度方面均優于流動相(a)、(b)。且用流動相(c)進行空白溶劑及輔料干擾性試驗，結果溶劑及輔料在主峰及雜質峰出峰位置均無干擾。因此流動相(c)適合注射用雷貝拉唑鈉有關物質的檢測。

2.4 專屬性考察

2.4.1 破壞性試驗酸破壞：取本品內容物50 mg（相當于雷貝拉唑鈉15 mg），置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液4 mL，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，滴加1 mol·L-1氫氧化鈉溶液中和，再加0.001 mol·L-1氫氧化鈉稀釋至刻度。

堿破壞：取本品內容物50 mg（相當于雷貝拉唑鈉 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液4 mL，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，滴加 1 mol·L-1鹽酸溶液中和，再加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。

氧化破壞：取本品內容物50 mg（相當于雷貝拉唑鈉15mg），置50mL量瓶中，加30%過氧化氫2mL，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。

光照破壞：取本品內容物50 mg（相當于雷貝拉唑鈉 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，置強光條件下（4500 Lx）放置 4 h 后，取出。

熱破壞：取本品內容物50 mg（相當于雷貝拉唑鈉 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液使溶解并稀釋至刻度，置100℃水浴上加熱4h取出，冷卻。

取上述5種溶液，采用流動相(c)，按上述色譜條件分別進樣，記錄色譜圖。由圖3可見，雷貝拉唑鈉在酸、熱破壞下不穩定；各破壞條件下均產生數個分解產物峰，各分解產物峰與主峰的分離度達到了1.5以上，各雜質峰之間也能達到較好地分離，此色譜條件能滿足本品有關物質檢查的需要。

2.4.2 峰純度檢驗取“2.2.1”項下供試品溶液，采用流動相（c）色譜條件，但采用二極管陣列檢測器檢測，結果表明主成分峰雷貝拉唑峰純度系數大于0.999，為單峰。

2.4.3 理論板數和拖尾因子的測定“2.4.2”項下的理論板數和拖尾因子分別為9668和1.08。

2.4.4 最低檢測限和定量限測定取“2.2.2”項下的對照品溶液，用0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液進行適當稀釋后，按上述色譜條件進行測試，直至進樣所得圖譜中雷貝拉唑峰的響應值約為基線噪音的3倍和10倍，根據此時進樣濃度算出雷貝拉唑最低檢出限與定量限分別為0.6ng和2.0ng。

2.4.5 樣品中有關物質的考察取3批樣品及對照品，按“2.2”項下的溶解方法和上述色譜條件進行檢測，3批樣品的測定結果有關物質峰2與峰1的面積比分別為0.65%、0.62%和0.67%，符合《中國藥典》中有關要求。

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

取本品，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液制成每1 mL含雷貝拉唑鈉0.012 mg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定，在190 nm～450 nm波長范圍內繪制吸收曲線圖，紫外圖譜顯示，本品在220 nm與286 nm的波長處有最大吸收，其中在220 nm波長，流動相本身有吸收，干擾主成分測定,故選用286 nm作為有關物質的測定波長。

3.2 從雷貝拉唑鈉結構上分析

1H–苯并咪唑鈉鹽在酸性及加熱條件下，極易被氫取代，3-甲氧基丙氧基中的兩個醚鍵也易斷開，亞磺酰基鏈也溶液斷開。正如雷貝拉唑鈉破壞性試驗所示，其在酸性及加熱下不穩定。國外的文獻資料顯示：有關物質2基本上可以確定為亞磺酰基鍵斷裂產物。

3.3 溶劑的選擇

本實驗用 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液作溶劑而不用流動相，是因為流動相呈中性，雷貝拉唑鈉易分解。實驗中用流動相做溶劑，連續進樣，圖譜中的雜質峰逐漸增多，放置24 h后，溶液由無色變為亮黃色。故選用0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液作溶劑。

參考文獻

[1] 黃 芳，相德尚.高效液相色譜法測定注射用雷貝拉唑鈉的含量[J].數理醫藥學雜志， 2009，22（5）：584-6.

[2] 馬培奇.國外新近批準主要新藥（二十九 ）[J].中國制藥信息，2009，25（3）： 12-20.

[3] 赫宗軍.雷貝拉唑鈉治療胃潰瘍的療效分析[J].中國現代藥物應用，2008，2（15）： 62-3.

[4] 何解生.抗潰瘍病藥雷貝拉唑的藥理與臨床[J].實用藥物與臨床，2005，8（1）：42.

[5] 孫忠實.質子泵抑制劑的新突破一雷貝拉唑[J].中國藥學雜志， 2003， 38（4）： 307.

[6] Kita T,Sakaeda T,Baba T,et al.Different contribution of CYP2C19 in the in vitro metabolism of three proton pump inhibitors[J].Biols Pharm Bull,2003,26(3):386.

[7] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄23.

[8] 趙 俊，陳祥峰，唐燕平.兩種注射用雷貝拉唑鈉含量測定方法比較[J].中國藥業， 2009，18（16）：39-40.

[9] 李文兵，孫冬梅，李智勇.高效液相色譜法測定雷貝拉唑鈉腸溶膠囊的含量和有關物質[J].中國醫院藥學雜志，2007，27（7）： 995-6.