嗎替麥考酚酯干混懸劑的制備及含量測定

張忠偉，陳一凡

1張家港市第一人民醫院藥劑科，張家港 215600；2南京易亨制藥有限公司，南京 211800

嗎替麥考酚酯(mycophenolate mofetil,MMF)是麥考酚酸（mycophenollic acid,MPA）的2-乙基酯類衍生物，在體內脫酯化后形成具有免疫抑制活性的代謝產物。后者通過抑制鳥嘌呤的合成，選擇性阻斷T和B淋巴細胞的增殖，對移植排異和自身免疫性疾病均有顯著療效。臨床上已應用于器官移植和自身免疫性疾病[1]，且副作用少。干混懸劑，適用于不易溶的藥物，與片劑和膠囊等口服制劑相比較，尤其是吞咽有困難的兒童和老人來說，具有使用方便的優點；與液體制劑相比較，具有易貯存、好攜帶的特點。查閱已有的相關文獻，未見有關本品干混懸劑的制備工藝和質量研究方面的報道。本文建立了采用HPLC法測定嗎替麥考酚酯干混懸劑含量的方法，其操作簡便，重復性好，制劑輔料對其測定沒有干擾。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP高效液相色譜儀系統，SPD-10AVP紫外檢測器 (日本島津公司);SB2000超聲波清洗器(上海超聲清洗儀器廠);奧豪斯AP250D十萬分之一天平(上海天平儀器廠)。

嗎替麥考酚酯原料(福建科瑞藥業有限公司，純度99.4%)；嗎替麥考酚酯對照品(福建科瑞藥業有限公司，純度99.8%)；嗎替麥考酚酯干混懸劑(自制,規格：250 mg，批號:040308、040420、040422、040424)；乙腈為色譜純;三乙胺、磷酸為分析純;水為重蒸餾水。

2 方法及結果

2.1 樣品制備

2.1.1 制劑處方嗎替麥考酚酯250g，甘露醇750g，羧甲基纖維素鈉5 g，聚維酮K3050 g，磷酸二氫鈉5 g，阿斯巴甜5 g，香精適量。

2.1.2 制備工藝取處方量的嗎替麥考酚酯原料粉碎，過100目篩，與羧甲基纖維素鈉、聚維酮K30、磷酸二氫鈉、阿斯巴甜、甘露醇和香精等按等量遞增法混合均勻后，過60目篩；干法制粒，過16目篩；測定中間體含量，分裝，即得。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱型號為大連依利特Hypersil C8(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：乙腈-水-三乙胺（50︰40︰0.2）（用磷酸調 pH 值至 3.8）； 檢測波長：249 nm；流速:1 mL·min-1；進樣量：20 μL。 見圖 1。

2.2.2 溶液的制備對照品溶液的制備：精密稱取嗎替麥考酚酯對照品適量，加流動相溶解制成每1毫升中含嗎替麥考酚酯0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液的制備：精密稱取樣品適量（相當于嗎替麥考酚酯50 mg），置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續濾液5 mL至50 mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 線性關系考察精密稱取嗎替麥考酚酯對照品適量 (25.1 mg)，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液 0.3、0.5、1.0、1.5、2 mL 分別置 10 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取各溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線。嗎替麥考酚酯的回歸方程為：Y=12470X-8927（r=0.9999，n=5）。 嗎替麥考酚酯在 30.06～200.40 μg·mL-1范圍內有良好的線性關系。

2.2.4 精密度試驗取對照品溶液連續進樣6次，測定峰面積，嗎替麥考酚酯峰面積的RSD為0.3%。

2.2.5 重復性試驗取同一批號的樣品（040308批）6份，按照“供試品溶液制備”項下同法制備溶液，注入液相色譜儀，依法測定，所測樣品含量為99.7%，RSD為0.4%。

2.2.6 穩定性試驗取重復性試驗樣品溶液一份，分別于 0、2、4、6、8 h 進樣，測定峰面積，嗎替麥考酚酯峰面積的RSD為0.3%。

2.2.7 回收率試驗精密稱取嗎替麥考酚酯對照品約40、50、60 mg各3份，分別置于50 mL量瓶中，按處方比例分別加入空白輔料的各組分，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續濾液5mL至50 mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按照上述色譜條件測定，計算回收率。結果表明本方法的回收試驗良好（見表1）。

2.2.8 樣品測定分別取3批樣品，照“供試品溶液制備”項下方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算含量。3批樣品的含量測定結果分別為100.1%、99.8%、99.9%。

表1 回收率試驗結果（n=9）

3 討 論

參照嗎替麥考酚酯片“標準”[2]中的色譜條件，曾以辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈-水-三乙胺磷酸緩沖液（取三乙胺10 mL，加水990 mL，混勻，加磷酸約 4.75 mL，調 pH 值至 5.4±0.1）（40︰40︰20），檢測波長 249 nm，結果表明主峰出峰時間遲，柱效低，分離效果差。故參照文獻[3]調整流動相的比例和pH值，最終確定流動相為：乙腈-水-三乙胺 （50︰40︰0.2）（用磷酸調節 pH值至3.8）。在該流動相下，雜質和空白輔料能夠很好的獲得分離，對嗎替麥考酚酯的測定沒有干擾，適用于嗎替麥考酚酯干混懸劑的質量控制。

[1] 陳朝生.新型免疫抑制劑麥考酚酸酯[J].中國新藥與臨床雜志，2000，19(1):51-3.

[2] 國家食品藥品監督管理局藥品標準 （試行）（YBH08952003）[S].

[3] 徐創莉，陳贊民.HPLC法測定嗎替麥考酚酯有關物質并作優化條件評定研究[J].中國熱帶醫學，2006，6(11):1967-8.