金銀花提取物對肝損傷小鼠的保護作用研究

王東升

(河南省漯河市郾城區人民醫院內科，462300)

金銀花為常用中藥，含有豐富的揮發油、黃酮類化合物、有機酸類物質、三萜皂苷類物質和無機元素［1］。有研究顯示，該藥具有治療濕熱黃疸、肝膽結石、尿路結石、細菌感染等作用，可用于解熱抗炎、降脂［2］、利膽保肝［3］等，在治療肝損傷上可能是有效的藥物。對乙酰氨基酚主要用于解熱鎮痛，如果過量使用則可導致嚴重的肝損害乃至死亡［4］，其誘導肝損傷是篩選保肝藥物的常用實驗模型［5］。筆者在本實驗中探討金銀花對對乙酰氨基酚誘導肝損傷的干預和保護作用及其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 試藥 金銀花(產地:江蘇，購自廣惠和大藥房，經漯河醫專趙喜蘭副教授鑒定為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾)，丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase，ALT)試劑盒、天冬氨酸氨基轉移酶(glutamate aminotransferase，AST)試劑盒購自中生北控生物科技公司，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、一 氧 化 氮 (nitric oxide，NO)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSHPx)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質量20～25 g，均由鄭州大學動物實驗中心提供。

1.3 儀器 低溫離心機(Eppendorf centrifuge5417R，Germany)，倒置顯微鏡(Nikon Eclipse TS100)，酶標儀(MK3型，上海雷勃分析儀器有限公司)。

1.4 金銀花的煎煮及質量控制 金銀花加10倍量水，煎煮1 h，煎煮2次，每次1 h，合并2次濾液，濃縮至每毫升相當于1 g原藥材。以綠原酸為對照品，采用高效液相色譜法對其質量進行控制，流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺 (15∶80∶1∶1)，檢測波長為324 nm，結果顯示提取液中綠原酸的含量為23 mg·mL-1。

1.5 小鼠肝損傷模型的建立 小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組:正常對照組，模型組，聯苯雙酯組(0.6 g·kg-1)，金銀花低、中、高劑量組(10，15，25 g·kg-1)。除正常對照組和模型組外，其他各組按體質量分別以0.02 mL·g-1劑量給藥，每天1次;正常對照組和模型組給予等量0.9%氯化鈉溶液，連續10 d。末次給藥前24 h禁食，除正常對照組外，其余5組均腹腔注射對乙酰氨基酚400 mg·kg-1［6］。24 h后經眼靜脈取血，分離血清，處死小鼠，取出肝臟，先用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)沖洗2次，然后用雙蒸純化水1∶5研磨成組織勻漿，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液檢測。

1.6 生化指標的測定 按照試劑盒說明書檢測血清中 ALT、AST 和肝組織 SOD、MDA、NO、GSH-Px含量。

2 結果

2.1 金銀花對小鼠血清中ALT、AST水平的影響 模型組和正常對照組比較，肝臟組織中AST、ALT含量顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，表明對乙酰氨基酚對肝具有一定的傷害作用;與模型組比較，各給藥組血清ALT和AST均明顯下降，但各組下降程度明顯不同，差異有統計學意義，結果見表1。

表1 6組小鼠血清ALT與AST水平測定結果U·L-1，±s

表1 6組小鼠血清ALT與AST水平測定結果U·L-1，±s

與模型組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與正常對照組比較，*3P＜0.05，*4P＜0.01

組別 小鼠/只ALT AST金銀花提取物低劑量組 10 286.32±20.37*1 251.78±20.14中劑量組 10 211.34±18.35*1 223.57±21.78*1高劑量組 10 181.51±11.17*2 179.67±11.27*2聯苯雙酯組 10 191.56±12.24*2 171.87±9.91*2模型組 10 319.37±21.36*3 279.97±15.97*4正常對照組10 170.17±16.70 157.21±31.68

2.2 金銀花對小鼠肝組織MDA與NO的影響 模型組和正常對照組比較，肝組織MDA、NO含量顯著增加(P＜0.05)，提示小鼠對乙酰氨基酚肝損傷時，產生明顯的脂質過氧化。與模型組相比，各給藥組MDA、NO均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)，并且呈劑量依賴性，表明金銀花能有效提高肝臟組織抗脂質過氧化的能力，結果見表2。

表2 6組小鼠肝組織MDA與NO含量測定結果±s

表2 6組小鼠肝組織MDA與NO含量測定結果±s

與模型組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與正常對照組比較，*3P＜0.05

組別 小鼠/只MDA/(nmol·mg-1)NO/(μmol·g-1)金銀花提取物低劑量組 10 3.84±0.19*1 4.89±0.61*1中劑量組 10 2.34±0.17 4.11±0.15*2高劑量組 10 2.31±0.21*2 3.84±0.48*2聯苯雙酯組 10 2.39±0.17*2 3.87±0.57*2模型組 10 4.39±0.11*3 5.74±0.25*3正常對照組10 2.25±0.17 3.67±0.11

2.3 金銀花對小鼠肝組織GSH-Px與SOD的影響模型組與正常對照組比較，GSH-Px、SOD水平顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)，說明對乙酰氨基酚對肝臟有一定的傷害;各給藥組GSH-Px、SOD水平顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，提示藥物能通過抑制脂質過氧化反應對肝臟產生保護作用，減輕對乙酰氨基酚對肝臟的損傷，結果見表3。

表3 6組小鼠肝組織GSH-Px與SOD含量測定結果U·mg-1，±s

表3 6組小鼠肝組織GSH-Px與SOD含量測定結果U·mg-1，±s

與模型組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與正常對照組比較，*3P＜0.05，*4P＜0.01

組別 小鼠/只GSH-Px SOD金銀花提取物低劑量組 10 64.37±2.71*1 104.25±11.21*2中劑量組 10 65.78±1.57*1 141.27±13.11*2高劑量組 10 68.75±1.67 177.11±14.34*2聯苯雙酯組 10 70.17±1.47*2 163.55±16.78*1模型組 10 40.12±1.37*3 87.32±16.78*4正常對照組10 85.68±1.27 177.32±18.67

3 討論

血清中ALT和AST水平高低可以反映肝細胞損傷程度，ALT、AST升高水平與肝細胞損傷程度成粗略平行關系［7］。本實驗中，金銀花均能增高SOD、GSHPx活性，同時明顯降低肝組織中MDA、NO的含量，提示藥物通過抑制脂質過氧化反應對肝臟產生保護作用，有降低肝指數的趨勢，可減輕對乙酰氨基酚對肝臟的損傷，其作用機制部分與抗氧化、清除自由基有關［8］。本實驗結果表明，金銀花對對乙酰氨基酚肝損傷有一定的保護作用，能降低肝損傷小鼠血清ALT和AST活性，通過抑制脂質過氧化反應增高SOD、GSHPx活性，同時明顯降低肝組織MDA、NO、TNF-α含量，具體機制還有待進一步研究。

［1］ 武曉紅，田智勇，王煥.金銀花的研究新進展［J］.時珍國醫國藥，2005，16(12):2303-2304.

［2］ 林宏.金銀花藥理研究進展［J］.江西醫學院學報，2009，21(6):82-84.

［3］ 趙國玲，劉佳佳，林丹.金銀花化學成分及藥理研究進展［J］.中成藥，2002，24(12):973-976.

［4］ 蔡中起，趙憲噸.對乙酰氨基酚肝損害研究進展［J］.國外醫學:內科學分冊，1998，8(25):347-348.

［5］ 汪德清，丁保國，馬艷青，等.黃芪總黃酮對對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷防護作用的研究［J］.中國中藥雜志，2001，26(7):483-485.

［6］ 張昱，張偉.禿瘡花注射液對對乙酰氨基酚引起肝損傷的保護作用［J］.中華實用中西醫雜志，2004，4(17):3059-3061.

［7］ 張其蘭.肝藥靈防治實驗性肝損傷作用研究［J］.中草藥，1983，24(10):535.

［8］ 宮璀璀.金銀花在體內抗氧化作用的實驗研究［J］.實用醫藥雜志，2006，23(5):584.