榆柏?zé)隣C傷噴霧劑的藥效學(xué)研究＊

任淑娟，陳瑞明，柴 焱，白 璐，姜姍姍，張小麗，陳志誠

(1.陜西省人民醫(yī)院，陜西 西安 710068;2.陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，陜西 西安 710003;3.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

榆柏?zé)隣C傷噴霧劑由黃柏、榆樹皮、冰片經(jīng)醇浸制備而成，具有清熱解毒、收斂生肌、止痛功效，用于各種原因引起的Ⅰ度和Ⅱ度燒燙傷。筆者對(duì)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑與其功能主治有關(guān)的藥效學(xué)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

721型分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠);YLS-12A型鼠尾光照測(cè)痛儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)。榆柏?zé)隣C傷噴霧劑(陜西省人民醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為20091018，每1 mL相當(dāng)于原生藥0.5 g);京萬紅軟膏(天津達(dá)仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司，批號(hào)為211681);阿司匹林腸溶片(陜西白鹿制藥股份有限公司，批號(hào)為091125)。ICR小白鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK(陜)2007-001號(hào)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鎮(zhèn)痛作用

對(duì)乙酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(扭體法)[1]:取ICR小鼠，隨機(jī)分為75%乙醇對(duì)照組(A組)，京萬紅組(B組)，受試藥高、中、低劑量組(C1組、C2組、C3組，給藥劑量分別為 25，12.5，6.25 mL/kg，相當(dāng)于生藥12.5，6.25，3.125 g/kg)，每組12只。各組均按劑量每天涂抹給藥1次，連續(xù)7 d，末次給藥45 min后，每只小鼠腹腔注射0.7%乙酸0.01 mL/g，5 min后開始記錄10 min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。表1結(jié)果表明，高、中劑量的榆柏?zé)隣C傷噴霧劑有顯著的鎮(zhèn)痛作用。

對(duì)熱痛刺激甩尾反應(yīng)潛伏期的影響(甩尾法)[2]:取ICR小鼠，用鼠尾光照測(cè)痛儀剔除痛閾小于3 s或大于10 s者，選出合格的小鼠60只，分組、給藥劑量以及給藥時(shí)間同扭體法。末次給藥后45 min和90 min，將小鼠尾部放入鼠尾光照測(cè)痛儀中，分別記錄小鼠尾自放入儀器至甩尾的時(shí)間，作為小鼠的疼痛潛伏期。表1結(jié)果表明，榆柏?zé)隣C傷噴霧劑具有良好的鎮(zhèn)痛作用。

表1 不同劑量藥物對(duì)乙酸所致小鼠扭體反應(yīng)和熱痛刺激甩尾反應(yīng)潛伏期的影響(±s)

表1 不同劑量藥物對(duì)乙酸所致小鼠扭體反應(yīng)和熱痛刺激甩尾反應(yīng)潛伏期的影響(±s)

注:與 A 組比較，經(jīng) t檢驗(yàn)，△P＜0.05，▲P＜0.01。

組別 劑量(g/kg)10 min扭體次數(shù) 甩尾反應(yīng)潛伏期(s)A組(n=12)B組(n=12)C1組(n=12)C2組(n=12)C3組(n=12)90 min 3.24±0.83 5.10±0.60▲5.97±1.73▲5.71±1.28▲5.70±2.02▲25 12.5 6.25 3.125 31±8 13±8▲12±8▲12±9▲29±8▲45 min 3.54±0.78 8.19±1.80▲7.73±3.22▲7.86±3.19▲5.09±2.12△

2.2 抗炎作用

對(duì)二甲苯性小鼠耳腫脹的影響[3-4]:取ICR小鼠，分組、給藥劑量以及給藥時(shí)間同扭體法，陽性對(duì)照藥物用阿司匹林腸溶片0.027 g/kg。末次給藥 45 min后，右耳滴二甲苯 20 μL，20 min后處死動(dòng)物，用7 mm打孔器在左右耳相同位置打耳片[5]，稱定質(zhì)量，計(jì)算腫脹度。腫脹度(mg)=右耳片重-左耳片重。結(jié)果見表2。

對(duì)乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[3-4]:取ICR小鼠，分組、給藥劑量以及給藥時(shí)間同扭體法，陽性對(duì)照藥物用京萬紅軟膏。末次給藥45 min后，尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)0.01 mL/g，再立即腹腔注射0.7%乙酸0.2 mL/只，20 min后脫椎處死，打開腹腔，注入10 mL生理鹽水沖洗，吸出洗滌液，3 000 r/min離心10 min，再取上清液于590 nm波長處測(cè)光密度(OD)值(OD值間接表示通透性)[6]。結(jié)果見表3。

表2 不同劑量藥物對(duì)二甲苯性小鼠耳腫脹的影響(±s)

表2 不同劑量藥物對(duì)二甲苯性小鼠耳腫脹的影響(±s)

注:與乙醇對(duì)照組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01(表 3同)。

組別乙醇對(duì)照組(n=12)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑低劑量組(n=12)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑中劑量組(n=12)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑高劑量組(n=12)阿司匹林組(n=12)劑量(g/kg)3.125 6.25 12.5 0.027腫脹度(mg)37.1±9.9 34.2±15.7 26.9±9.1△16.0±6.1▲15.7±6.5▲

表3 不同劑量藥物對(duì)乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(±s)

表3 不同劑量藥物對(duì)乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(±s)

組別乙醇對(duì)照組(n=12)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑低劑量組(n=12)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑中劑量組(n=12)榆柏?zé)隣C傷噴霧劑高劑量組(n=12)京萬紅組(n=12)劑量(g/kg)3.125 6.25 12.5 25 OD值0.330±0.144 0.321±0.126 0.187±0.115△0.157±0.117▲0.153±0.121▲

2.3 對(duì)小鼠Ⅱ度燙傷的促愈合作用

取60只ICR小鼠，均用8%的硫化鈉背部脫毛約6 cm2，腹腔注射氨基甲酸乙酯麻醉后，將小鼠仰位固定于帶孔木板上(橢圓形孔2 cm×3 cm)，使去毛皮膚暴露于木板孔內(nèi)，然后將木板置電熱恒溫水浴鍋上，使裸露背部皮膚浸泡于80℃熱水浴內(nèi)，18 s取出，用干凈紗布擦干水漬，即造成Ⅱ度燙傷模型。將60只燙傷小鼠按燙傷面積和體重分為5組，每組12只。其中空白對(duì)照組(A組)小鼠每20 g體重給予溶劑0.5 mL，榆柏?zé)隣C傷噴霧劑低、中、高劑量組(B1組、B2組、B3組)分別給藥 6.25，12.5，25 mL/kg(相當(dāng)于每1 kg體重予生藥3.125，6.25，12.5 g，每日1次，陽性對(duì)照組(C組)給予京萬紅軟膏25 g/kg，均皮膚涂抹，每日1次。單籠飼養(yǎng)，連續(xù)給藥30 d。每日記錄小鼠的創(chuàng)面結(jié)痂、脫痂、水腫和感染等情況;第5，10，15，20，25天記錄小鼠的創(chuàng)傷面積，以透明硫酸紙覆在創(chuàng)面上描出皮膚燙傷面的圖形[7]，稱取燙傷面圖紙的質(zhì)量并折合成面積，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率=(原燙傷面積-愈合面積)/原燙傷面積×100%，燙傷小鼠愈合率=完全愈合的小鼠數(shù)/受試小鼠數(shù)×100%。末次給藥后次日，脫頸椎處死小鼠，剪取燙傷部位皮膚，于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋切片，HE染色，顯微鏡下觀察各組燙傷小鼠的皮膚愈合程度。組織病理學(xué)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表4，試驗(yàn)結(jié)果見表5、表6?？梢?，榆柏?zé)隣C傷噴霧劑具有顯著提高燙傷小鼠愈合率、縮短愈合時(shí)間、提高創(chuàng)面愈合率、促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。

表4 組織病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表5 不同劑量藥物對(duì)Ⅱ度燙傷小鼠愈合率、愈合時(shí)間和創(chuàng)面愈合率的影響

表6 不同劑量藥物對(duì)小鼠燙傷創(chuàng)面病理切片組織病理學(xué)評(píng)分的影響(±s，分)

表6 不同劑量藥物對(duì)小鼠燙傷創(chuàng)面病理切片組織病理學(xué)評(píng)分的影響(±s，分)

組別A組(n=10)B1組(n=10)B2組(n=11)B3組(n=11)C組(n=12)劑量(g/kg)3.125 6.25 12.5 25表皮結(jié)構(gòu)1.2±0.60 1.1±0.94 0.6±0.66 0.6±0.48＊0.5±0.67＊膠原纖維束1.3±0.46 1.6±0.56 1.0±0.80 1.0±0.60＊0.6±0.80＊粒細(xì)胞浸潤1.9±0.30 1.3±0.90 1.3±0.78＊1.5±0.50 1.3±0.78＊

3 討論

榆柏?zé)隣C傷噴霧劑為我院自制制劑，在臨床應(yīng)用已有20多年的歷史，臨床反饋療效肯定，具有使用方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、質(zhì)量穩(wěn)定的特點(diǎn)，深受患者歡迎。方中黃柏清熱燥濕，解毒療瘡，解除火毒，為君藥;榆樹皮收斂生肌，消除腫脹，促進(jìn)瘡瘍愈合;冰片性涼，輔助黃柏瀉火毒，并可生肌止痛，消除火毒引發(fā)的腫脹疼痛，與榆樹皮同為輔藥。三藥合用，具清熱、解毒、收斂、生肌、止痛功效，可消除紅腫疼痛，用于Ⅱ度燒燙傷可防止感染、消除腫脹、促進(jìn)潰瘍面愈合。其治療過程與中醫(yī)的制痂療法和西醫(yī)的暴露療法相似，不需包扎。藥物噴射在新鮮創(chuàng)面后，經(jīng)3～5 min可形成一層透明藥膜，再重噴2～3次，增厚藥膜不致破裂，可促使藥痂形成并保留完整，形成的藥痂能阻斷污染、細(xì)菌感染和外來刺激[8]。燒傷的炎癥反應(yīng)早期主要表現(xiàn)為毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)、滲出和水腫。本研究結(jié)果表明，高、中、低劑量的榆柏?zé)隣C傷噴霧劑均具有顯著降低毛細(xì)血管通透性、減少炎癥滲出、減輕水腫的作用，說明其對(duì)炎性早期的治療作用較強(qiáng);3個(gè)劑量的榆柏?zé)隣C傷噴霧劑均能明顯延長小鼠的痛反應(yīng)潛伏期，鎮(zhèn)痛作用隨劑量的增加而增強(qiáng)，作用持久。本藥效學(xué)研究結(jié)果與榆柏?zé)隣C傷噴霧劑的功能主治相吻合，為進(jìn)一步擴(kuò)大該制劑的臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)依據(jù)。

[1]彭代銀，劉青云，戴 敏，等.蔭風(fēng)輪總苷抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J].安徽醫(yī)藥，2005，9(6):413.

[2]密 琳，余林中，邢雅玲，等.姜附軟膠囊抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J].中藥藥理與臨床，2005，21(3):43.

[3]陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:356.[4]徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)研究[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:882.

[5]王浴生.中藥藥理與應(yīng)用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:1262-1323.[6]徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:695.

[7]孫同柱，付小兵，顧小曼，等.重組人表皮生長因子促進(jìn)兔燙傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2000，10(4):218-225.

[8]陳意生，史景泉.燒傷病理學(xué)[M].重慶:重慶出版社，1993:26.