反相高效液相色譜法測定心可舒膠囊中丹參酮ⅡA含量

陶紅玲，李 彬

(1.浙江省舟山市婦幼保健院，浙江 舟山 316000;2.浙江省舟山市食品藥品檢驗所，浙江 舟山 316000)

心可舒膠囊收載于《衛(wèi)生部頒藥品標準中藥成方制劑(第十五冊)》，由山楂、丹參、葛根、三七、木香5味中藥組成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效，用于治療氣滯血瘀引起的胸悶、心絞痛、高血壓、頭痛、頸項疼痛、心律失常和高血脂等癥。該藥品的質(zhì)量標準比較簡單，只有木香、丹參的薄層色譜鑒別，無含量測定指標。為保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定可控，筆者建立了反相高效液相色譜法測定主藥丹參中丹參酮ⅡA的含量。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜系統(tǒng)，包括G1311A四元泵、G1329A自動進樣器、DAD檢測器，Agilent-Chemstation色譜工作站;USC-502型超聲處理器(上海波龍電子設(shè)備有限公司)。丹參酮ⅡA對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111538-200301);心可舒膠囊(重慶希爾安藥業(yè)有限公司，批號分別為090802，090503，091009);缺味樣品根據(jù)處方自制;甲醇為色譜純;水為重蒸餾水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent Zorbax Extend C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(77∶23);檢測波長:270 nm;柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計大于2 000。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的丹參酮ⅡA對照品17.60 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取此貯備液2.00 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為70.40 μg/mL的對照品溶液。取心可舒膠囊內(nèi)容物0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，置棕色瓶中，即得供試品溶液。按處方比例和制法制成缺丹參的陰性樣品，精密量取陰性樣品1.0 g，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:取丹參酮ⅡA對照品溶液、供試品溶液和缺丹參的陰性對照品溶液，在上述色譜條件下分別進樣，得到相應(yīng)的色譜圖(圖1)。結(jié)果表明，供試品溶液中丹參酮ⅡA色譜峰與其他組分的色譜峰完全分離，陰性對照品溶液對參酮ⅡA的測定無干擾。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對照品溶液 0.5，1，2，4，6，8，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定。以丹參酮ⅡA的峰面積為縱坐標(Y)、進樣量為橫坐標(X)，以最小二乘法進行線性回歸，得線性方程 Y=5 889.3 X-3.377，r=1.000 0(n=9)。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA進樣量在0.035 2～1.408 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:取對照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進樣6次，測定丹參酮ⅡA的峰面積，結(jié)果的 RSD為0.4%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液，按上述色譜條件，在24 h內(nèi)每隔一定時間測定1次峰面積，結(jié)果的 RSD為0.6%(n=6)，表明丹參酮ⅡA在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一批(批號為090802)樣品5份，每份0.5 g，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定并計算丹參酮ⅡA含量，結(jié)果的 RSD為1.1%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為090802)9份，每3份分別精密加入丹參酮ⅡA對照品貯備溶液(0.352 g/L)1.0，2.0，4.0 mL，按上述色譜條件測定峰面積并計算含量。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

分別吸取對照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件測定，以外標一點法計算含量，共測定了3批樣品，結(jié)果3批樣品中含丹參酮ⅡA分別為 0.018，0.020，0.018 mg/粒。

3 討論

參考相關(guān)文獻資料[1-4]，確定丹參酮ⅡA含量測定時的檢測波長為270 nm。考察了用甲醇加熱回流1 h和用甲醇作為提取溶劑，超聲處理15，30，60 min幾種方法，測定結(jié)果無明顯變化，結(jié)合以上試驗結(jié)果和試驗操作等因素，最后確定甲醇作為提取溶劑，超聲處

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

理30 min的方法。曾選用 Agilent Zorbax Extend型 C18柱、Agilent Zorbax SB 型 C18柱、Discovery C18柱、Dikma DiamonsilTM型 C18柱、大連依利特 C18柱(均為250 mm×4.6 mm，5 μm)5種色譜柱對樣品進行測定，流動相均為甲醇-水(77∶23)。結(jié)果采用第1種、第2種和第4種色譜柱時分離度均較好，但是用第1種色譜柱得到的色譜峰峰形對稱性更好，峰也較窄，所以試驗最終選用Agilent Zorbax Extend型C18柱。本試驗表明，反相高效液相色譜法操作簡便，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，可用于心可舒膠囊的質(zhì)量控制。

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