葛根清腸顆粒質(zhì)量控制方法研究

劉海容

(河北省中醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050011)

葛根清腸顆粒是由葛根、訶子、生地榆、黃連、秦皮等中藥制成的顆粒劑，具有和胃理腸、清熱化濕、行熱消脹、止瀉定痛之功效，用于治療胃腸濕熱、氣機(jī)郁滯所致的泄瀉。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者以薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，用高效液相色譜法對葛根中葛根素進(jìn)行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP型高效液相色譜儀，SPD-10AVP型紫外檢測器(日本島津)。葛根素對照品(批號為0752-200209)，沒食子酸對照品(批號為0831-9501)，中國藥品生物制品檢定所提供;葛根清腸顆粒以及無葛根或無訶子的陰性對照品(河北省中醫(yī)院提供，批號為20100326);乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別(薄層色譜法)

葛根:取葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的對照品溶液。取葛根清腸顆粒1 g，加乙酸乙酯30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液。再取無葛根的陰性對照品同法制成陰性對照品溶液。取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(14∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏15 min，置紫外燈下(365 nm)檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點(圖 1 A)。

訶子:取沒食子酸對照品2 mg，加適量甲醇使溶解，制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。取葛根清腸顆粒1 g，加無水乙醇30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。再取無訶子的陰性對照品同法制成陰性對照品溶液。取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸(3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇液，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜則無此斑點(圖1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 葛根素含量測定(高效液相色譜法)

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Kromasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88);檢測波長:250 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:10 μL。在此條件下，葛根素與樣品中其他組分色譜峰可基線分離，理論板數(shù)以葛根素峰計應(yīng)不低于4 000。

2.2.2 溶液制備

取葛根清腸顆粒適量，研細(xì)，取細(xì)粉約0.2 g，精密稱定，加甲醇20 mL，加熱回流提取30 min，冷卻，濾過，置25 mL容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。另取不含葛根素的陰性對照品，同法制成陰性對照品溶液。精密稱取葛根素對照品適量，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為100 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

空白干擾試驗:按照擬訂的色譜條件，分別對2.2.2項下3種溶液進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果見圖2。可見，陰性對照品溶液中的組分不干擾供試品溶液中葛根素的測定。

線性關(guān)系考察:精密稱取質(zhì)量濃度為100 μg/mL的對照品溶液 1，2，3，4，5，6 mL，分別置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成待測溶液，各精密吸取10μL，按上述條件測定，以峰面積(A)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 A=50 482.87X-14.6，r=0.999 7(n=5)。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在0.2～2.0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖2 高效液相色譜圖

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，依法測定。結(jié)果峰面積的 RSD為1.38%(n=5)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，分別于制備后0，2，4，6，8 h時各進(jìn)樣1次。結(jié)果峰面積的 RSD=1.30%(n=5)，表明供試品溶液至少在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品5份，按供試品溶液制備方法處理后依法進(jìn)樣測定，計算含量。結(jié)果平均含量的 RSD=1.40%(n=5)，表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗:取已知葛根素含量的樣品(批號為20100328)各約1.0 g，精密稱定，分別加入對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 葛根素加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

依法制備3批樣品的供試品溶液，吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，依法測定峰面積，按外標(biāo)法計算。結(jié)果批號為20100122，20100210，20100326的樣品中，葛根素含量分別為 1.357，1.360，1.361 mg/g，平均 1.359 mg/g。

3 討論

對訶子進(jìn)行薄層色譜鑒別時，應(yīng)注意點樣量不宜過大，且質(zhì)量濃度不宜過高;經(jīng)比較，采用聚酰胺薄膜比硅膠薄層板分離效果好，色譜斑點清晰。在葛根薄層色譜鑒別中，按2005年版《中國藥典(一部)》葛根項下的提取方法[1]，結(jié)果葛根斑點不明顯，提取率差;而用文中方法提取，所顯葛根斑點清晰，提取效果理想。提取制劑中葛根素的方法，文獻(xiàn)多有報道[2-4]。本試驗選擇加熱回流法，并將不同溶劑、不同時間作為影響因素進(jìn)行考察，結(jié)果甲醇加熱回流30 min的提取方法最理想。總之，所建立的質(zhì)量控制方法，可用于葛根清腸顆粒的質(zhì)量控制，且簡便快捷、準(zhǔn)確可靠。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:263.

[2]賈向群，黎金平，沙 瑩.高效液相色譜法測定根痛平中葛根素的含量[J].中國藥業(yè)，2005，14(8):42.

[3]孫法麗，烏 毅，王春香.高效液相色譜法測定葛瓜降糖膠囊中葛根素含量[J].中國藥業(yè)，2007，16(20):33-34.

[4]楊冬梅，楊世友.高效液相色譜法測定復(fù)方葛酮顆粒中葛根素含量[J].中國藥業(yè)，2010，19(5):19-20.