三花膏質量控制標準研究

劉秀英，黃 平

(江西省南昌市洪都中醫院藥劑科，江西南昌 330008)

三花膏是我院自制中藥制劑，由金銀花、野菊花、木芙蓉花組成，具有清熱解毒、軟堅散結、消腫的作用，用于癰疽、疔癤、乳癰及無名腫毒。為確保三花膏質量，我們對其質量控制標準進行了研究，總結如下。

1 材料

北京高效液相色譜儀，Q/BKYY31-2000電熱恒溫干燥箱，瑞士Precisa電子天平(XR205SM-DR)，CX-100型超聲波清洗機(中國北京市醫療設備二廠)，DKS-12型不銹鋼新型電熱恒溫水浴鍋(上海經濟區沈蕩中新電器廠)。

綠原酸對照品(批號0873-9914)、蒙花甙對照品(批號0891-9910)、野菊花對照藥材(批號121164-2007101)，均為中國藥品生物制品檢定所提供。

甲醇為色譜純，水為純化水，試劑均為分析純。

三花膏(南昌市洪都中醫院制劑中心，批號100108，100227，100322)。

2 薄層色譜鑒別

金銀花:取本品25g，加乙酸乙酯15mL，置水浴上加熱回流1h，提取2次，合并乙酸乙酯液，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試照品溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[1]分別吸取上述溶液各10μL、2μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上層溶液為展開劑展開，取出晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與金銀花對照藥材液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上不顯相同的熒光斑點。

野菊花:取本品25g，加石油醚(60～90℃)5mL，置50℃水浴中溫浸15min，時時振搖，傾去上清液，藥渣再用石油醚同法處理1次，棄去石油醚液，藥渣揮盡溶劑，加甲醇20mL，在60℃水浴中浸漬15min，時時振搖，放冷，濾過，濾液作為供試照品溶液。另取野菊花對照藥材0.2g，加石油醚(60～90℃)10mL，置50℃水浴中溫浸30min，棄去石油醚液，藥渣揮盡溶劑，加甲醇10mL，加熱回流30min，放冷，濾過，濾液作為對照藥材溶液。再取蒙花甙對照品，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[1]分別吸取上述溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑展開，取出晾干，噴以2%三氯化鋁試液，略加熱至干置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材液色譜和對照品色譜相應位置上分別顯相同顏色的熒光斑點。

3 綠原酸含量測定

色譜條件:色譜柱為DikmaKromasilC18(250mm×4.6 mm，5μm)，流動相為乙腈 -0.4% 磷酸溶液(12∶88)，流速0.8mL/min，柱溫 30℃，檢測波長326nm。

對照品溶液的制備:取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的綠原酸對照品4.0mg，精密稱定，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每毫升含綠原酸80μg)。

供試品溶液的制備:取本品適量，研勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密取續濾液5mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

系統適應性實驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。得出綠原酸的保留時間約為10min，綠原酸峰與其前后色譜峰的分離度分別為 12.60，3.34，均大于 1.5，拖尾因子為1.03，理論塔板數以綠原酸峰計為15417，綠原酸峰純度因子為1000。

線性關系考察:分別精密吸取綠原酸對照品溶液(80μg/mL)2，4，6，8，10，15，20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積A對進樣量C(μg)進行回歸，得標準曲線方程:A=34.8152C+0.2685，r=0.9999。結果表明，綠原酸在0.16～1.6μg范圍內，峰面積與進樣量有良好的線性關系。

精密度實驗:精密吸取同一供試品溶液10μL，按上述色譜條件連續進樣5次，測得綠原酸峰面積RSD為0.46%。表明儀器精密度良好。

重復性實驗:取同一批號(100322)本品，按供試品溶液制備方法制得5份供試品溶液，分別精密進樣測定，測得綠原酸的平均含量為3.2692%，RSD為0.82%。表明本方法重復性良好。

穩定性實驗:取同一批號(100108)本品供試品溶液，分別于制備后0，2，4，6，8，10，12，24，36h 精密進樣 10μL，測得綠原酸的平均含量0.507mg/支，RSD為1.54%，表明供試品溶液在36h內穩定。

加樣回收實驗精密稱取已知含量(3.2692%)的三花膏(批號100322)5份，每份約0.5g，分別精密添加綠原酸對照品溶液(4.108mg/mL)3mL、4mL、5mL，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算回收率。結果見表1。實驗結果表明，本法具有良好的回收率。樣品測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，以外標法計算樣品中綠原酸的含量。結果見表2。

表1 加樣回收率實驗測定結果 (n=5)

表2 3批樣品測定結果 (n=3)

4 討論

金銀花清熱解毒、疏散風熱，用于治療癰腫、疔瘡、丹毒、溫病發熱，為君藥;野菊花清熱解毒消腫，用于治療疔瘡癰腫、丹毒，能增強君藥解毒消腫作用，為臣藥;木芙蓉花清熱解毒消腫，用于治療癰腫、疔瘡。經過20余年的臨床應用，證實其對癰疽、疔癤、乳癰及無名腫毒有獨特的療效，未見不良反應。

通過分析，找出了金銀花、野菊花2種具有專屬性成分的藥材做為質量標準中鑒別的試驗對象，可通過控制金銀花、野菊花來控制全方的質量。

[1]國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部[M].北京:化學工業出版社，2005.471，596，附錄31.