芍藥苷治療內(nèi)臟敏感性腸易激綜合征的研究

李瑜，彭成，朱力陽，謝曉芳

腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome，IBS）最早于1820年由Powell報道，屬于胃腸功能紊亂性疾病，指一組包括腹痛、腹脹、排便習慣和大便性狀異常，持續(xù)存在或間歇發(fā)作，而無形態(tài)學和生化異常改變的癥候群，是臨床上最為常見的功能性胃腸病之一。其發(fā)病機制復雜，近年來很多研究表明內(nèi)臟感覺異常是其癥狀的主要病理生理基礎，且其發(fā)病也明顯受到社會心理因素的影響[1]。白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，歸肝、脾二經(jīng)，主要功能為養(yǎng)血柔肝、緩中止痛，用于頭痛眩暈，胸脅疼痛，胃腸痙攣性疼痛，瀉痢腹痛等。臨床用于治療IBS的常用方劑四逆散、痛瀉要方、柴胡疏肝散及逍遙散等中均含此藥，而芍藥苷為芍藥的主要有效成分之一。我們在前期研究中建立了穩(wěn)定的冰醋酸所致內(nèi)臟高敏感性IBS模型和芥末油所致內(nèi)臟高敏感性IBS模型，在此基礎上，本課題通過觀察腸道敏感性和結腸電生理的變化，研究芍藥苷對內(nèi)臟高敏感性IBS的治療作用。

1 材料和方法

1.1 藥物

1.1.1 受試藥物 芍藥苷為中藥白芍的有效部位提取物。芍藥苷含量50.12%，批號：20090501，購自西安飛達生物技術有限公司。按提取物總量計，實驗前用蒸餾水將芍藥苷配成濃度為1.25%、0.6525%、0.325%的高、中、低劑量藥液，備用。

1.1.2 陽性藥物 曲美布丁片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：0905005，規(guī)格：0.1g/片×20片/盒。實驗時用蒸餾水配制成濃度為2%（每毫升含曲美布丁0.02 g）的藥液，備用。

1.2 動物

SD大鼠，雌雄兼有，體重200±20 g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供，許可證號：SCXK（川）2008-11，檢疫后備用。

1.3 試劑

冰醋酸（成都科龍試劑公司，批號：20091008），食用芥末（大連清水食品加工廠），1.5%戊巴比妥鈉。

1.4 儀器

8F導尿管（湛江市事達實業(yè)有限公司），BL-420E生理機能儀（成都泰盟科技有限公司）。

1.5 方法

SD大鼠雌雄兼有，隨機分為空白組，模型組，自然恢復組，陽性組，芍藥苷高、中、低劑量組，共10組。

需造模大鼠禁食24 h后，在清醒狀態(tài)下用鈍針頭經(jīng)肛門插入直腸灌注0.5%冰醋酸5 mLkg-1（或5%芥末油2 mLkg-1），灌注后使大鼠頭部朝下，肛門朝上托10秒。首劑劑量濃度加倍，連續(xù)6天。從第7天開始，除空白組、模型組外，各組分別灌胃生理鹽水，2%曲美布丁，芍藥苷高、中、低劑量藥液，10 mLkg-1。1次/天，連續(xù)3天。

末次給藥/造模前禁食24 h，末次給藥/造模后1h經(jīng)肛門直腸擴張（CRD）后，觀察動物腹部撤離反射（AWR），評價動物的內(nèi)臟敏感性。腸敏感性測定結束后，立即用1.5%戊巴比妥鈉40 mLkg-1腹腔注射麻醉動物，按外科常規(guī)手術行下腹正中切口，將自制針灸針銀電極埋置于結腸漿膜面，距回盲部約2cm，雙極的間距5 mm，用BL-420E生理記錄儀同步描記胃腸電，時間常數(shù)5 s，高頻濾波0.3 Hz。待波形穩(wěn)定后，記錄5 min內(nèi)的電生理活動，計算頻率、峰電位、峰峰值、峰面積。

2 結果

2.1 芍藥苷對大鼠冰醋酸IBS模型的影響

2.1.1 芍藥苷對冰醋酸IBS模型大鼠腸敏感性的影響

模型組大鼠腹部抬起和背部拱起的閾值明顯降低，分別經(jīng)陽性藥曲美布丁、芍藥苷中劑量治療后腹部抬起和背部拱起的閾值明顯增加，自然恢復后腹部抬起和背部拱起的閾值略有增加。結果見表1。

表1 芍藥苷對冰醋酸IBS模型大鼠腸敏感性的影響（x±s）

2.1.2 芍藥苷對冰醋酸IBS模型大鼠結腸肌電的影響 模型組大鼠與空白對照組比較，頻率、峰電位、峰峰值、峰面積均有增加。自然恢復后峰電位、峰峰值、峰面積有一定改善，芍藥苷高、中、低劑量也可改善峰電位、峰峰值、峰面積的增加，芍藥苷中、低劑量還可使頻率降低。但無統(tǒng)計差異。結果見表2。

表2 芍藥苷對冰醋酸IBS模型大鼠結腸肌電的影響（x±s）

2.2 芍藥苷對大鼠芥末油IBS模型的影響

2.2.1 芍藥苷對芥末油IBS模型大鼠腸敏感性的影響

模型組大鼠腹部抬起和背部拱起的閾值明顯降低，分別經(jīng)陽性藥曲美布丁、芍藥苷中、低劑量治療后腹部抬起和背部拱起的閾值明顯增加，自然恢復后腹部抬起和背部拱起的閾值略有增加。結果見表3。

表3 芍藥苷對芥末油IBS模型大鼠腸敏感性的影響（x±s）

2.2.2 芍藥苷對芥末油IBS模型大鼠結腸肌電的影響

模型組大鼠與空白對照組比較，頻率、峰電位、峰峰值、峰面積均有增加，但無統(tǒng)計差異。陽性藥曲美布丁可顯著改善峰電位及峰面積的增加，改善峰峰值。自然恢復后繼及芍藥苷低劑量也對峰電位、峰峰值、峰面積的增加有改善作用，但無統(tǒng)計差異。結果見表4。

表4 芍藥苷對芥末油IBS模型大鼠結腸肌電的影響（x±s）

3 討論

芍藥苷是芍藥的主要有效成分之一，是一種單萜類糖苷化合物。近年來，國內(nèi)外學者對其進行了較為深入的研究，發(fā)現(xiàn)其不僅具有多種生物學效應，且毒副作用較小。現(xiàn)代藥理研究表明，芍藥苷具有明顯降低溫浴法致小鼠鎮(zhèn)痛[2]及蜂毒引起的疼痛[3]、改善小鼠結腸炎[4]、抗大鼠佐劑性關節(jié)炎[5]作用，另外還有保護神經(jīng)[6]、保護大鼠腦缺血后腦水腫、血腦屏障及大腦局部血流量[7]、改善東莨菪堿致大鼠空間學習記憶障礙[8]、保護內(nèi)皮細胞[9]、阻斷大鼠心肌細胞L鈣通道[10]等作用。芍藥苷對IBS的治療作用研究暫未見報道。

本研究在實驗室前期研究的基礎上，采用朱力陽等[11]建立的內(nèi)臟高敏感性IBS疾病模型，相對于傳統(tǒng)腸道高敏感性模型，該模型穩(wěn)定、重復性好、且造模時間短，為開展中藥治療IBS的實驗研究提供了重要的工具。

自1973年Ritchie等研究報道IBS病人對結腸氣囊擴張的疼痛閾值比對照組低以來，內(nèi)臟敏感性增高在IBS病理生理中的作用倍受重視，其腸道表現(xiàn)為疼痛閾值下降，即痛覺過敏，此病理特征可以在模型中得到很好體現(xiàn)，通過腸道給予刺激后的大鼠內(nèi)臟敏感性增高，與IBS患者有很好的相似性[12]。本研究應用冰醋酸和芥末油建立的IBS內(nèi)臟高敏感性模型大鼠與正常大鼠相比，對直腸擴張（CRD）的腹部撤離反射（AWR）抬腹閾值和拱背閾值都顯著降低，而芍藥苷中劑量能有效改善冰醋酸、芥末油兩種刺激造成的腸道疼痛閾值的降低，提示在連續(xù)化學刺激后，腸道發(fā)生痛覺過敏，其機制可能是通過傳入神經(jīng)末梢及脊髓背角水平的致敏，引起神經(jīng)可塑性的變化[13]，芍藥苷通過影響脊髓背角水平來改善痛覺的過敏。

電生理實驗表明，冰醋酸、芥末油模型組與空白組比較，大鼠結腸頻率、峰電位、峰峰值及峰面積均有所增高，提示結腸電活動和內(nèi)臟敏感性有直接關系，反復化學刺激可能使大鼠神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生重塑[14]。芍藥苷能改善冰醋酸、芥末油反復刺激造成的結腸頻率增高，降低峰電位、峰峰值和峰面積，表明芍藥苷可能通過影響胃腸神經(jīng)系統(tǒng)而改善內(nèi)臟感覺過敏。

本實驗結果提示，芍藥苷可治療內(nèi)臟高敏性IBS，降低內(nèi)臟高敏感性，其途徑可能是影響局部過敏介質(zhì)的釋放及脊髓背角水平，影響胃腸神經(jīng)系統(tǒng)等而改善IBS的癥狀。在一定范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)芍藥苷中劑量效果顯著，但其量效關系、藥效作用及機制還有待進一步探索。

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