殼聚糖對肉仔雞抗氧化能力及免疫器官指數的影響

棗莊學院生命科學系 劉 梅

棗莊宏宇飼料有限公司 史 挺

山東臨沂綠色和美飼料有限公司 劉秋菊

殼聚糖是甲殼素脫乙酰基后的產物，化學名稱為1，4-2-氨基-2脫氧-β-D-葡聚糖。殼聚糖具有良好的生物相容性，易被組織吸收，降解產物無毒害。研究表明，殼聚糖作為飼料添加劑，具有降低脂肪代謝、增強免疫等效果，是一類新型的綠色飼料添加劑（羅贊等，2008；劉海英等，2003）。近年來的研究發現，殼聚糖還是一種良好的抗氧化劑。不同相對分子質量殼聚糖對蘋果汁中2，2-二苯基-1-苦阱基自由基（DPPH自由基）、羥基自由基、超氧陰離子自由基等的清除效果的研究表明，低相對分子質量的殼聚糖抗氧化活性最高 （刑榮娥等，2005）。本試驗研究殼聚糖對肉仔雞抗氧化能力及免疫器官指數的影響機制。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與設計 選擇96只1日齡AA肉仔雞，隨機分成4個日糧處理組，每個日糧處理組分4個重復，每個重復6只雞。第1組為對照組，飼喂基礎日糧，第2、3、4組分別在日糧中添加50、100、150 mg/kg的殼聚糖?；A日糧參考NRC（1994）肉雞營養需要配制，基礎日糧組成及營養水平見表1。

1.2 飼養管理 試驗肉雞雙層籠養，自由采食和飲水，控制舍內溫度、濕度和光照，衛生學指標符合雞的衛生要求。7日齡進行新城疫弱毒苗首免，14日齡進行法氏囊疫苗飲水免疫，21日齡新城疫弱毒苗加強免疫。

表1 基礎日糧組成及其營養水平（風干基礎）

1.3 樣品采集與測定 分別在21、42日齡時（采血前停止喂食12 h），從每組隨機取6只肉雞（雌雄各半），從翅靜脈采血，3000 r/min離心10 min分離得血清。裝于1.5 mL的eppendorf管中，置–20℃冰箱中保存備用。

1.3.1 血液生化指標測定 血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px）、CAT活力的測定采用試劑盒法，所用試劑盒由南京建成生物工程研究所購買。

1.3.2 免疫器官指數測定 分別在21、42日齡從每個處理中隨機選取4只雞（1只/重復）宰殺，完整摘取脾臟、胸腺、法氏囊并稱重，用免疫器官的重量占體重的相對重量表示免疫器官指數（g/kg·BW）。

免疫器官指數=（免疫器官鮮重/活重）×100。

1.4 統計分析 數據采用SPSS 11.5統計處理軟件進行方差分析，試驗結果采用平均值±標準差表示。

2 結果分析

2.1 殼聚糖對肉仔雞抗氧化能力的影響

2.1.1 殼聚糖對肉仔雞血清中MDA含量的影響由表2可見，肉雞血清中MDA的含量，在21日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的MDA含量無顯著差異 （P＞0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，殼聚糖150 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA顯著降低7.10%（P<0.05）。

2.1.2 殼聚糖對肉仔雞血清中SOD、GSH-Px和CAT活力的影響 由圖1可知，在21日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的SOD含量無顯著性差異（P＞0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，殼聚糖100 mg/kg組和150 mg/kg組雞血清中的SOD活力顯著上升（P<0.05）。

表2 殼聚糖對肉雞仔血清中MDA含量的影響mmol/mL

由圖2可知，在21日齡和42日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的GSH-Px含量均無顯著性差異（P＞0.05）。

由圖3可知，在21日齡和42日齡時，與對照組相比，殼聚糖100 mg/kg組和150 mg/kg組肉仔雞血清中的CAT顯著上升（P<0.05）。

圖1 殼聚糖對肉仔雞血清中SOD活力的影響

圖2 殼聚糖對肉仔雞血清中GSH-Px活力的影響

圖3 殼聚糖對肉仔雞血清中CAT活力的影響

2.2 殼聚糖對肉仔雞免疫器官指數的影響 由表3可知，21日齡時，各處理組的脾臟指數差異不顯著（P＞0.05），而42日齡時各組間表現出顯著差異 （P＜0.05），其中 100 mg/kg殼聚糖組和150 mg/kg殼聚糖組較高，分別比對照組高40.7%和37.2%。各處理組肉仔雞的法氏囊指數在整個試驗期間均未表現出顯著性差異（P＞0.05）。在21日齡時，殼聚糖150 mg/kg組的法氏囊指數最高；42日齡時，仍以100 mg/kg殼聚糖組和150 mg/kg殼聚糖組較高。胸腺指數在21日齡時組間差異不顯著（P＞0.05），但在42日齡時，殼聚糖100 mg/kg組和殼聚糖150 mg/kg組要顯著高于其他各組，分別比對照組高 63.8%和34.9%（P＜0.05）。

表3 殼聚糖對肉仔雞免疫器官指數的影響%

3 討論

3.1 殼聚糖對肉仔雞抗氧化能力的影響 生物體內存在多種防御自由基損傷的抗氧化酶類，GSH-Px、SOD及 CAT是比較重要的幾種。而MDA為脂質過氧化產物 （LPO），因此測定MDA的量可反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映細胞損傷的程度（王述柏等，1998）。

SOD是酶促抗氧化體系中非常重要的一種抗氧化劑，其活性的高低可以反映機體清除氧自由基的能力（王鏡巖等，2002），往往與GSH-Px協調工作，阻止氧自由基啟動的自由基鏈鎖反應。盧美鸞等（2008）報道，添加低分子量殼聚糖的試驗組中肉雞血清中SOD酶活力顯著提高，說明殼聚糖可通過調節相關抗氧化防御酶系活性來降低機體的脂質過氧化水平，進而使機體免受脂質過氧化損傷。本試驗表明，在21日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的SOD含量無顯著差異 （P＞0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，100 mg/kg組和150 mg/kg組肉仔雞血清中的SOD顯著上升（P＜0.05）。

谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是機體內廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶。正常情況下，GSH-Px特異性地催化GSH對 H2O2的還原反應，可以起到保護細胞膜結構和功能完整的作用，屬于體內主要的抗氧化酶之一 （王鏡巖等，2002）。劉靜娜（2009）報道，高脂飼糧組（HF 組）大鼠血清GSH-Px活性顯著低于正常飼糧組（NF組），表明機體對氧化產物清除能力減弱；殼聚糖組 （CIS組）大鼠血清 GSH-Px活性與 NF組相近，表明殼聚糖能增強 GSH-Px活性，減少過氧化對機體的傷害。本試驗結果表明，在21日齡和42日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的GSH-Px含量均無顯著性差異 （P＞0.05）。

過氧化氫酶（CAT）是機體內廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶，能清除氧自由基反應生成過氧化氫，使其成為無毒的水，保護機體組織免受損害。CAT屬于機體抗氧化系統中酶系統的重要組成之一，在清除自由基的過程中，與SOD具有協同作用。因而CAT含量的多少，亦為衡量機體抗氧化能力大小的重要因素（王鏡巖等，2002）。劉靜娜（2009）報道，高脂飼糧組（HF 組）大鼠血清 CAT活性顯著低于正常飼糧組（NF組），表明機體清除過氧化氫的能力減弱；殼聚糖組（CIS組）大鼠血清 CAT活性在正常飼糧（NF組）和高脂飼糧組（HF組）之間，表明殼聚糖能適當增強CAT活性。本試驗結果表明，在21日齡和42日齡時，與對照組相比，殼聚糖100 mg/kg組和150 mg/kg組肉仔雞血清中的CAT顯著上升（P＜0.05）。

自由基造成生物體系損傷的重要因素是產生脂質過氧化物，其中最主要的是丙二醛（MDA）。MDA作為細胞膜不飽和脂肪酸過氧化反應的最終產物，可反映機體內脂質過氧化的程度，即MDA含量的增減代表著脂質過氧化作用的強弱，間接反映出細胞的受損程度。盧美鸞等（2008）報道，添加低分子量殼聚糖的試驗組中肉雞血清中MDA含量影響不顯著。劉靜娜（2009）報道，高脂飼糧組（HF組）大鼠的血清MDA含量顯著高于脂質過氧化物的產物MDA含量顯著升高；殼聚糖組（CIS組）大鼠血清 MDA含量水平與 NF組相近，說明殼聚糖能抑制脂質過氧化。本試驗結果表明，在21日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的MDA含量無顯著性差異（P＞0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，殼聚糖150 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA顯著降低7.10%（P<0.05）。

3.2 殼聚糖對肉仔雞免疫器官指數的影響 法氏囊指數、脾臟指數和胸腺指數是從免疫器官發育的角度來評價機體免疫狀態的指標。王秀武等（2002）研究發現，在肉仔雞日糧中添加 0.1%的殼聚糖顯著增加了胸腺和法氏囊的相對重量。Huang等（2007）研究發現，向日糧中添加不同劑量（50、100、150 mg/kg）的低分子殼聚糖對肉雞的免疫器官發育具有促進作用。這與本試驗的結果一致。

4 結論

肉仔雞日糧中添加殼聚糖能夠提高肉仔雞的抗氧化能力，增強免疫功能。

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