Survivin和PTEN在宮頸癌中的表達及相關性

于 娟，王德華

（天津醫科大學總醫院婦產科，天津300052）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，目前研究認為，宮頸癌的發生、發展與凋亡相關基因關系密切，Survivin是迄今為止發現的最強的凋亡抑制基因，它可能通過干擾腫瘤細胞凋亡和增殖平衡，促進宮頸癌的發生和進展。抑癌基因的丟失、突變或失去功能，使激活的癌基因發揮作用而致癌，抑癌基因PTEN可能通過去磷酸化參與細胞調控從而促進宮頸癌的發生和發展。檢測宮頸組織中Survivin基因及PTEN基因的表達對早期診斷宮頸癌及初步估計腫瘤的惡性潛能和預后有一定的應用價值。本研究探討Survivin和PTEN與宮頸癌發生、發展之間的關系以及兩者之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集天津醫科大學總醫院2007年7月至2009年7月門診活檢或住院手術病例宮頸標本共100例，其中宮頸癌組織48例、宮頸上皮內瘤變（CIN）組織37例，CINⅠ12例，CINⅡ12例，CINⅢ13例，以及正常宮頸組織15例。宮頸癌包括鱗狀細胞癌40例、腺癌8例，按FIGO分期（2000年）：Ⅰ期20例，Ⅱ期及以上28例；其中手術28例：Ⅰ期20例，Ⅱa期5例，Ⅱb期3例（新輔助化療），手術病理示發現淋巴結轉移者8例，未發現淋巴結轉移者20例；病理分化程度：高分化11例，中分化16例，低分化21例。所有100例病人取宮頸組織標本前均未經化療和放療。所有HE切片經病理專家復核。3組病例的平均年齡（中位數）分別為宮頸癌組47.5歲，CIN組48歲，正常組織組49歲，3組病例年齡經檢驗無統計學差異。

1.2 方法 兔抗人Survivin多克隆抗體，兔抗人PTEN多克隆抗體及S-P法免疫組化試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用免疫組化SP法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，用PBS代替一抗作為陰性對照，采用生物公司提供的陽性切片為陽性對照。

1.3 判斷標準 染色強度：未著色或與背景一致淺棕色為0分，著色淺為1分，中度著色為2分，著色深為3分。陽性細胞百分數：高倍鏡（×400）下隨機選取10個視野，每個視野計數10個細胞。取平均值作為陽性細胞百分數。陽性細胞數<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。根據這兩項指標的積分數分為4級，即陰性 (-)為0分，弱陽性(+)為 1～2 分，陽性 (++)為 3～4 分，強陽性(+++)為 5～6 分。

1.4 統計方法 采用SPSS 13.0軟件包對數據進行統計學處理，實驗數據采用χ2檢驗，Fisher’s精確概率法及Spearman相關分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Survivin、PTEN 在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌組織中的表達 由表1可知，Survivin在3組間的表達差異有顯著性 (χ2=29.420，P<0.05)；宮頸癌組Survivin表達高于正常宮頸組及CIN組。PTEN免疫組化陽性產物呈棕黃色細顆粒狀,定位于細胞核內。3 組間差異有顯著性(χ2=19.337，P<0.05)；宮頸癌組PTEN表達低于正常宮頸組及CIN組。

表1 Survivin、PTEN在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中的表達Tab 1 Expression of Survivin,PTEN in normal cervix,CIN and cervical carcinoma

2.2 宮頸癌組織中Survivin、PTEN的表達與臨床病理指標之間的關系 由表2可以發現Survivin蛋白表達陽性率在Ⅱb～Ⅳ期組高于Ⅰ～Ⅱa期組 (χ2=8.817，P<0.05)，在有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組(χ2=4.000，P<0.05)；宮頸癌中 Survivin 的表達與年齡、分化程度及組織類型均無關(P>0.05)。PTEN的表達與宮頸癌的臨床分期及淋巴結轉移顯著相關（P<0.05），但在不同年齡PTEN的表達卻無統計學意義（P>0.05），Survivin、PTEN 的表達異常均可以作為預后不良的標志。

2.3 宮頸癌組織中Survivin與PTEN蛋白表達的相關性分析 采用Spearman秩相關對48例宮頸癌組織Survivin與PTEN進行相關性分析，經統計學處理，Survivin與PTEN的相關系數rs=-0.753(P<0.05)，說明宮頸癌組織中Survivin與PTEN的表達成負相關。

表2 宮頸癌患者Survivin、PTEN的表達與臨床病理指標的關系Tab 2 The relationship between clinicopathological parameters and expression of survivin,PTEN in cervical carcinoma

3 討論

3.1 Survivin與宮頸癌 細胞增生和凋亡的平衡一旦被打破，細胞凋亡被抑制，將導致細胞過度增生，變異細胞不能自主凋亡，從而導致腫瘤的發生。Survivin基因是一種結構獨特的凋亡抑制蛋白（IAP）家族成員，通過直接或間接抑制凋亡基因及化療藥物等引起的細胞凋亡效應蛋白酶caspase-3、caspase-7的活化來阻斷其引起的細胞凋亡過程[1]。Survivin基因在正常組織中不表達或低表達，而在幾乎所有被研究的腫瘤組織中呈高表達[2]。Survivin蛋白主要定位于腫瘤細胞質或細胞核上，為粗細不一的棕黃色顆粒，本資料顯示從正常組織→CIN→宮頸癌，其陽性表達逐漸增高，且臨床分期越晚其Survivin陽性表達率越高。此外其表達與宮頸癌淋巴轉移也有關系，這與張保華等[3]的研究結果基本一致；也與Survivin在其他腫瘤中的研究結果一致。Survivin基因表達預示腫瘤有較高的侵襲性和不良預后，在一定程度上反映了宮頸癌的惡性程度[4]。其原因主要可能是因為Survivin陽性的子宮頸癌細胞對于放射治療和化療有較高的耐受性，從而導致子宮頸癌患者對放射治療及化療抵抗。以上特點使Survivin可能成為判斷腫瘤患者預后及輔助腫瘤診斷的一項重要指標，也為腫瘤治療提供了新的靶點。

3.2 PTEN與宮頸癌 PTEN基因亦稱MMAC1基因，是繼p53基因之后發現的一種腫瘤抑制基因，也是第一個具有雙特異性磷酸酶活性產物的抑癌基因,在細胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面具有重要作用，該基因的突變失活與人類多數惡性腫瘤的發生、發展及轉移密切相關而一直被人們所關注。最近的研究表明PTEN對維持染色體穩定性起到重要作用，泛素化調節則賦予PTEN通過核膜的能力[5]。研究表明宮頸癌組織中PTEN陽性表達率明顯低于癌旁宮頸組織和正常宮頸組織，提示PTEN等位基因缺失和突變可能參與宮頸癌的發生。這與本研究的結果PTEN的表達隨著宮頸癌的發展而降低相一致。PTEN的表達異常可以作為預后不良的標志。

3.3 宮頸癌中Survivin與PTEN的相關性 在Survivin與PTEN的關系研究中文獻較少，張培榮等[6]的研究提示：Survivin與PTEN在宮頸鱗狀細胞癌的早期發生、發展中起重要作用。抑癌基因PTEN的失活可能通過P13K/Akt途徑上調Survivin的表達，使之發揮抑制腫瘤細胞和血管內皮細胞凋亡的作用，促進腫瘤細胞的增殖、血管生長和穩定，更有利于腫瘤生長和侵襲。PTEN的失活和Survivin的過表達是宮頸癌進展和轉移的重要環節，其聯合可以作為宮頸癌診斷及判斷預后的標志物。

［1］Zaffarni N,Costa A,Pennati M,et al.Survivin is highly expressed and promotes cell survival in malignant peritoneal mesothelioma[J].Cell Oncol,2007,29(6):453

［2］StauberRH,MannW,KnauerSK.Nuclearandcytoplasmicsurvivin:molecular mechanism,prognostic,and therapeutic potential[J].Cancer Res,2007,67(13):5999

［3］張保華，盧實，王澤華.子宮頸癌組織中survivin基因的表達及其臨床意義[J].實用醫學雜志，2004，20(4):384

［4］李素文，朱寶申，孫麗娟，等.Survivin在宮頸癌組織中表達規律及臨床意義[J].河北醫藥，2009，31（14）：1743

［5］Baker SJ.PTEN enters the nuclear age[J].Mol Cell,2007,128(1):25

［6］張培榮，鄭錦花，王艷萍，等，Survivin與PTEN蛋白在宮頸鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[J].臨床腫瘤學雜志，2007，12（4），271