人參二醇組皂苷對內(nèi)毒素休克大鼠體內(nèi)血管活性物質(zhì)的調(diào)節(jié)作用

于 蕾 王健春 黃 民 孫曉霞 (吉林大學白求恩醫(yī)學院生理學系，吉林 長春 3002)

人參二醇組皂苷(PDS)具有降血脂、抗血小板聚集、抗心肌缺血、提高機體免疫力、預防感染等作用〔1～4〕。實驗證明，PDS通過改善微循環(huán)狀態(tài)，對內(nèi)毒素休克具有保護作用〔5〕。血管活性物質(zhì)在內(nèi)毒素休克發(fā)病過程中扮演重要角色，其中血栓素(TXA2)、前列腺素I2(PGI2)及一氧化氮(NO)對維護機體血管功能及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要意義。但由于前二者半衰期較短，直接測定其含量困難極大，故國內(nèi)外均測定其代謝產(chǎn)物血栓素 B2(TXB2)及 6-酮-前列腺素 F1α(6-Keto-PGF1α)作為檢測指標。本實驗通過復制內(nèi)毒素休克模型，觀察PDS對內(nèi)毒素休克大鼠體內(nèi)TXB2、6-keto-PGF1α及NO含量的影響，探討PDS對內(nèi)毒素休克大鼠體內(nèi)血管活性物質(zhì)的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 Wistar大鼠50只，體重230～250 g雌雄各半，由吉林大學白求恩醫(yī)學院實驗動物中心提供。

1.1.2 藥品 PDS由吉林大學天然藥物化學教研室提供，為淡黃色粉末，純度85%以上;地塞米松注射液(天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司，批號:030216);大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS，Sigma公司)，血清型OⅢ:B4，均用5%葡萄糖溶液配制。TXB2、6-Keto-PGF1α檢測試劑盒(中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所，批號:20060108)。NOS、NO檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:20030813、20030829)。

1.2 方法 Wistar大鼠50只，實驗前禁食24 h，自由飲水。隨機分為五組:對照組(Control組，C組);內(nèi)毒素休克組(LPS組，L組);地塞米松預治療組(LPS+Dex組，LD組);PDS預治療組(LPS+PDS組，LP組)。動物用戊巴比妥鈉(30 mg/kg)腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥固定于鼠板上，分離一側(cè)頸總動脈，插動脈插管，通過壓力傳感器連接BL-420醫(yī)學機能實驗系統(tǒng)，記錄血壓，待血壓平穩(wěn)后，記錄正常的心率、血壓。實驗前C組和L組大鼠舌下靜脈注射5%葡萄糖溶液5 ml/kg，LD組靜脈注射地塞米松(2 mg/kg)葡萄糖溶液5 ml/kg，LP組分別靜注PDS(45 mg/kg、90 mg/kg)葡萄糖溶液 5 ml/kg，10 min 后除 C組外均靜脈注射LPS(5 mg/kg)，C組注入等量的葡萄糖溶液，以血壓降到實驗前基礎血壓的2/3時判斷為休克狀態(tài)〔6〕。各組在休克2、4 h時腹主動脈取血離心10 min(3 000 r/min)取血清待用。在休克4 h時處死動物，稱取肝組織20 mg置微型勻漿器中，加無水乙醇0.1 ml研磨，再加生理鹽水0.9 ml充分研磨制成勻漿，置于－20℃以下保存，待測TXB2和6-Keto-PGF1α的含量。肝組織中TXB2、6-Keto-PGF1α含量及血清NOS活性、/測定的操作方法按說明書。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包處理，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，所有結(jié)果均用表示。

2 結(jié)果

2.1 PDS對內(nèi)毒素休克大鼠肝組織中TXB2、6-keto-PGF1α的變化 在休克4 h時處死動物，稱取肝20 mg勻漿后，測得L組大鼠肝組織中TXB2及6-Keto-PGF1α的含量與對照組相比明顯升高(P ＜0.01);LP(45、90 mg/kg)組 TXB2及 6-Keto-PGF1α的含量均顯著低于 L組(P＜0.05，P＜0.01);LP(45 mg/kg)組6-Keto-PGF1α/TXB2比 L 組降低;LP(90 mg/kg)組 6-Keto-PGF1α/TXB2與L組比較未見差異。見表1。

2.2PDS對內(nèi)毒素休克大鼠血清中NOS活性、NO－2/NO－3含量的影響 注射內(nèi)毒素大鼠休克2～4 h后L組的血清NOS活性和 NO生成水平明顯升高(P＜0.01)，LD組和 LP(45 mg/kg)組2～4 h時NOS活性、NO－2/NO－3低于L組(P＜0.05)，LP(90 mg/kg)組只在2 h時NOS活性、NO－2/NO－3低于L組(P＜0.01)，4 h時與L組無明顯差異。見表2。

表1 PDS對內(nèi)毒素休克大鼠肝組織中的TXB2、6-Keto-PGF1α水平的影響(，n=10，pg/mg)

表1 PDS對內(nèi)毒素休克大鼠肝組織中的TXB2、6-Keto-PGF1α水平的影響(，n=10，pg/mg)

與C組比較:1)P＜0.01;與L組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 6-Keto-PGF1α TXB2 6-Keto-PGF1α/TXB2 13.18±2.53 12.68±1.83 1.06±0.23 L組 21.62±3.431) 21.40±2.851) 1.10±0.26 LD組 13.38±2.983) 13.34±3.243) 1.06±0.35 LP(45 mg/kg)組14.40±4.113) 18.68±2.992) 0.81±0.323)LP(90 mg/kg)組15.09±3.722) 15.60±0.913)C組0.93±0.26

表2 PDS對內(nèi)毒素休克大鼠血清中NOS活性及NO2－/NO3－含量的影響(，n=10)

表2 PDS對內(nèi)毒素休克大鼠血清中NOS活性及NO2－/NO3－含量的影響(，n=10)

與C組比較:1)P＜0.01;與L組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 劑量(mg/kg)NOS(nmol·min －1·g－1)NO(μmol/gprot)84 L組 5 45.43±6.281) 38.33±5.451) 32.48±2.611) 41.77±9.721)LD組 2 35.47±8.882) 30.17±5.842) 29.10±2.702) 32.91±6.192)LP組 45 39.20±8.832) 30.81±6.482) 29.96±1.742) 31.34±7.432)90 36.75±4.193) 33.37±6.02 28.77±2.323)2 h 4 h C組 － 29.23±1.84 28.45±4.20 26.71±2.28 25.21±1.2 h 4 h 33.07±7.29

3 討論

血管內(nèi)皮細胞釋放多種血管活性物質(zhì)，它們的活性特別是它們之間的相互作用決定血管口徑的變化。其中PGI2和NO有抑制血小板聚集和擴張小血管的作用;NO作為一種反應極強的自由基可以直接或間接介導內(nèi)毒素對組織器官的損傷。一氧化氮合酶(NOS)作為NO生成的限速酶，是影響內(nèi)毒素性休克發(fā)病過程的重要中介物質(zhì)〔7〕。由血小板微粒體合成并釋放的TXA2可促進血小板的聚集和小血管的收縮。感染性休克的病原微生物和內(nèi)毒素直接作用并損傷內(nèi)皮細胞，導致PGI2/TXA2平衡失調(diào)，成為引發(fā)彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)發(fā)生的重要原因之一。故內(nèi)毒素血癥及內(nèi)毒素休克的高發(fā)病率和高死亡率一直是困擾醫(yī)學界的一大難題。PDS作為人參中提取的天然活性成分，臨床應用副作用小，能夠改善微循環(huán)、抗血小板聚集、提高免疫力、預防感染〔2，4，5〕，具有傳統(tǒng)的抗休克藥物地塞米松無法比擬的優(yōu)點。

本實驗結(jié)果顯示，內(nèi)毒素休克大鼠體內(nèi) TXB2、6-Keto-PGF1α、血清NOS和NO水平與對照組相比均明顯升高，它們之間的相互作用或比例失衡可能是導致休克大鼠血管舒張、血小板聚集及持續(xù)性低血壓的重要原因〔8〕。PDS治療后，上述指標均有降低，LP(45 mg/kg)組6-Keto-PGF1α與TXB2的比值降低，提示PDS能夠調(diào)節(jié)體內(nèi)多項血管活性物質(zhì)的含量，改善微循環(huán)，在感染性休克治療中發(fā)揮重要作用。

1 胡翠華，徐華麗，于曉風，等.人參二醇組皂苷對實驗性2型糖尿病大鼠血糖及血脂代謝的影響〔J〕.吉林大學學報醫(yī)學版，2006;32(6):1004-8.

2 于曉風，曲紹春，劉 巍，等.西洋參莖葉20s-原人參二醇組皂苷對實驗性腦缺血大鼠血小板功能及血液流變學的影響〔J〕.中藥材，2011;34(2):272-5.

3 韓 冬，于曉風，曲紹春，等.人參二醇組皂苷對心肌梗死后心室重構大鼠心臟形態(tài)學及血動力學的影響〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(1):57-9.

4 謝新生，張秀麗，高 聆.一氧化氮對白血病HL-60細胞作用的研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2002;23(1):37-9.

5 唐笑迪，孫曉霞，王健春.人參二醇組皂苷對感染性休克大鼠血液流變性及微循環(huán)的影響〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(12):3044-6.

6 Jones SB，Romano FD.Plasma catecholamines in the conscious rat during endotoxicosis〔J〕.Circ Shock，1984;14(3):189-201.

7 劉 鋼，吳新民，王 庚，等.內(nèi)毒素血癥大鼠肺主動脈中一氧化氮合酶蛋白表達〔J〕.中華外科雜志，2001;39(2):171-3.

8 Gross SS，Wolin MS.Nitric oxide:Pathophysiological mechanisms〔J〕.Annu Reu physiol，1995;57:737-69.