Claudin－1和上皮型黏附素在胃癌中的表達

王海琴 佘曉玲 霍繼榮 龍利民 (中南大學湘雅二醫院老年病科，湖南 長沙 400)

腫瘤是危害人類健康最嚴重的疾病，而它的侵襲和轉移是惡性腫瘤的重要特征，是導致患者致死性的重要原因。胃癌的發生發展是一個多因素、多階段的復雜過程，涉及多個基因和多種分子水平變化，而細胞間的黏附力丟失常導致細胞連接的破壞，且與腫瘤細胞的浸潤和轉移相關。Claudin－1蛋白是新近發現的上皮細胞間緊密連接骨架蛋白，其有維持細胞極性和屏障的功能〔1〕。本實驗將應用免疫組織化學方法檢測96例胃癌中Claudin－1及上皮型黏附素(E－cad)的表達情況，探討二者在胃癌發生發展中的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集胃癌根治手術切除后標本96例，患者年齡為28～76歲，平均56．5歲，其中男性65例，女性31例，術前均未進行任何放化療。同時選取病理證實切端無癌的正常胃黏膜組織30例作為對照。

1.2 免疫組織化學方法檢測兩種蛋白的表達 實驗用的兔抗人Claudin－1和鼠抗人E－cad單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組織化學采用S－P法進行。

1.3 結果判定標準 Claudin－1蛋白陽性染色均位于細胞膜和細胞質，E－cad蛋白陽性染色位于細胞膜，呈棕黃色為陽性細胞，合并計算高倍鏡下(×400)隨機選擇的5個視野中陽性細胞占全部計數腫瘤細胞的百分率，平均每個視野細胞質(膜)呈陽性反應的細胞數≥10%為陽性，無明顯陽性反應或陽性反應的細胞數＜10%為陰性。

1.4 統計學方法 本實驗采用卡方檢驗，并計算Claudin－1和E－cad的相關性，所有統計數據均用SAS軟件分析完成。

2 結果

2.1 Claudin－1和 E－cad在胃癌、正常胃黏膜組織的表達 Claudin－1和E－cad在胃癌中表達的陽性率明顯低于正常胃黏膜組織(P ＜0．01)。見表1，圖 1。

2.2 Claudin－1、E－cad的表達與胃癌臨床病理特征的關系 胃癌中Claudin－1和E－cad蛋白的表達與分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移密切相關(P＜0．05)，見表2。而與患者的年齡及性別無明顯相關(P＞0．05)。

表1 Claudin-1及E-cad在胃癌、正常胃黏膜的表達〔n(%)〕

表2 胃癌中Claudin-1及E-cad的表達與臨床病理特征的關系〔n(%)〕

圖1 Claudin-1及E-cad在胃黏膜中的表達(DAB，×200)

2.3 Claudin－1與E－cad在胃癌中表達的關系 經相關分析，胃癌中 Claudin－1和 E－cad蛋白的表達呈正相關(r=0．350 2，P ＜0．05)。

3 討論

Claudins是一類跨膜蛋白，是從雞肝中得到的一種緊密連接的片段，迄今在人體內發現至少有24種不同蛋白，其序列的一致性為 12．5% ～69．7%，分子量大約為20～27 kD 之間〔2〕，每一種分子均有4個疏水跨膜區域，N末端和C末端位于細胞膜內，在細胞膜外形成兩個長度不等的環，膜內的C末端與胞質內的閉合蛋白 ZO－1，ZO－2，ZO－3 相連，膜外的兩個環與鄰近細胞的同型環相接，如此構成細胞間緊密連接，緊密連接具有柵欄功能和屏障功能〔3〕，柵欄功能把細胞分成頂側區和基側區，阻止兩個不同功能區之間的物質相互彌散，維持細胞的極相排列，而屏障功能則對分子大小、離子類型、細胞滲透性有選擇性，并調節不同功能區之間小分子運輸，維持組織的內穩態。近年有研究顯示，多種上皮性惡性腫瘤claudins有異常表達，并且與這些腫瘤發生和發展有密切關系〔4，5〕。鈣黏附素是一組Ca2+依賴跨膜蛋白，包括至少9個基因家族，其中以E－cad最為重要，是鈣依賴的黏附素家族的一個經典成員。近年來，有關緊密連接蛋白及黏附分子功能的研究日趨增多，并證實了其在腫瘤發生發展中的重要作用〔6〕。

本結果顯示胃癌Claudin－1和E－cad的陽性表達率比正常胃黏膜組織明顯降低，且都與胃癌的分化程度、浸潤深度及有無淋巴結轉移密切相關。既提示Claudin－1和E－cad在胃癌發生發展中可能起相當重要的作用，又由于分化程度、浸潤深度及有無淋巴結轉移是與胃癌患者預后密切相關的因素，因此提示它們可能與患者的預后密切相關。本實驗結果提示二者在胃癌的發生發展中具有正向的協同效應。在正常上皮細胞間不僅要維持上皮細胞結構的完整性和穩定性，還要通過與細胞骨架等胞漿內成分的連接進行信息傳遞〔7〕，而腫瘤進展時緊密連接完整性的破壞，可能是導致腫瘤細胞生長所需的營養因子及其他因子擴散的原因之一。還有研究顯示Claudin－1與E－cad參與特定細胞連接與黏附信號的傳遞，影響細胞遷移〔8〕，間接參與細胞骨架和細胞的信號傳導〔9〕，進而影響腫瘤的生物學行為。總之，Claudin－1和E－cad在胃癌組織中表達下調，二者可能與胃癌的發生發展有關，聯合檢測Claudin－1和E－cad可能更有助于判斷胃癌的預后。

1 Fritzsche FR，Oelrich B，Johannsen M，et al．Claudin－1 protein expression is a prognostic marker of patient survival in renal cell carcinomas〔J〕．Clin Cancer Res，2008;14(21):7035－42．

2 Huo Q，Kinugasa T，Wang L，et al．Claudin－1 protein is a major factor involved in the tumorigenesis of colorectal cancer〔J〕．Anticancer Res，2009;29(3):851－7．

3 郭宏艷，呂 苗，楊國嶸，等．Claudin－1、SMA和P63在乳腺皮增生及乳腺癌組織中的表達及其診斷價值〔J〕．西北國防醫學雜志，2009;30(2):123－5．

4 陳 琳，姜 泊，張亞歷，等．緊密連接蛋白claudin－1基因的克隆和大腸癌細胞表達載體的構建〔J〕．南方醫科大學學報，2007;27(3):349－51．

5 Dos Reis PP，Bharadwaj RR，Machado J，et al．Claudin 1 overexpression increase invasion and is associated with aggressive histological features in oral squamous cell carcinoma〔J〕．Cancer，2008;113(11):3169－80．

6 劉愛東，劉士生，許志萍，等．E－Cadherin在胃癌中的表達及意義〔J〕．廣東醫學，2007;28(11):1806－7．

7 胡孟鈞，徐航娣，魏建麗，等．子宮頸上皮內瘤變進展過程中Claudin－1的表達及意義〔J〕．臨床與實驗病理學雜志，2007;23(5):629－30．

8 楊莊青，黃云超，鄒天寧，等．E－cadherin、claudin－1聯合檢測與乳腺癌侵襲轉移關系的研究〔J〕．現代腫瘤醫學，2008;16(11):1904－6．

9 許曉勇，胡乃中．緊密連接蛋白claudins和胃癌〔J〕．國際消化病雜志，2009;29(1):8－10．