毛細管氣相色譜法同時檢測丙酸氯倍他索原料藥中4種有機溶劑殘留量

李春燕，屠婕紅，傅應華（1.杭州市下城區天水武林街道社區衛生服務中心，杭州市310003；.嘉興學院醫學院，嘉興市 314001）

丙酸氯倍他索系一種腎上腺皮質激素類藥物，為《中國藥典》2010年版二部收載的品種[1]，其制劑劑型主要有乳膏、軟膏、洗劑等，可用于治療皮膚炎癥和瘙癢癥，如神經性皮炎、接觸性皮炎、脂溢性皮炎、濕疹等[2]。《中國藥典》2010年版二部收載的丙酸氯倍他索質量標準中未收載其殘留溶劑檢測項目，文獻也未見有相關報道。丙酸氯倍他索因生產工藝不同引入的殘留溶劑也不同，其中甲醇、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亞砜等為主要殘留溶劑。已有的丙酸氯倍他索藥品注冊標準制定了乙醇、DMF 2種殘留溶劑的限度檢查方法[3]，尚不能控制不同生產工藝所制產品中殘留溶劑的檢測方法。有關殘留溶劑的檢測方法主要有氣相色譜法[4，5]，為了提高本品質量及用藥安全，筆者依據《中國藥典》2010年版二部附錄“殘留溶劑測定法”的相關要求[1]，對該原料藥中不同生產工藝引入殘留溶劑的檢測方法進行了研究，建立了毛細管氣相色譜法同時測定上述4種殘留溶劑的方法。該法可以控制不同生產工藝條件下的殘留溶劑，方法簡單、靈敏、準確。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

6890N氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器（FID）、7683B自動進樣器（帶10μL微量注射針）、色譜數據工作站（美國Agilent公司）；BP211D電子天平（北京賽多利斯有限公司，精度：±0.01 mg）。

1.2 試藥

丙酸氯倍他索原料藥5批（某原料藥廠提供，批號：20100316、20100319、201003122、20100323、20100325，按干燥品計，含量分別為100.3%、99.8%、99.2%、101.3%、98.77%）；無水乙醇（以下簡稱為乙醇）為分析純，甲醇、DMF和二甲基亞砜均為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

HP-INNOWAX石英毛細管柱（30 m×0.32 μm，0.25 μm）；柱溫：程序升溫，初始溫度60℃，保持5 min，并以30℃·min－1速率升溫至160℃，保持5 min；載氣：高純氮氣，流速：1.0 mL·min－1；FID溫度：250 ℃；進樣口溫度：160 ℃；進樣方式：分流進樣，分流比：5.0∶1；燃氣：氫氣，30 mL·min－1；助燃氣：空氣，450 mL·min－1；尾吹氣：氮氣，25 mL·min－1；進樣量：1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液。分別精密稱取甲醇15.01 mg、乙醇24.96 mg、DMF 4.37 mg、二甲基亞砜25.11 mg，置于加有適量1，6-二氧六環（溶劑）的10 mL容量瓶中，用1，6-二氧六環稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；再精密量取上述貯備液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用1，6-二氧六環稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 樣品溶液。取本品約0.5 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加1，6-二氧六環使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性考察。分別精密量取1，6-二氧六環和“2.2”項下對照品溶液和樣品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜。結果，1，6-二氧六環中的雜質峰不干擾殘留溶劑的分析，色譜見圖1。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.3.2 線性關系考察。分別取甲醇、乙醇、DMF、二甲基亞砜各10 mg，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加1，6-二氧六環至刻度，搖勻；精密量取上述溶液適量，用1，6-二氧六環逐級稀釋制成1.0、0.5、0.25、0.1、0.02 g·L－1的溶液，按上述色譜條件測定，以所得峰面積（Y）與相應對照品濃度（X）作線性回歸處理，得甲醇、乙醇、DMF、二甲基亞砜的回歸方程：Y＝770.4X－0.680，r＝1.000；Y＝1 219.6X+3.435，r＝1.000；Y＝903.7X+1.000，r＝1.000；Y＝976.7X+3.181，r＝1.000。表明各有機溶劑檢測濃度線性范圍均為0.02～1.0 g·L－1。

2.3.3 進樣精密度。精密量取對照品溶液1μL，注入氣相色譜儀，重復進樣6次，測定峰面積，計算平均峰面積：甲醇為120.8（RSD＝2.88%），乙醇為300.9（RSD＝1.61%），DMF為41.2（RSD＝1.16%），二甲基亞砜為403.1（RSD＝1.57%），表明精密度良好。

2.3.4 溶液穩定性試驗。取對照品溶液，分別于0、2、4、6、8 h取樣測定峰面積，計算得4種有機溶劑峰面積的RSD均低于2.0%，表明溶液在8 h內穩定。

2.3.5 最低定量限試驗。精密量取“2.3.2”項下的0.02 g·L－1溶液適量，用1，6-二氧六環逐級稀釋，依法測定，按S/N＝10計算，結果，最低定量濃度甲醇、乙醇、DMF、二甲基亞砜分別為0.60、0.98、0.38、0.79 μg·mL－1。

2.3.6 加樣回收率試驗。取經105℃干燥至恒重的樣品（批號為080115）約0.5 g，置于10 mL容量瓶中，精密稱定，共6份，分別精密加入上述對照品貯備液1 mL，再加1，6-二氧六環使溶解并稀釋至刻度，搖勻；再取對照品溶液，依法測定，計算回收率。得甲醇為99.3%（RSD＝0.70%）、乙醇為102.5%（RSD＝1.02%）、DMF為 97.6%（RSD＝1.09%）、二甲基亞砜為100.1%（RSD＝1.23%）（n＝6）。

2.3.7 樣品中殘留溶劑量測定。取批號為20100316、20100319、201003122、20100323、20100325的5批樣品各0.5 g，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液，取“2.2.1”項下對照品溶液作對照，依法測定。結果，批號20100319樣品中檢出甲醇量為0.06%，批號201003122、20100323樣品中檢出乙醇量分別為0.11%和0.18%，其余各批樣品均未檢出上述4種殘留有機溶劑。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

丙酸氯倍他索不溶于水，在乙酸乙酯與1，6-二氧六環中溶解，筆者試用乙酸乙酯作溶劑，結果因乙酸乙酯保留時間短，對甲醇、乙醇測定影響較大而棄用；改用1，6-二氧六環作溶劑，保留時間適宜，對上述4種溶劑測定均無影響，故選擇1，6-二氧六環作溶劑。

3.2 色譜條件的選擇

考慮到甲醇、乙醇、DMF、二甲基亞砜均為極性溶劑，且沸點差別較大，經試驗在HP-INNOWAX毛細管色譜柱上各組分分離效果良好。由于DMF、二甲基亞砜和1，6-二氧六環沸點較高，若采用等柱溫法，出峰時間長，拖尾嚴重。為了改善分離、縮短分析周期，采用了程序升溫法，讓低沸點的甲醇、乙醇先出峰，再快速升高柱溫使DMF、二甲基亞砜和1，6-二氧六環加速出峰，大大提高了DMF、二甲基亞砜的柱效，且峰形對稱。但試驗發現氣化室溫度高時，易產生丙酸峰，其保留時間與DMF的保留時間相近，會影響后者的分離。通過多次試驗，考察不同氣化溫度下的雜質峰影響，當溫度降至160℃時未見雜質峰產生。在給定的色譜條件下，甲醇、乙醇、DMF、二甲基亞砜之間均達到基線分離，一次進樣在13 min內完成測定，達到了快速分析的目的。

3.3 溶劑限度的擬定

根據《中國藥典》2010年版二部[1]規定，甲醇、DMF為第2類溶劑，其限度分別為0.3%、0.088%；乙醇、二甲基亞砜為第3類溶劑，限度均為0.5%。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：101、附錄61-65.

[2] 陳新謙，金有豫，湯 光主編.新編藥物學[M].北京：人民衛生出版社，2007：630.

[3] 國家食品藥品監督管理局.藥品注冊標準——丙酸氯倍他索YBH00962008[S].2008.

[4] 葉海青，傅應華.毛細管氣相色譜法測定丙酸倍氯米松中3種有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2010，21（13）：1 235.

[5] 魏京京，張啟明，朱維華.毛細管氣相色譜測定27種常用有機溶劑[J].藥物分析雜志，2006，26（8）：1 171.