TNF-α在膽脂瘤中的表達與64排CT的表現的關系

蔡勝艷，王宏偉，王樂秋，董祥梅

1.牡丹江醫學院紅旗醫院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龍江 牡丹江157013；2.牡丹江醫學院 病理教研室，黑龍江 牡丹江 157013

0 前言

膽脂瘤型中耳炎是耳科常見疾病，多伴有聽小骨破壞，而導致傳導性耳聾；患者的生存質量下降，如不及時治療，將進一步引起“硬膜外膿腫”等嚴重并發癥。其骨質破壞作用是導致各種顱內、外并發癥的主要原因，嚴重者可危及患者生命。CT掃描仍是膽脂瘤的主要檢查手段，64排CT具有良好的密度及空間分辨率，圖像清晰，解剖定位準確，能清晰顯示耳部細微結構，能對病變侵犯范圍及程度作出精確判斷。近年來隨著分子生物學的發展，多種細胞因子在膽脂瘤的發生發展中的作用得到了證實，本實驗在對TNF-α在膽脂瘤發生發展中的作用進行了研究，并進一步探討了TNF-α與聽小骨在CT表現上骨質破壞程度的關系。

1 材料和方法

1.1 一般資料

病例選自牡丹江醫學院紅旗醫院2008年3月～2010年3月接受64排螺旋CT檢查的膽脂瘤患者30例，常規石蠟包埋制成4μm厚的切片進行TNF-α免疫組織化學染色。患者年齡為20～50歲，平均35歲，其中，男性18例，女性12例。

1.2 64排螺旋CT掃描方法

采用Aquiline 64排螺旋CT掃描機。掃描條件：120kV，200mAs，層厚0.5mm。30例患者均行橫斷掃描，患者仰臥，先掃定位片后，設定掃描計劃。掃描范圍從外耳孔至巖骨上緣，層厚及層間距均為1mm。窗寬：3000Hu；窗位：2000Hu。64排CT所見聽小骨改變按骨質破壞方式，程度分為：消失（全部或部分）、破壞（包括聽小骨密度降低，邊緣欠光滑）、移位、關節融合固定。

1.3 免疫組織化學染色

本研究采取Envision System通用二步法檢測TNF-α，所需材料為：兔抗人TNF-α蛋白多克隆抗體，PV6000試劑盒，DAB顯色試劑（以上試劑均購自北京中山生物技術有限公司）。

1.4 結果判斷

每個標本隨機選3張切片計數細胞數。在光鏡200倍下進行陽性細胞計數，每片取3個不同的清晰視野，每個視野下陽性細胞百分率(%)＝陽性細胞數/總細胞數×100%，取其均值±標準差(±s)%。

1.5 統計學分析

應用x2檢驗對實驗結果進行統計學分析，探討膽脂瘤臨床CT征象與TNF-α蛋白表達的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TNF-α在膽脂瘤與正常外耳道皮膚的表達比較（表1）

表1 TNF-α在膽脂瘤與正常外耳道皮膚的表達比較

2.2 膽脂瘤中聽小骨的CT破壞程度與TNF-α表達的關系比較（表2）

結果顯示TNF-α蛋白表達水平與HRCT掃描聽小骨骨質破壞程度密切相關，隨著TNF-α蛋白表達水平增加骨質破壞程度也隨著加重，組間的差異均有統計學意義（P<0.05）。

表2 膽脂瘤中聽小骨的CT破壞程度與TNF-α表達的關系比較

3 討論

TNF-α在中耳膽脂瘤骨質破壞中的作用及與HRCT掃描骨質破壞程度的關系：腫瘤壞死因子（TNF）于1975年發現，1985年學者們根據其細胞來源和分子結構不同，將TNF分為α型和β型，TNF-α主要由脂多糖（LPS）等激活的單核巨噬細胞產生[1]。

TNF-α是由157個氨基酸殘基組成，分子量為17kD的疏水性蛋白質，在70℃條件下1h即失活，對蛋白酶敏感。天然TNF-α主要由激活的巨噬細胞和一些細胞系，如HL-60、U937等細胞所分泌，在另外一些條件下其本身也能產生TNF-α的基因。TNF-α受體分布廣泛，多種腫瘤細胞或細胞系可表達TNF-α受體，許多正常細胞，如成纖維細胞、血管內皮細胞、人胚肺細胞、鼠肝細胞等均表達一定水平的TNF-α受體[2]。

TNF-α的生物學活性相當廣泛，已經遠遠超過其名稱本身的含義，除了具有抗腫瘤作用外，其對免疫反應、機體代謝、炎癥反應具有重要的調節和介導作用。TNF-α可直接殺傷或抑制某些腫瘤細胞；可促進細胞毒性T淋巴細胞（CTL）表達主要組織相容性復合體I（MHC-I）類抗原并增強其殺傷活性；可刺激單核細胞、內皮細胞等分泌IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α本身及其他趨化因子等；可以增強中性粒細胞等的吞噬和殺傷病原體的作用，促進肝細胞合成急性期蛋白，引起發熱等[3]。

Kinoshita[4]與Chodynik[5]分別用ELISA和免疫放射法證實了膽脂瘤上皮組織中TNF-α水平明顯高于外耳道上皮的TNF-α水平。本實驗用免疫組化法在蛋白水平對膽脂瘤組織和正常外耳道皮膚的TNF-α表達情況進行了研究，結果表明，膽脂瘤組織的TNF-α表達水平明顯高于正常外耳道皮膚，兩者之間具有顯著性差異，結果與Kinoshita等人基本一致。

同時結果顯示，不同聽小骨骨質破壞程度CT表現組間TNF-α的表達水平有差異，并且發現膽脂瘤組織中TNF-α的表達水平與膽脂瘤的骨質破壞程度呈相關性，即膽脂瘤上皮中TNF-α的表達水平越高，膽脂瘤導致的骨質破壞范圍越廣，累計的部位越多。因此，我們可以推斷，TNF-α是膽脂瘤引起骨質破壞的一個關鍵因素。所以，觀察膽脂瘤組織中的TNF-α的表達水平既可以進一步幫助明確診斷，又可以為判斷預后提供有力根據。

[1]薛秋紅.腫瘤壞死因子(TNF-α)與人中耳膽脂瘤的關系[J].數理醫藥學雜志,2001,14(2):155-156.

[2]張承志,楊啟勝.慢性膽脂瘤型中耳炎HRCT診斷[J].實用醫學影像雜志,2005,6(5):257-259.

[3]李楠,秦兆冰.基質金屬蛋白酶-9和腫瘤壞死因子-α在中耳膽脂瘤中的表達[J].臨床耳鼻咽喉科雜志,2004,18(7):424-426.

[4]Wang SY,Gao J,Lei QY, et al.Prostate-specific deletion of the murine PTENtumor suppressor gene leads to metastatic prostate cancer[J].Cancer cell,2003,4(3):209-210.

[5]Chu EC,Tarnawski AS.PTEN regulatory functions in tumor suppression and cell biology[J].Med Sci Monit,2004,10(10):235-241.

[6]王雪貞,曾莉,降風,等.小鼠TNF-α基因RNAi慢病毒載體的構建及體外研究[J].卒中與神經疾病,2009,16(1):5-8.

[7]樓文蓉,鄭明秀.β防御素2在中耳膽脂瘤上皮中的表達及意義[J].醫學綜述,2009,16(4):25-27.

[8]顧之燕.中耳乳突膽脂瘤形成和發展的免疫學機制[J].臨床耳鼻咽喉科雜志,2004,18(4):4-7.