MITF 、S-100 蛋白 、HMB45 在黑素瘤以及色素痣中的表達及意義

尹占東,夏建新,王延龍,王勁風,牟 妍,梅向林,倪勁松

(1.吉林大學第二醫院皮膚科,吉林長春 130041;2.吉林大學基礎醫學院病理生物學重點實驗室,吉林長春 130021;3.松原占東皮膚科診所,吉林松原 138000）

黑素瘤的病理表現千變萬化,免疫染色尤為重要。到目前為止,我們常用的黑素細胞的標記物有S-100蛋白和HMB45,S-100蛋白敏感性高,但缺乏特異性,除了黑素細胞以外,雪旺細胞、肌上皮細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、組織細胞以及郎格罕細胞均陽性。而HMB45特異性較強,但敏感性較低,尤其對梭形細胞黑素瘤、促纖維生成性黑素瘤不表達。MITF(Microphthalmia Transcription Factor）是一微小轉錄因子,國外多數學者認為MITF是一敏感性和特異性均較強的診斷黑素瘤和色素痣的免疫標記物。為了探討MITF、S100蛋白以及HMB45在黑素瘤、色素痣中的表達情況,做了以下實驗。

1 材料和方法

1.1 實驗材料鼠抗人S-100蛋白單克隆抗體、鼠抗人HMB45單克隆抗體、PV9000以及 DAB、AEC顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術有限公司,NCL-MITF鼠多克隆抗體購于Novocastra Laboratories公司。石蠟包埋組織標本來源于日本九州大學皮膚科以及吉林大學第二醫院皮膚科,共收集黑素瘤標本32例,色素痣4例,藍痣2例及Spitz痣2例。

1.2 實驗方法

1.2.1 載玻片及標本處理 將載玻片行硫酸浸泡、自來水沖洗、乙醇浸泡、烤箱烤干后用多聚賴氨酸包被、備用。將石蠟包埋組織標本進行薄切3.5 μ m,置于事先處理好的載玻片上,37℃過夜烤干。將標本常規脫蠟、脫水。做HMB45免疫染色時,將標本用微波加熱進行抗原修復,做MITF免疫染色時,將標本進行高壓處理,進行抗原修復,S100蛋白免疫染色無需抗原修復。

1.2.2 免疫染色 具體步驟按操作說明書進行,AEC顯色劑顯色,顯微鏡下觀察。

MITF抗體的免疫染色緩沖液為TBS,而S-100蛋白及HMB45抗體的免疫染色緩沖液為PBS。

1.2.3 結果判斷 S-100蛋白和HMB45陽性部位為細胞質見棕褐色顆粒,陽性細胞＞75%為(+++）,＞50%為(++）,＞25%為(+）,＜25%為(-）;MITF為細胞核著色,＞10%即判為(+）。

2 結果

2.1 黑素瘤的組織病理分型32例黑素瘤標本中,表淺擴散型(SSM）6例,結節型(NM）5例,惡性雀斑樣痣型(L MM）6例,末端雀斑樣痣型黑素瘤(ALM）9例,轉移至皮膚的黑素瘤3例,淋巴結轉移標本3例。細胞學分類中多數為上皮樣細胞型,其中梭型細胞黑素瘤2例。

2.2 S-100蛋白、HMB45、MITF在黑素瘤以及色素痣中的表達見表 1及圖 1、2、3。

表1 S-100蛋白、HMB45、MITF在黑素瘤、色素痣中的表達

從S-100蛋白免疫染色結果中看到:黑素瘤的陽性率為96.8%(圖1）,色素痣的陽性率為100%。正常人表皮黑素細胞、肌上皮細胞,部分纖維細胞均陽性,4例色素痣、2例藍痣以及2例Spitz痣均陽性。在HMB45免疫染色中看到:黑素瘤的陽性率為81.2%(圖2）。其陽性僅出現于黑素瘤、活躍的色素痣和Spitz痣(圖3）,正常表皮黑素細胞不表達。從MITF的免疫染色結果可以看到:黑素瘤的陽性率為96.8%,色素痣的陽性率為100%。除黑素細胞、痣細胞以及黑素瘤細胞陽性外,其余皮膚組織未見陽性反應。

圖1 MM S100蛋白(+++,SP法×200）

圖2 MM HMB45(SP×400）

圖3 Spitz痣HMB45(+++）(sp×200）

3 討論

惡性黑色素瘤(Malignant Melanoma,MM）是一種高度惡性的腫瘤,其診斷除臨床、組織病理外,免疫染色尤為重要。本研究通過免疫染色的方法觀察了32例黑素瘤、4例色素痣、2例藍痣以及2例Spitz痣中MITF、S-100蛋白以及HMB45的表達情況,結果顯示:S100蛋白在診斷黑素瘤以及色素痣中具有較高的敏感性,其陽性率分別為96.8%和100%,此結果與國內外的一些文獻報道相一致[1],但由于S100蛋白除黑素細胞,黑素瘤細胞外,在神經膠質細胞以及來源的腫瘤、雪旺細胞以及來源的腫瘤、正常橫紋肌、心肌、脂肪細胞、成纖維細胞等均有表達,因而一些與上述相關的腫瘤也均表達S100蛋白[2,3],在本實驗中也觀察到毛囊肌上皮細胞和部分纖維細胞也表達S100蛋白,因而,S100蛋白在診斷黑素瘤以及色素性皮膚病中具有敏感性高而特異性低的特點,臨床應用受到一定限制。在HMB45染色中觀察到,其陽性僅出現于黑素瘤和增生活躍的黑素細胞,如交界痣細胞、Spitz痣中真表皮交界處的細胞,皮膚組織中的其他成分也未見陽性反應,提示HMB45對黑素瘤的診斷具有較高的特異性[4]。MITF是黑素細胞的核蛋白,對黑素細胞的生成和活性起著關鍵性作用,調節包括黑素細胞起源的細胞如黑素母細胞、黑素細胞以及黑素瘤細胞的形態、分化和生存[5]。但對于MITF在色素性疾病以及黑素瘤中的表達情況國外文獻報道并不一致[6,7,8],國內尚未見到相關文獻報道。在觀察Ncl-MITF的染色中發現,Ncl-MITF在皮膚組織中幾乎出現在所有黑素瘤細胞、色素痣細胞、以及正常黑素細胞中,在黑素瘤中的陽性率為96.8%。在色素痣、藍痣以及Spitz痣中均表達,此表達陽性率與S100蛋白在黑素瘤以及色素痣中的表達相同,同時,Ncl-MITF對于皮膚組織的其他成分均無反應,此點又與HMB45的表達情況相似,因此,Ncl-MITF是一種對于黑素瘤的診斷敏感性和特異性均較強的免疫標記物[6]。MITF陰性出現在1例患者,此標本S-100蛋白及HMB45均陽性,從中可以看出,對于MM的診斷要結合臨床、組織病理以及多項免疫組化指標進行綜合分析判斷,最終得出正確的結論。

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