HPLC法測定冠心舒通膠囊中沒食子酸的含量

馬久太 單 娜 盧新義 王曉梅 劉 峰 南景一

(1陜西步長制藥有限公司，陜西咸陽，712000;2陜西省中藥制藥工程技術研究中心)

冠心舒通膠囊是以蒙醫理論為依據研制而成的一種新藥，由廣棗、天竺黃、丹參等5味藥制備而成，具有活血化瘀、通經活絡、行氣止痛的功能，用于胸痹心血瘀阻導致的冠心病、心絞痛等疾病的治療［1］。為更好地控制產品質量，本研究在其原質量標準基礎上，對君藥廣棗中的沒食子酸進行含量測定，并對方法學進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

3400A型高效液相色譜儀;二極管陣列檢測器;AR1140電子天平;KQ·250TB超聲波清洗器;ΜPT－1－10高純水機。沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號831－9501);冠心舒通膠囊(陜西步長制藥有限公司生產，批號 090411、090621、090814、091011、091210、100321、100521、100812、101015、101215);甲醇為色譜純，水為高純水，其他均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗［2－3］以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250mm×4.6mm，5μm);以甲醇－0.1%磷酸水(10∶90)為流動相;流速1.0mL·min－1;檢測波長273nm;柱溫30℃。理論塔板數按沒食子酸峰計算不得低于3000。

2.2 供試品溶液制備 取本品內容物適量，研細，約取2.0g，精密稱定，精密加入70%甲醇20mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成每1mL含50.87μg的溶液，即得。

2.4 干擾性試驗 依據處方制備不含廣棗的樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液與陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果在對照品相應位置處，供試品有吸收峰，陰性沒有吸收峰，表明無干擾，且基線分離良好。

2.5 線性關系考察 精密吸取對照品溶液(50.87μg·mL－1)2、4、6、8、10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積。以進樣量(X)為橫坐標，峰面積值(Y)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程式:Y=3 ×106X+14845，r=0.9999，結果表明，沒食子酸進樣量在0.1017～0.5087μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。見圖1。

圖1 沒食子酸標準曲線

2.6 精密度試驗 取冠心舒通膠囊(批號100521)，按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件操作，重復進樣6次，記錄峰面積，結果見表1。結果沒食子酸峰面積積分值RSD為1.28%，表明本方法精密度良好。

表1 精密度試驗結果

表2 穩定性試驗結果

2.7 穩定性試驗 取冠心舒通膠囊(批號100521)供試品溶液，按上述色譜條件操作，分別在 0、1、2、4、8、12h進樣，記錄峰面積，結果見表2。結果沒食子酸峰面積積分值RSD為0.79%，表明供試品溶液在12h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗 取冠心舒通膠囊(批號100521)樣品6份，按上述方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件操作，記錄峰面積，計算，結果見表3。結果RSD為1.39%，沒食子酸含量為0.264mg·g－1，表明本方法重復性良好。

表3 重復性試驗結果

2.9 加樣回收率試驗 取冠心舒通膠囊(批號100521)6份，各約1.0g，精密稱定，加入一定量的沒食子酸對照溶液(100.87μg·mL－1)，按上述方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件操作，記錄峰面積，計算回收率，結果見表4。結果平均回收率為99.44%，RSD為0.66%，表明回收率良好。

表4 加樣回收率試驗結果

2.10 樣品含量測定及限度確定 隨機抽取近2年內生產的10個批次的冠心舒通膠囊，按照上述方法測定沒食子酸含量，結果見表5。結果10批樣品的含量測定數值在78.6～106.8μg/粒之間，平均值為92.5μg/粒，故擬定本品每粒含沒食子酸不得少于75μg。

表5 冠心舒通膠囊中沒食子酸含量測定結果

3 討論

廣棗為蒙醫和藏醫習用藥材之一，臨床主要用于氣滯血瘀引起的胸痹作痛的治療，現代藥理學研究表明廣棗有明顯的抗心肌缺血的作用［4］，沒食子酸為其主要成分，因此我們對冠心舒通膠囊君藥廣棗中的沒食子酸進行了含量測定。沒食子酸含量測定方法目前有比色法、薄層分光光度法、高效液相色譜法、反相高效液相色譜法等，本次試驗采用高效液相色譜法對冠心舒通膠囊進行含量測定，平均回收率99.44%，RSD 0.66%，方法靈敏、準確、重現性好。試驗研究［5－7］中曾考察了沒食子酸的不同提取方法，結果以回流提取法＞冷浸過夜法＞超聲提取法，說明溫度較高條件下沒食子酸容易提取;同時回流提取30min，能夠將冠心舒通膠囊中沒食子酸提取完全。

［1］國家藥典委員會.冠心舒通膠囊質量標準［S］［標準號WS3－155(Z－025)－2005(Z)］.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.北京:化學工業出版社:41.

［3］龍海燕，彭飛成，姚蓉.高效液相色譜法測定復方青果顆粒中沒食子酸含量.中南藥學，2010，8(6):416 －419.

［4］王平.民族藥廣棗有效部位藥代動力學研究［D］.成都中醫藥大學，2004.

［5］冶平.HPLC測定藏藥五味麝香片中沒食子酸的含量.中國執業藥師，2011，8(1):38 －39.

［6］蘇孝共，鄭國平，蔡進章.高效液相色譜法測定泌淋膠囊中沒食子酸的含量.浙江中醫藥大學學報，2010，34(2):273－274.

［7］戚重恒，倪觀鋒.高效液相法測定地稔中沒食子酸的含量.浙江中醫雜志，2010，45(3):220 －221.