維吾爾藥阿育魏實中一個單萜糖苷的譜學分析

馬慶東1，李國玉1，2，王航宇1，2，張珂1，王金輝1，2，3*

（1.石河子大學藥學院，新疆 石河子 832002；2.教育部省部共建新疆特種植物藥資源重點實驗室，新疆 石河子 8320 02；3.沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110016）

維吾爾藥阿育魏實中一個單萜糖苷的譜學分析

馬慶東1，李國玉1，2，王航宇1，2，張珂1，王金輝1，2，3*

（1.石河子大學藥學院，新疆 石河子 832002；2.教育部省部共建新疆特種植物藥資源重點實驗室，新疆 石河子 8320 02；3.沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110016）

目的：確證維吾爾藥阿育魏實中一個單萜糖苷類化合物的結構。方法：采用硅膠柱色譜、開放式ODS柱色譜及高效液相色譜分離化合物，運用U V、I R、Nm R、C D及M S技術確定該化合物結構。結果：對該化合物結構的譜學特征進行全歸屬。結論：該化合物鑒定為6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從該植物分離得到。

阿育魏實；單萜糖苷；6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；光譜分析

阿育魏實為《衛生部藥品標準·維吾爾藥分冊》（1999年）收載品種，系傘形科糙果芹屬植物阿育魏Trachyspermum ammi（L.）Sprague的干燥成熟果實，廣泛分布于非洲至南亞，我國新疆喀什、和田等地區引種栽培，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、降血脂、降血壓、驅腸蟲、助消化、促流產等多種藥理活性［1-3］。單萜糖苷類化合物是其主要活性成分之一，苷元母核是麝香草酚的衍生物，是一類結構比較特殊的單環單萜天然產物。

作者從阿育魏實乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分離得到1個化合物，經有機波譜分析，確定它的結構為6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從該植物分離得到。

1 儀器與材料

沃特斯高效液相色譜儀（HPLCWaters 2695S ezarationsmodule），ShimadzuUV-2401PC紫外-可見分光光度計，Shimadzu IRAFFINITY-1紅外光譜儀，BRUKER-APX-600型核磁共振光譜儀測定（TMS作內標），BiologicmOS-450圓二色譜儀，WatersL CTPremier XEtime-of-flying質譜儀。薄層色譜用硅膠GF254、柱色譜用硅膠（200～300目）均為青島海洋化工有限公司生產。石油醚（沸程60～90℃）、丙酮、三氯甲烷、甲醇等均為分析純。

阿育魏實藥材購自于新疆喀什，經石河子大學藥學院譚勇教授鑒定為傘形科糙果芹屬植物阿育魏Trachyspermum ammi（L.）Sprague的干燥成熟果實，標本號N o.20071016008，保存在石河子大學藥學院。

2 提取分離

取干燥阿育魏實4.2kg，依次用95%和70%乙醇10倍、10倍、8倍量浸泡1h，回流提取3h，60℃減壓回收溶劑得浸膏653g，再分別依次用石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚萃取部分浸膏（90g），三氯甲烷萃取浸膏（29g），醋酸乙酯萃取浸膏（29g），正丁醇萃取浸膏（93g）。醋酸乙酯部分經200～300目硅膠柱色譜分離，以三氯甲烷－甲醇溶劑系統（體積比為100∶0～0∶100）進行梯度洗脫。100∶5洗脫流分經硅膠柱色譜分離，以三氯甲烷－丙酮－甲醇系統進行梯度洗脫，得到的100∶5∶5～100∶6∶6流分經開放ODS柱色譜、高效液相色譜分離得到該化合物（50.3mg）。

3 譜學分析

3.1 紫外光譜圖

化合物紫外光譜圖中（CH3OH）205nm處的峰屬于E1吸收帶，由苯環烯鍵π-π*躍遷產生，216nm處的峰，屬于苯環E2吸收帶，由苯環共軛烯鍵ππ*躍遷產生，285nm處的寬峰屬于苯環B吸收帶，由苯環的π-π*躍遷產生。苯環的B帶顯著紅移，提示苯環取代較為復雜。

3.2 紅外光譜圖

化合物紅外光譜圖中（KBr）1664.57cm－1處得吸收峰為苯環骨架振動。3450.65cm－1，3369.64cm－1處的吸收峰為羥基的吸收峰。1199.72cm－1處的吸收峰為烷基芳基醚的＝C－O－C上的不對稱＝C－O伸縮振動吸收峰。2850.79和2956.87處的吸收峰為甲基的特征吸收峰。

3.3 NmR譜圖

圖11H-NMR（600MHz，CD3OD）譜中可見19個氫信號。其中δ 4.74（1H，d，J＝7.2H z，H-1′）為β-D-葡萄糖基端基氫特征信號，提示化合物中含葡萄糖基結構。除去葡萄糖基所有的-C H-氫信號，還剩余12個氫信號，其中δ6.95（1H，s，H-5），6.64（1H，s，H-2）為苯環氫信號，提示苯環為1，2，4，5-四取代；δ2.16（3H，s，H-7）為甲基氫特征信號，其化學位移值提示甲基與苯環直接相連；δ 3.50（1H，m，H-8）和1.19（6H，d，J＝6.6H z，H-9，10）為異丙基氫特征信號；這些氫信號與本課題組前期研究分離得到的麝香草酚氫信號進行比較，推測基本結構為6-取代的麝香草酚。

圖1化合物的1H-NmR（60 0MH z，C D3O D）譜圖

圖2 化合物的13C-Nm R（150M H z，C D3O D）譜支持了這種推測，譜圖共給出16個碳信號，其中δ 151.8（C-6），149.2（C-3），138.2（C-4），123.2（C-1），120.3（C-2），113.0（C-5）為麝香草酚苯環碳信號，δ10 4.4（C-1′），78.3（C-3′），78.0（C-5′），75.2（C-2′），71.6（C-4′），62.7（C-6′）為β-D-吡喃葡萄糖基特征碳信號，δ 27.0（C-8），23.7（C-9），23.6（C-10），16.1（C-7）為4個烷基碳信號。

圖2 化合物的13C-NmR（150MH z，C D3O D）譜圖

圖3 化合物的HmB C譜圖

然而，僅依據以上信息難以確定葡萄糖基的位置。于是對化合物進行了Hm B C測試。圖3Hm B C譜中可見葡萄糖基端基氫δH4.74與δC149.2（C-3）存在遠程相關，故確定葡萄糖基位于麝香草酚的C-3位。此外，δH1.19（H-9，10）與δC27.0（C-8），δH3.50（H-8）與δC149.2，138.2，113.0（C-3，4，5）存在遠程相關，以及δH2.16（H-7）與δC123.2，120.3，151.8（C-1，2，6）存在遠程相關，證實了化合物的母核為6-取代的麝香草酚。1D-Nm R數據歸屬及Hm B C相關見表1及圖4。

表1 化合物的1H-NMR（600MHz）and13C-NMR（150MHz）數據（C D3OD）

圖4 化合物HmBC譜中主要的遠程相關

3.4 CD譜圖

圖5 化合物的C D譜圖

3.5 HR-EI-TOF-MS譜圖

化合物的質譜圖中可見準分子離子峰［M-H］－m/z 327.1441（C16H23O7：calcd.for 327.1444），［2MH］－m/z 655.2977（C32H47O14：calcd.for 655.2966），［2M＋H］＋m/z657.3141（C32H49O14：calcd.for657.3122），故確定化合物的分子式為C16H24O7。

4 結論

綜合UV、IR、NMR、HPLC-MS分析結果可知，該化合物分子式為C16H24O7，鑒定為6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從該植物中分離得到，結構式見圖4。

［1］B.Singh，R.K.Kale.Chemomodulatory effect of Trachy-spermum ammi on murine skin and forestomach papillomagen-esis［J］.Nutrition and Cancer，2010，62（1）：74-84.

［2］A.K.Pathak，N.Nainwal，B.M.Goyal，etal.Pharmaco-logical activity of Trachyspermum ammi：a review［J］.JPharm Res，2010，3（4）：895-899.

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［4］J.Kitajima，T.Ishikawa，A.Urabe，et al.Monoterpenoids and their glycosides from the leaf of thyme［J］.Phytoc hemis try，2004，65：3279-3287.

Spectral Analysis of a Monoterpene Glycoside from the Seeds of Trachyspermum ammi（L.）Sprague，a Traditional Uygur medicine

M
AQing-dong1，LIGuo-yu1，2，WANG Hang-yu1，2，ZHANGKe1，WAN GJin-hui1，2，3
（1．School of Pharmacy，Shihezi University，Shihezi 832002，China；2.Key Laboratory of Phytomedicine Resoureces＆Modermization of Tcm，Shihezi 832002，China；3.School of Chinese materica medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shen yang110016，China）

Objective：To identify a monoterpene glycoside from the seeds of Trachyspermum ammi（L.）Sprague.Methods：The compound was isolated by column chromatographic method including silica gel，ODS together with pre-HPLC，and identified by spectral analysis involving UV，IR，NMR and MS.ResultsAll signals of the compound was assigned by above mentioned spectral techniques.ConclusionThe compound was identified as 6-hydroxy-thymol 3-O-β-D-glucopyranoside，and obtained from the title plant for the firs time.

Trachyspermum ammi（L.）Sprague；Monoterpene glycoside；6-hydroxythymol 3-O-β-D-gluco-pyranoside；Spectral analysis

國家重大科技專項（2010ZX09401-304-104A）

*王金輝，Tel：（0993）2055001，E-mail：tcm＿shz＠yahoo.cn

2011-0 4-29）