野葛花解酒作用機理研究

劉 瑩，郁建平

(貴陽學院，貴州貴陽550003)

野葛花解酒作用機理研究

劉 瑩，郁建平*

(貴陽學院，貴州貴陽550003)

目的:探討野葛花提取物解酒作用機理，為中藥解酒保肝藥物的開發提供依據。方法:觀察比較野葛花提取物與解酒護肝膠囊對小鼠肝臟勻漿中ADH、ALDH、SOD、GSH－PX的酶活力的影響［1］。結果:野葛花提取物能夠明顯提高ADH、ALDH、SOD、GSH－PX活力。結論:野葛花提取物通過提高ADH、ALDH、SOD、GSH－PX活力以達到其解酒的作用，進而對抗酒精性肝損傷。

野葛花提取物，ADH，ALDH，SOD，GSH－PX，解酒機理

近年來隨著人們生活水平的提高，飲酒成為部分人生活的一種方式，大量或長期飲酒，則易導致急慢性酒精中毒。野葛花又名葛條花，為豆科植物野葛Pueraria lobata(Wild)ohwi的干燥花蕾。野葛花用于解酒已有近千年的歷史，《神農本草經》、《本草綱目》等記載其具有解酒醒脾之功效［2］。目前關于野葛花的解酒效果研究的文獻比較多，但真正從解酒作用機制方面展開研究的還不多，所以本實驗對野葛花提取物解酒作用機制進行初步的探討。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

葛花藥材 購于貴州省貴陽市花果園藥材市場，經貴州大學生命科學學院植物教研室廖海明教授鑒定為豆科植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)的干燥花蕾;瀘州老窖二曲酒 45度，四川瀘州老窖股份有限公司，生產批號:0905150911;天天清護肝解酒膠囊 香港資美堂生物科技有限公司，批號:豫衛食字(2004)第4098號;氯化鈉注射液貴州六枝工礦集團大華藥業有限公司，批號:200906043;氧化型輔酶Ⅰ溶液 南京建成生物工程研究所，批號:20091008;5－二硫代－雙－2－硝基苯甲酸(DTNB) Sigma公司，批號:020413;SOD測定試劑盒 南京建成生物工程研究所，批號:20091023;GSH－PX測定試劑盒 南京建成生物工程研究所，批號:20091014;實驗動物 昆明種小鼠，雄性，體重(18±2)g，由重慶市中藥研究院動物室提供，許可證號:scxk(渝)20070006。

數顯恒溫水浴鍋(KW－1000D) 上海梅香儀器有限公司;AR1140/C型電子天平 美國奧豪斯(上海)公司;GZX－9140電熱恒溫鼓風干燥箱 上海博達實業有限公司醫療設備廠;旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器廠;低溫冷凍干燥箱 上海杰技環境實驗設備有限公司;紫外分光光度儀TU－1901 北京普析通用;臺式高速冷凍離心機 長沙平凡儀器儀表有限公司;組織勻漿器。

1.2 供試品制備

1.2.1 野葛花粗提物的制備 取野葛花藥材，于40℃干燥粉碎，采用70%乙醇加熱回流提取二次，每次回流2h，合并濾液，減壓回收乙醇至浸膏，冷凍干燥，得到野葛花乙醇粗提取物粉末，該粉末1g相當于10g原生藥。

表1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH、ALDH活力的影響(±s)

表1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH、ALDH活力的影響(±s)

注:與模型組比較，bp＜0.01，ap＜0.05，n=10;表2同。

組別 劑量(g·kg－1)肝中ADH的活力(U·0.1mL－1)肝中ALDH的活力(U·0.1mL－1)空白組 —837.145±106.348 276.298±69.478模型組 — 568.685±364.391 234.620±117.413陽性對照組 2.400 866.130±490.052 372.945±161.281b野葛花粗提物組 45.400 978.740±208.011a 407.570±78.001a野葛花總異黃酮組 8.000 1113.342±332.486a 453.440±80.458a

表2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD、GSH－PX活力的影響(±s)

表2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD、GSH－PX活力的影響(±s)

組別 劑量(g·kg－1)肝中SOD的活力(U·0.1mL－1)肝中GSH－PX的活力(U·0.1mL－1)空白組 —153.471±23.139 28.411±12.150模型組 — 145.026±48.295 26.439±10.460陽性對照組 2.400 174.820±47.285 32.312±13.349野葛花粗提物組 45.400 211.389±69.024b 35.693±18.502野葛花總異黃酮組 8.000 249.388±44.267a 41.624±8.287a

1.2.2 野葛花總異黃酮提取物 取一定量野葛花乙醇粗提取物粉末，加水溶解，配成4mg·mL－1的溶液，上樣于X－5型大孔樹脂，用70%乙醇洗脫并收集洗脫液，將所得到的洗脫液再經減壓濃縮揮去乙醇，得到的浸膏冷凍干燥得到野葛花總異黃酮提取物粉末，該粉末1g相當于100g原生藥。

1.3 實驗方法

1.3.1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH與ALDH活力的影響 取小鼠50只，隨機分成5組，每組10只，分別為野葛花粗提物組、野葛花總異黃酮提取組、陽性對照組、模型對照組、空白對照組。小鼠禁食12h后，除空白對照組ig生理鹽水外，其他各組均ig 45度瀘州老窖0.02mL·g－1。于ig 45度瀘州老窖前30min，給藥組分別ig給藥，劑量分別為:野葛花粗提物45.400g·kg－1，野葛花總異黃酮提取物8.000g·kg－1，陽性對照組灌胃天天清護肝解酒膠囊2.400g·kg－1，模型對照組灌胃等量的生理鹽水，空白對照組ig等量蒸餾水。酒后2h處死各組小鼠，取肝臟。按照1g肝臟∶4mL蔗糖溶液的比例量取蔗糖溶液。肝臟先用生理鹽水，后用蔗糖溶液沖洗，再放入已稱量好的蔗糖溶液中，在冰水浴中剪碎，勻漿，把勻漿液放入10mL離心管中。以4000r·min－1離心10min，以除去細胞碎片、紅細胞和核，小心地取出上清液，以9000r·min－1再次離心10min，得上清液用于ADH活力的測定，沉淀為線粒體，加入1mL蔗糖溶液，制成懸浮液后可以進行ALDH活力的測定，整個離心過程保持在0～4℃溫度下進行。

ADH活力單位的定義:于波長340nm處，每分鐘吸光度增大0.001所需酶量為一個ADH活力單位，計算公式為:

式中:ΔA為340nm處每分鐘吸光度的增大值;3.1為反應液的總體積;0.1為加入反應體系的ADH提取液體積。

ALDH活力單位的定義:于波長340nm處，每分鐘吸光度增大0.001所需ALDH的量為一個乙醛脫氫酶活力單位，計算公式為:

式中:ΔA為340nm處每分鐘吸光度的增大值;

3.5 為反應液的總體積;0.1為加入反應體系的ALDH提取液體積［3］。

1.3.2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD和GSH－PX的影響 取小鼠50只，隨機分成5組，每組10只，分別為野葛花粗提物組、野葛花總異黃酮提取組、陽性對照組、模型對照組、空白對照組。每天早上定點給藥組分別ig野葛花粗提物45.400g·kg－1，野葛花總異黃酮提取物8.000g·kg－1，陽性對照組ig天天清護肝解酒膠囊2.400g·kg－1，模型對照組ig等量的生理鹽水，陽性對照組ig等量蒸餾水。下午定點各組分別ig 45度瀘州老窖0.02mL·g－1，空白對照組ig等量的蒸餾水。連續灌胃14d，最后1d灌酒1h后，處死各組小鼠，取肝臟。肝臟用冰冷的生理鹽水漂洗，除去血污，吸干水分，稱重，放入組織勻漿器中，然后按照體積重量比為1∶10的比例量取預冷的生理鹽水，在冰浴中用組織勻漿器勻漿，勻漿液轉移到10mL離心管中，置高速冷凍離心機中3000r·min－1離心10min，除去細胞核及膜碎片，上清液即為10%肝組織液。將其分別稀釋到1%和0.25%備用。小鼠肝臟組織SOD和GSH－PX的活力測定參照南京建成生物工程研究所試劑盒使用說明進行。

1.3.3 數據處理 采用SPSS 13.0統計軟件，實驗數據結果用±s來表示，組間差異比較采用t檢驗。

2 結果與分析

2.1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH與ALDH活力的影響

結果見表1。

由表1數據可知，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮均可增強ADH、ALDH的活性。

2.2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD與GSH－PX活力的影響

結果見表2。

由表2可知，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮均可提高小鼠肝臟中SOD、GSH－PX活力，并且野葛花粗提物組SOD活力與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.01)。

3 討論

野葛花作為我國的傳統中藥，用于解酒已有千年的歷史。為探討其解酒機理進行了上述研究，結果如下:在ADH和ALDH活力測定實驗中，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮與模型組相比，活力顯著提高，具有統計學意義，說明野葛花通過提高ADH和ALDH的活性，加快乙醇的代謝速率，起到解酒作用。通過對SOD和GSH－PX活力的測定，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮與模型組相比要高，說明野葛花通過增強SOD和GSH－PX的活性，加強清除具有毒性的超氧離子，從而達到保肝的作用。

［1］湯子春，鄒坤，汪鋆植.開口箭與筒鞘蛇菰提取物醒酒作用機制的研究［J］.時珍國醫國藥，2007，18(12):2958－2960.

［2］尹俊亭，仲英，孫敬勇.葛花的研究進展［J］.中草藥，2005，36(12):1905－1906.

［3］雷雨.絞股藍、麥飯石有效成分解酒作用及其抗酒精性肝損傷的研究［D］.廣州:廣州工業大學，2001.

［4］苑隆國，李旭，王曉輝.護肝膠囊對人和小鼠體內乙醇脫氫酶活性的影響［J］.中國新醫藥，2003，2(4):28.

［5］任發政，羅云波，蔣箐莉.枳椇子影響乙醇代謝機理研究［J］.食品科學，2002(12):60.

Mechanism for the extracts from flower of Pueraria lobata to inhibit alcoholism

LIU Ying，YU Jian－ping*
(Guiyang University，Guiyang 550003，China)

Objective:To elucidate the mechanism for the extracts from flower of Pueraria lobata to inhibit alcoholism in order to provide the basis on new medicine.Methods:Compared the effect of the extracts of Pueraria lobata flower and an agent“Anti－alcoholic Liver capsule”on the activities of ADH，ALDH，SOD and GSH－PXin liver homogenate.Results:The extracts of Pueraria lobata flower can markedly increase the activities of ADH，ALDH，SOD and GSH－PX.Conclusion:The extracts from flower of Pueraria lobata can markedly enhance the activities of ADH，ALDH，SOD and GSH－PXto against alcohol－induced liver injury.

extracts from flower of Pueraria lobata;ADH;ALDH;SOD;GSH－PX;inhibit alcoholism

TS201.4

A

1002－0306(2011)04－0355－03

2010－03－22 *通訊聯系人

劉瑩(1985－)，女，碩士研究生，主要從事天然藥物成分及生理活性的研究。

資源植物草珊瑚二次開發及種植基地建設項目基金支撐(黔科合縣市(2009)7012－1)。