兩種副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基實際應(yīng)用效果比較

鄧冬云 陳 萍

（廣東省佛山市禪城區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東 佛山 528031）

兩種副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基實際應(yīng)用效果比較

鄧冬云 陳 萍

（廣東省佛山市禪城區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東 佛山 528031）

目的比較HKC vibrio副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar vibrio副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基的實際應(yīng)用效果。方法兩兩配對按照國標(biāo)(GB/T4789.7-2008)進行檢驗。結(jié)果在HKC和CHROMagar兩種顯色培養(yǎng)基上，副溶血性弧菌（簡稱VP）均呈現(xiàn)特殊的紫色菌落；通過對112份水產(chǎn)食品檢測，HKC 檢出VP陽性率為21.43%，CHROMagar檢出VP陽性率為23.21%，二者無顯著性差異；對于弧菌顯色培養(yǎng)基而言，兩種培養(yǎng)基假陽性率一致；結(jié)論HKM弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar vibrio弧菌顯色培養(yǎng)基在水產(chǎn)品的實際檢測中具有相同的檢測效果。

弧菌顯色培養(yǎng)基；實際應(yīng)用；比較

副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus），又稱嗜鹽菌，屬于弧菌科，弧菌屬，是一種重要的食源性致病菌，廣泛存在于世界各國的沿海地區(qū)。由該菌引起的中毒在細菌性食物中毒中占的比例很高，嚴重威脅著人類健康[1-3]。為有效控制副溶血性弧菌污染發(fā)生和擴散，準確及時的檢測手段是關(guān)鍵。目前副溶血性弧菌檢測仍以傳統(tǒng)方法為主，在檢驗中選擇性平板是分離菌落最重要的培養(yǎng)基。檸檬酸鈉-硫代硫酸鈉-氯化鈉-蔗糖瓊脂（TCBS）是目前國內(nèi)外最常用的分離平板，基于副溶血性弧菌不發(fā)酵蔗糖的特點并結(jié)合酸堿指示劑對其進行鑒定，副溶血性弧菌在這種平板上呈現(xiàn)綠色菌落。但是TCBS平板存在一定缺陷，當(dāng)有發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸、在TCBS上產(chǎn)生黃色菌落的一類弧菌存在時，由于顏色擴散，副溶血性弧菌往往不容易辨認；而且，TCBS不能有效的區(qū)分副溶血性弧菌和與其生化特點相似的創(chuàng)傷弧菌、擬態(tài)弧菌等。

利用顯色培養(yǎng)基鑒定微生物是近年來開發(fā)的新型快速檢測技術(shù)，通過在分離培養(yǎng)基中加人細菌特異性酶的顯色底物，直接根據(jù)菌落顏色就可以對菌種做出初步鑒定，減少顏色擴散等其他方面的干擾因素，大大提高了檢測效率。目前HKM和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基為市場上較為常見的產(chǎn)品。

本實驗室將HKM和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基就實際應(yīng)用效果進行了比較研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基及試劑

法國科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基CHROMagar vibrio購自鄭州博賽生物科技有限公司，HKC vibrio、3.5%NaCL堿性蛋白胨水、3%NaCL胰蛋白胨大豆瓊脂、副溶血性弧菌生化鑒定管、法國生物梅里埃API生化試劑條等購于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

生物安全柜、超凈工作臺、電熱恒溫培養(yǎng)箱、全自動高壓滅菌鍋、電子天平、顯微鏡、冰箱、接種環(huán)、培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、移液管、涂布棒、剪刀。

1.3 樣品

從肉菜市場采集魚、蝦、蟹、貝類等共112份。

1.4 檢驗方法

魚類和頭足類動物取表面組織、腸或腮；貝殼取全部內(nèi)容物，包括肉和體液；甲殼類取整個動物，或者動物的中心部分，包括腸和腮。

以無菌操作取樣品25g，加入225mL 3.5%NaCL堿性蛋白胨水，36℃培養(yǎng)18h后，分別取1環(huán)增菌液劃線接種HKC vibrio和Chromagar vibrio平板，36℃培養(yǎng)18～24h，觀察。挑取可疑菌落，接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃進行純培養(yǎng)18～24h，做氧化酶試驗、革蘭氏染色鏡檢、轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂并做嗜鹽性試驗進行初步鑒定，疑似菌落采用API20E生化鑒定試劑盒，結(jié)合傳統(tǒng)生化方法進行鑒定后報告結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 兩種培養(yǎng)基弧菌菌生長狀況比較

在CHROMagar弧菌顯色平板上，可疑副溶血性弧菌菌落呈圓形、半透明、表面光滑的粉紫色，直徑2～3mm。在HKM弧菌顯色平板上，疑似副溶血性弧菌與在CHROMagar平板上的菌落形態(tài)相似，只是疑似菌落的顏色在HKM vibrio平板上比CHROMagar vibrio略為偏紫。

2.2 兩種培養(yǎng)基副溶血性弧菌陽性率比較

兩種培養(yǎng)基對樣品中副溶血性弧菌陽性率見表1。

表1 兩種培養(yǎng)基對樣品中副溶血性弧菌陽性率

本次實驗共檢測水產(chǎn)品112份，CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基檢出副溶血性弧菌26份，陽性率為23.21%；HKM弧菌顯色培養(yǎng)基檢出副溶血性弧菌24份，陽性率為21.43%。按配對試驗結(jié)果處理，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，二者無顯著性差異（χ2=0.167，P＞0.05）。

2.3 兩種培養(yǎng)基出現(xiàn)針對可疑菌落而言的假陽性情況比較

在應(yīng)用CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基和HKM弧菌顯色培養(yǎng)基對112份樣品的檢驗中，在顯色培養(yǎng)基上出現(xiàn)了疑似菌落的樣品而最終均鑒定為副溶血性弧菌的，CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基是疑似菌落為27份，最終鑒定陽性份數(shù)為26份，假陽性份數(shù)1份；HKM弧菌顯色培養(yǎng)基是疑似菌落為25份，最終鑒定陽性份數(shù)為24份，假陽性份數(shù)1份。可見兩種培養(yǎng)基檢驗結(jié)果中，對于弧菌顯色培養(yǎng)基的疑似陽性而言，其假陽性率一致。

3 討 論

顯色培養(yǎng)基法的原理是使用適當(dāng)?shù)娘@色底物，在細菌特異性酶的作用下，發(fā)色基團游離并附著于菌落上，使菌落顯示一定的顏色。酶的特異性是影響顯色培養(yǎng)基的質(zhì)量關(guān)鍵，好的顯色培養(yǎng)基應(yīng)菌落顏色易識別、不同種微生物差別較大以及較穩(wěn)定等，顯色培養(yǎng)基檢測的實用性還與樣本中細菌的種類和數(shù)量有關(guān)，標(biāo)本中細菌的種類繁雜，非目的菌數(shù)量龐大往往會影響目的菌的檢出，所以在顯色培養(yǎng)基中加入一些特殊的抑菌劑，可以抑制樣本中雜菌的生長而不影響目標(biāo)菌的生長，從而提高檢出率。鑒于顯色培養(yǎng)基具有快速、靈敏、高效等諸多優(yōu)點，目前許多國家都在致力于顯色培養(yǎng)基的開發(fā)，并逐步將之引入到各種國際和國家檢驗標(biāo)準中，其作為一種新的微生物快速檢測技術(shù)已得到了廣泛的認可。在GB/T4789.7-2008中，CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基已經(jīng)被增加為選擇性平板之一，在本標(biāo)準中解釋道，如果有其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可以使用這些等效產(chǎn)品。

本研究中，在HKM弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基平板上，副溶血性弧菌均呈現(xiàn)特殊的紫色菌落，其他弧菌呈現(xiàn)藍色或無色菌落；從表1可以看出，對于112份實際樣品，HKM弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基的檢出水平一致；對于弧菌顯色培養(yǎng)基的疑似陽性而言，其假陽性率一致。

試驗中還發(fā)現(xiàn)，有部分樣品分離在HKCvibrio和Chromagarvibifo兩種顯色培養(yǎng)基后，都生長了較多的白色菌落，據(jù)報道，多為溶藻弧菌，在一定程度上影響了副溶血性弧菌的檢出。分析可能是由營養(yǎng)競爭因素造成的，因此，尤其是對多種菌污染的海產(chǎn)品樣品，要特別注意溶藻弧菌的干擾作用，這也是在實際樣品檢測副溶血性弧菌在實驗中，需研究和克服的干擾因素之一。

根據(jù)GB/T4789.7-2008培養(yǎng)基使用原則，可以使用CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基或HKM弧菌顯色培養(yǎng)基作為副溶血性弧菌檢驗的分離培養(yǎng)基。

[1] 鄧至愛,李孝權(quán),張健,等.廣州市海產(chǎn)品副溶血性弧菌污染狀況調(diào)查及PFGE分型研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(5):1130-1132.

[2] 張淑紅,吳清平,張菊梅,等.副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基檢測效果初步評價[J].微生物學(xué)通報,2008,35(1):145-148.

[3] GB/T4789.7-2008.食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗-副溶血性弧菌檢驗[S].北京:中國標(biāo)準出版社,2008:1-2.

R378.3

B

1671-8194（2011）35-0045-02