金線蓮莖尖的組培快繁技術(shù)研究

李丹丹 張付遠(yuǎn)

江西環(huán)境工程職業(yè)學(xué)院園林與建筑學(xué)院 341000

金線蓮莖尖的組培快繁技術(shù)研究

李丹丹 張付遠(yuǎn)

江西環(huán)境工程職業(yè)學(xué)院園林與建筑學(xué)院 341000

本研究以金線蓮莖尖作為外植體，研究了不同激素濃度對(duì)金線蓮莖尖誘導(dǎo)、增殖及生根率的影響。結(jié)果表明：對(duì)于金線蓮比較適合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是：MS+ 6-BA 4. 0mg/L + ZT0. 2mg/L +NAA 0. 5mg/L；增殖較佳的組合是1/2Ms+6-BA0·4mg·L-1+ NAA0· 2mg·L-1。當(dāng)NAA的濃度達(dá)到2·0 mg·L-1時(shí)生根率最高，可以達(dá)到100%。

金線蓮；6-BA；NAA

金線蓮為蘭科開唇蘭屬多年生珍稀中草藥。素有“藥王”、“金草”、“神藥”、“烏人參”等美稱。金線蓮具有涼血瀉火、消腫止痛的功效，能調(diào)節(jié)體內(nèi)分泌，抑制分泌過多的油質(zhì)，促進(jìn)皮膚細(xì)胞的新陳代謝，服用后對(duì)青春痘、粉刺、各種黑斑、雀斑、老人斑效果奇佳。野生金線蓮干貨最高曾漲到每公斤3000多元。

金線蓮種子微小，胚發(fā)育不完全，在自然條件下極難出芽；若以分根或扦插繁殖，則耗時(shí)長且繁殖系數(shù)低，金線蓮賴以生存的自然環(huán)境發(fā)生變化，野生資源銳減，現(xiàn)已瀕絕，加上長期采挖，種質(zhì)資源稀缺，已瀕臨滅絕，已不能滿足臨床需要。目前，雖然組培快繁金線蓮雖已有報(bào)道，金線蓮的組培快繁技術(shù)在各個(gè)環(huán)節(jié)上的研究取得較大進(jìn)展，但還不太穩(wěn)定，規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)有待進(jìn)一步研究和突破，如誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的配方問題，若能解決這些制約因素，組培快繁技術(shù)在金線蓮產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)過程中將大有作為[1-2]。

本研究以觀賞金線蓮幼嫩莖尖為外植體，采用組織培養(yǎng)生物技術(shù)金線蓮進(jìn)行組培快繁研究，包括初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等階段的影響和制約因素的研究。

1 、材料與方法

1.1 材料

以福建的野生金線蓮莖尖作為培養(yǎng)的材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選擇與培養(yǎng)

小心切取金線蓮的莖尖，流水沖洗1h，取出后吸干表面水分以75%酒精浸泡12s，然后再用0.1%的升汞溶液浸泡15min，無菌水沖洗5 遍，再用無菌濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺(tái)上，小心的剝?nèi)デo尖外面的包片，接種于： MS+ 6-BA 4. 0mg/L + ZT0. 2mg/L +NAA 0. 5mg/ L的培養(yǎng)基上。

1.2.2 不定芽的增殖

將長1～2cm的莖段接種于誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基(表1)上，20d后，莖節(jié)間開始膨大、腋芽發(fā)白，漸漸突起并伸長。40d后，腋芽生長良好，不經(jīng)過愈傷組織階段,并且有的基部又長出新芽。

1.2.3 生根

采用生長健壯，繼代3次后的高約 2cm的幼苗用作試驗(yàn)材料。基本培養(yǎng)基是組培苗生根的營養(yǎng)來源, 一般低濃度的營養(yǎng)成分有利于組培苗的根誘導(dǎo)。生根培養(yǎng)以 1/ 4MS為基本培養(yǎng)基，均分別附加0.5 mg·L-1的NAA，共 5個(gè)處理。生根培養(yǎng)40d后統(tǒng)計(jì)生根情況。

1.2.3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基均附加蔗糖20 g·L-1，瓊脂6.2g·L-1，pH值5.6-6.0。培養(yǎng)溫度25 ±2℃，光強(qiáng) 2000～2500Lx，光照10h/ d。

2 、結(jié)果與分析

2.1 不同激素濃度配比對(duì)金線蓮增殖的影響

在金線蓮的組織培養(yǎng)過程中，芽增殖是十分關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，只有提高增殖倍數(shù)，才能達(dá)到快速繁殖的目的。在金線蓮繼代培養(yǎng)過程中，影響金線蓮芽增殖的一個(gè)關(guān)鍵因素就是培養(yǎng)基中激素濃度的配比。為了研究激素配比對(duì)金線蓮芽增殖的影響 ，以1/2Ms為基本培養(yǎng)基，附加6-BA和 NAA進(jìn)行配比試驗(yàn)（見表1）。

表1 不同激素配比對(duì)金線蓮芽增殖的影響

從表 1 可以看出，當(dāng) NAA 濃度為0. 5 mg·L-1時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，再生芽的增殖系數(shù)呈上升趨勢(shì)，同時(shí) 6 -BA 濃度為 3.0mg·L-1時(shí)，雖然增殖系數(shù)最大，但增殖的芽纖細(xì)，葉片小，長勢(shì)差 ，故6 - BA濃度以3.0mg·L-1為宜。

2.2 NAA濃度對(duì)金線蓮生根的影響

把繼代培養(yǎng)的金線蓮無根苗切割成單苗,接種在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)20 d 后開始有根冒出，隨后根的數(shù)量進(jìn)一步增多，并逐漸伸長，到30 d 左右統(tǒng)計(jì)各處理的生根情況。

NAA濃度對(duì)金線蓮生根率的影響比較大，結(jié)果見表3。本實(shí)驗(yàn)以不附加NAA作為對(duì)照，生根率并非隨著NAA濃度的增加而增加，當(dāng)NAA濃度為2.0 mg·L-1時(shí)生根率達(dá)到最大。試驗(yàn)只對(duì)濃度對(duì)發(fā)根的影響進(jìn)行了調(diào)查, 因此對(duì)等其它生長素類及生長素的相互混合使用效果則有待于進(jìn)一步研究。

表2 NAA濃度對(duì)金線蓮生根的影響

3 、結(jié)論與討論

3.1 不同激素配比對(duì)金線蓮芽增殖的影響

影響金線蓮組織培養(yǎng)的因素主要有基本培養(yǎng)基、激素配比、有機(jī)添加物及培養(yǎng)條件，其中激素配比是最為關(guān)鍵的因素[3-

5]。

對(duì)于金線蓮芽誘導(dǎo)和增殖最佳激素種類和濃度配比，不同學(xué)者研究結(jié)果有所差異，王雅英[3]通過正交試驗(yàn)認(rèn)為Ms+6-BA3. 5mg·L-1+KT1.5mg·L-1+ NAA0.6mg· L-1組合是芽快速成增殖的最佳配方，三種激素對(duì)芽繼代增殖系數(shù)影響大小為6-BA>NAA>KT；劉潤東[4]認(rèn)為6-BA和NAA濃度過高不利于芽叢的發(fā)生，在附加6-BA1.0mg·L-1的Ms培養(yǎng)基上，添加低濃度的ZT能明顯促進(jìn)芽叢的發(fā)生；范子南[5]認(rèn)為6-BA對(duì)芽分化具有促進(jìn)作用，隨著6-BA濃度的提高其促進(jìn)芽分化的過程也加強(qiáng)。結(jié)合本試驗(yàn)認(rèn)為：金線蓮芽誘導(dǎo)的比較合適激素配比為MS+ 6-BA 4. 0mg/ L + ZT0.2mg/L+NAA0.5mg/L；而增殖較為理想的激素配比為1/2Ms+6-BA3. 0mg·L-1+ NAA0.5mg·L-1

3.2 NAA對(duì)金線蓮的生根的影響

NAA對(duì)金線蓮的生根的影響比較大，但生根率并非隨著NAA濃度的增加而增加，當(dāng)NAA的濃度達(dá)到2.0 mg·L-1時(shí)生根率最高，可以達(dá)到100%。

總之隨著民間珍稀藥用植物資源的日趨枯竭,采用現(xiàn)代生物技術(shù)通過組織培養(yǎng)加速開發(fā)對(duì)發(fā)掘傳統(tǒng)的民間中草藥有著極其深遠(yuǎn)的意義。

[1]馬以忠，鄧琳瓊，黃麗華.金線蓮的研究現(xiàn)狀及展望[J].貴州科學(xué).2007，25 (2):81～84

[2]陳芝華，胡啟燦.金線蓮組培快繁與移栽試驗(yàn)研究[J].三明農(nóng)業(yè)科技.2005，103(3): 13～15·

[3]王雅英，林榮耀，楊忠耿等.金線蓮快速繁殖及促根壯苗試驗(yàn)[J].亞熱帶植物科學(xué). 2005，34( 3) : 40～42

[4]劉潤東，郭文杰，林忠寧等.金線蓮組織培養(yǎng)及營養(yǎng)成分的分析研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2006, 37(5) : 506 -509·

[5]范子南，肖華山，范曉紅等.金線蓮組織培養(yǎng)研究[J]·福建師范大學(xué)學(xué)報(bào). 1997，13(2) : 82 ～87·

李丹丹，女，碩士，主要從事植物植物組培研究。

10.3969/j.issn.1001-8972.2011.21.019