HPLC測定藏藥五味麝香片中沒食子酸的含量

冶平

（青海省九康醫藥保健品有限公司，青海 西寧810001）

藏藥五味麝香片是由麝香、訶子（去核）、黑草烏、木香、藏菖蒲等5 味中藥制成的片劑，具有消炎，止痛，祛風的功效。用于扁桃體炎、咽峽炎、流行型感冒、炭疽病、風濕性關節炎、神經痛、胃痛，牙痛。方中訶子為君藥，為控制其質量，我們在參考有關文獻的基礎上[1-4]，采用高效液相色譜法測定五味麝香片中沒食子酸的含量，該方法準確度高、重現性好、專屬性強、適用面廣，可為產品的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP 二元泵（島津公司）；Rheodyne 7725 進樣器（美國）；SPD-M10AVP 二極管陣列檢測器（島津公司）；Class-VP 液相色譜工作站（島津公司）；Milli-Q 超純水裝置。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。水為重蒸水并經0.45 μm 濾膜過濾。對照品沒食子酸(C7H6O5，S1)購自中國藥品生物制品檢定所，批號為749-200008。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.60 mm，5 μm)，流動相為甲醇－水－磷酸 (8∶92∶0.01)，流速：1 mL/min; 檢測波長為273 nm，AUFS：0.01；柱溫30℃，理論塔板數按沒食子酸峰計算應不低于1 000，見圖1。

圖1 色譜分離圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取沒食子酸對照品1.2 mg置10 mL 容量瓶中，甲醇定容，即得。

2.2.2 供試品溶液 取五味麝香片10 片，研細，混勻，精密稱定1 g，置具塞錐形瓶中，加CH3OH 20 mL，放置在80℃水浴加熱回流30 min，取出，冷卻，過濾，濾液轉移至25 mL 容量瓶中，殘渣加甲醇洗數次，用CH3OH 定容至25 mL 量瓶中，搖勻，過0.45 μm 的微孔濾膜，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 線 性 關 系 分別精密吸取對照品溶液4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 μL，依次進樣。測定沒食子酸峰面積積分值，以峰面積積分值Y為縱坐標，對照品進樣量X為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程Y=280 504.7X+67 752.6，r=0.999 4，表明沒食子酸在0.48 ～2.4 μg 呈良好線性關系。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL 連續進樣5 次，分別測定沒食子酸峰面積值為2 945 096，2 936 560，2 929 019，3 016 840，3 019 795，得RSD為1.20%。

2.3.3 重現性試驗 取同一批號五味麝香片，分別按“供試品溶液”項下操作，制備5 份供試液，進樣測定沒食子酸含量分別為2.40，2.36，2.32，2.41，2.40 mg/g，RSD為1.52%。

2.3.4 穩定性實驗 精密稱取五味麝香片樣品，按“2.2.2”項下方法制備成供試品溶液，在12 h 內，每隔1 h進樣10 μL，測定沒食子酸的峰面積積分值分別為3 409 867，3 376 158，3 367 430，3 343 466，3 306 149。RSD為1.51%，說明沒食子酸在12 h 內穩定，符合樣品測定條件。

2.3.5 回收率試驗 采用加樣回收法，即取已知含量的樣品，分別加入一定量的沒食子酸對照品，按樣品測定方法測定沒食子酸含量，計算回收率，結果見表1。2.4 樣品含量測定 精密吸取對照品和供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，連續進樣3 次，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜峰面積，以外標法計算樣品中沒食子酸含量，其結果見表2。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結果

表2 三批供試品中沒食子酸的測定結果

3 討論

本次實驗采用HPLC 測定藏藥五味麝香片中沒食子酸的含量方法，該法精確、重現性好，可作為藏藥五味麝香片中沒食子酸質量控制的測定方法。實驗中曾用甲醇－水為流動相，但分離效果不佳，雜質對沒食子酸吸收峰有干擾，改用甲醇－水－磷酸(8∶92∶0.01)為流動相后，沒食子酸吸收峰與雜質吸收峰可得到較好的分離，此方法適合于測定藏藥五味麝香片中沒食子酸的含量。

[1]茅向軍,許乾麗,熊慧林,等.高效液相色譜法測定熱淋清膠囊中沒食子酸的含量[J].中國中藥雜志，2002，27(8)：589-591.

[2]沙明, 陳吉文. 高效液相色譜法測定地榆中沒食子酸的含量[J].中國中藥雜志，1999，24(2)：99-100.

[3]李愛群,蔡葵花,林勵.薄層掃描法測定利喉樂含片中沒食子酸的含量[J].分析測試學報，1999，18(1)：64-66.

[4]卞阿鳳,常越萍,金蓉鸞.石明合劑中沒食子酸含量測定[J].中國中藥雜志，1994，19(5)：287-288.