RUNX3、CyclinD1在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

林志川 李建國 吳春暖 沈洪武 鄒宗楷

·論著·

RUNX3、CyclinD1在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

林志川 李建國 吳春暖 沈洪武 鄒宗楷

目的檢測RUNX3、CyclinD1蛋白在胰腺癌組織中的表達，分析其臨床意義。方法采用免疫組化SP法檢測47例胰腺癌、18例胰腺囊腺瘤及12例正常胰腺組織中RUNX3和CyclinD1蛋白的表達，分析它們與臨床病理參數間的關系。結果胰腺癌、胰腺囊腺瘤和正常胰腺組織的RUNX3蛋白陽性表達率分別為57.4%(27/47)、94.4%(17/18)、100%(12/12)；CyclinD1蛋白陽性表達率分別為72.3%(34/47)、44.4%(8/18)、8.3%(1/12)。胰腺癌RUNX3陽性表達與患者性別、年齡無關，與胰腺癌的臨床分期、淋巴結轉移、分化程度呈負相關(P<0.05)。CyclinD1陽性表達與患者性別、年齡無關，與胰腺癌臨床分期、淋巴結轉移、分化程度呈正相關(P<0.05)。胰腺癌組織RUNX3與CyclinD1的表達呈負相關(r=-0.375,P=0.009)。結論胰腺癌組織中RUNX3呈低表達，Cyclin D1呈過表達，它們均與胰腺癌的發生、發展有關。

胰腺腫瘤; RUNX3; CyclinD1; 免疫組織化學

胰腺癌的發生、發展是一個多種癌基因和抑癌基因參與的過程。RUNX3是RUNTt家族中最近受到廣泛關注的基因，定位于人染色體1p36.1，其在人類多種消化系統腫瘤的發生過程中起重要作用而倍受關注[1-3]。細胞周期素CyclinD1已被證實為原癌基因，作為限制調控G1期過程中最重要的正調控基因，其過度表達導致細胞周期調控異常,從而促使腫瘤發生。本研究檢測胰腺癌組織中RUNX3、CyclinD1蛋白的表達，分析它們與臨床病理參數間的關系。

材料與方法

一、材料

選取我院2004年至2010年間手術切除的胰腺癌組織標本47例，男26例，女21例，年齡33～82歲，中位年齡54歲。所有標本均經病理學證實，按國際抗癌聯盟(UICC)和美國腫瘤聯合委員會(AJCC)關于胰腺癌的臨床病理TNM分期(第6版)，其中Ⅰ期1例，Ⅱ期22例，Ⅲ期22例，Ⅳ期2例；低分化17例，中分化16例，高分化14例。所有患者術前均未接受放療和化療。同時取18例胰腺囊腺瘤及12例正常胰腺組織標本(包括5例胰腺外傷和7例非腫瘤性的良性病變距病灶2 cm以外的正常胰腺組織)作為對照。

二、RUNX3及Cyclin D1蛋白檢測

采用免疫組化SP法。鼠抗人RUNX3一抗購自北京博奧森生物技術有限公司，鼠抗人CyclinD1一抗購自福州邁新生物技術有限公司，按試劑盒說明書操作。每張切片在400倍顯微鏡下觀察5個視野，每個視野計數200個細胞。RUNX3陽性細胞為胞質有棕黃色顆粒沉著或被染成棕黃色。根據陽性細胞百分率及染色深淺分級，參照Ito等[4]方法評分。Cyclin D陽性細胞為細胞核著色或胞質胞核同時著色，單純胞質著色視為陰性，參照Fromowitz等[5]方法評分。

三、統計學方法

所有數據用SPSS 13.0處理。陽性率比較采用χ2檢驗，RUNX3、Cyclin D1表達與臨床病理參數的關系采用Fisher′s精確檢驗，RUNX3、CyclinD1表達相關性分析運用PERSON方法。P<0.05為差異具有統計學意義。

結 果

一、 RUNX3、Cyclin D1蛋白的表達及其相關性

胰腺癌、胰腺囊腺瘤和正常胰腺組織的RUNX3陽性表達率分別為57.4%(27/47)、94.4%(17/18)、100%(12/12)，RUNX3在正常胰腺、胰腺囊腺瘤和胰腺癌中的表達依次下調(P<0.05,圖1a、b、c)。胰腺癌、胰腺囊腺瘤及正常胰腺組織的Cyclin D1蛋白陽性表達率分別為72.3%(34/47)、44.4%(8/18)、8.3%(1/12),胰腺癌組織Cyclin D1的表達率明顯高于正常胰腺和胰腺囊腺瘤(P<0.05,圖1d、e、f)。

RUNX3陰性表達的20例胰腺癌中有19例Cyclin D1呈陽性表達，而RUNX3陽性表達的27例胰腺癌中有12例Cyclin D1陰性表達，胰腺癌組織RUNX3與Cyclin D1的表達呈顯著性負相關(r=-0.375,P=0.009)。

圖1RUNX3和Cyclin D1蛋白在胰腺癌(a、d)、囊腺瘤(b、e)和正常胰腺組織(c、f)中的表達(免疫組化 ×400)

二、 RUNX3、Cyclin D1表達與胰腺癌臨床病理參數間的關系

RUNX3的表達與胰腺癌患者的年齡、性別無相關性；與胰腺癌的臨床分期、淋巴結轉移、分化程度呈負相關(P<0.05)。隨著腫瘤分期的進展，分化程度下降，RUNX3表達逐漸下調(表1)。Cyclin D1表達與胰腺癌患者性別、年齡無相關性；與胰腺癌的臨床分期、淋巴結轉移、分化程度呈正相關(P<0.05)。隨著腫瘤分期的進展，分化程度下降，其表達逐漸升高(表1)。

討 論

人類RUNT相關轉錄因子3(human runt-related transcription factor 3, RUNX3)是哺乳動物RUNT家族進化的基礎,目前研究主要集中在胃腸道等方面。錢安平等[6]分析，RUNX3蛋白在正常胃黏膜中的表達顯著高于異型增生及胃癌，且異型增生的表達又高于胃癌。Sakakura等[7]研究表明，RUNX3可在一定程度調控細胞黏附、增殖和凋亡等與轉移相關的基因表達，提示RUNX3基因作為一個抑癌基因參與腫瘤的發生、發展。

表1RUNX3、CyclinD1陽性表達與胰腺癌臨床病理參數的關系

病理參數例數RUNX3陽性例數(%)P值CyclinD1陽性例數(%)P值性別0.5960.579 男2618(69.2)14(53.8) 女2116(76.2)13(61.9)年齡(歲)0.3990.483 <4054(80.0)4(80.0) 40～602419(79.2)14(58.3) >601811(61.1)9(50.0)分化程度0.0060.0005 高146(42.9)13(92.9) 中1612(75.0)10(62.5) 低1716(94.1)4(23.5)淋巴結轉移0.0440.0009 無2515(60.0)20(80.0) 有2219(86.4)7(31.8)TNM分期0.0280.002 Ⅰ/Ⅱ2414(58.3)19(79.2) Ⅲ/Ⅳ2320(86.9)8(34.8)

Cyclin D1是細胞周期素家族中與腫瘤最為密切的成員，可促使細胞周期變化[8]。丁俊等[9]報道，Cyclin D1在膽囊炎、膽囊良性瘤和膽囊癌組織中表達率逐級升高，其表達與膽囊癌分化程度、臨床分期、淋巴結轉移及周圍組織浸潤有關。姜影等[10]報道，RUNX3與Cyclin D1在乳腺癌中蛋白表達呈負相關。

本結果顯示，RUNX3蛋白在正常胰腺組織、胰腺囊腺瘤及胰腺癌組織中的表達依次下調，胰腺癌伴淋巴轉移及Ⅲ～Ⅳ期患者的RUNX3表達較無淋巴結轉移及Ⅰ～Ⅱ期患者明顯下降，與我們前期報道的肝癌組織RUNX3表達結果類似[11]。提示RUNX3與惡性腫瘤病理演變高度相關。

本結果還顯示，Cyclin D1蛋白在正常胰腺組織、胰腺囊腺瘤及胰腺癌組織中的表達依次增加，且與胰腺癌臨床分期、淋巴結轉移、分化程度相關，與丁俊等[9]在膽囊癌的研究結果一致，提示Cyclin D1過表達與胰腺癌病程進展有關。進一步相關分析表明，胰腺癌的RUNX3與Cyclin D1表達明顯呈負相關，表明作為下游基因的Cyclin D1可能與RUNX3基因關系密切，兩者表達異常最終導致細胞周期調控系統的平衡紊亂。

[1] Ito K,Liu Q,Salto-Tellez M,et al.RUNX3,a novel tumor suppressor is frequently inactivated in gastric cancer by protein mislocalization.Cancer Res,2006,66:3345-3351.

[2] Tong DD,Jiang Y,Li M,et al.RUNX3 inhibits cell proliferation and induces apoptosis by TGF-beta-dependent and independ entmechanisms in human colon carcinoma cells.Pathobiology,2009,76:163-169.

[3] Sugiura H,Ishiguro H,Kuwabara Y,et al.Decreased expression of RUNX3 is correlated with tumor progression and poor prognosis inpatients with esophageal squamous cell carcinoma.Oncol Rep,2008,19:713-719.

[4] Ito K,Liu Q,Salto-Tellez M,et al.RUNX3,a novel tumor suppressis is frequently inactivated in gaslric cancer by protein mislocalization.Cancer Res,2005,65:7743-7750．

[5] Fromowitz FB,Viola MV,Chao S,et al.Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Human Pathal,1987,18:1268-1275.

[6] 錢安平，趙晶，肖玉平，等.胃癌組織中RUNX3與mP53表達的關系及意義.解剖科學進展,2009,15:365-369.

[7] Sakakura C,Hasegawa K,Miyagawa K,et al.Possible involvement of RUNX3 silencing in the peritoneal metastases of gastric cancers.Clin Cancer Res,2005,11:6479-6488.

[8] 李偉華，吳劍宏，高純，等.結直腸癌細胞主要Cyclins(D1、E、A、B1)表達類型與其生物學行為的關系.中華實驗外科雜志，2010,27：1060-1062.

[9] 丁俊，李可為，王堅，等.P27、Cyclin D1、Cyclin E在原發性膽囊癌中的表達及臨床意義.肝膽胰外科雜志，2009，21：191-195.

[10] 姜影，佟丹丹，張穎，等.乳腺癌中RUNX3、cyclin D1和p27kip1蛋白的表達及其意義.中國腫瘤，2007，16：442-444.

[11] 盧燕輝，李建國，鄒宗楷，等.RUNX3基因在不同肝組織中的蛋白表達水平及其意義.中華實驗外科雜志，2010,27：729-731.

2010-09-17)

(本文編輯：呂芳萍)

ExpressionsandsignificancesofRUNX3andCyclinD1inpancreaticcarcinoma

LINZhi-chuan,LIJian-guo,WUChun-nuan,SHENHong-wu,ZOUZong-kai.

DepartmentofHepatobiliarySurgery,ZhangzhouHospital,FujianMedicalUniversity,Zhangzhou363000,China

LIJian-guo,Email:jjxln649@163.com

ObjectiveTo investigate the expressions of RUNX3 and CyclinD1 in pancreatic carcinoma and their significance.MethodsExpressions of RUNX3, CyclinD1 in 47 cases with pancreatic carcinoma, 18 cases with cystadenoma of pancreas and 12 normal pancreas cases were detected by immunohistochemistry, and the relationship between their expressions and clinicopathological parameters was analyzed.ResultsThe positive expression rates of RUNX3 in pancreatic carcinoma, cystadenoma of pancreas, normal pancreas cases were 57.4%(27/47), 94.4%(17/18), 100%(12/12); the positive expression rates of CyclinD1 in pancreatic carcinoma, cystadenoma of pancreas, normal pancreas cases were 72.3%(34/47), 44.4%(8/18), 8.3%(1/12). RUNX3 expression was not related to the age and sex, but it was negatively associated with clinical staging, lymph node metastasis, the differentiation degree (P<0.05)．CyclinD1 expression was not related to the age and sex, but it was positively associated with clinical staging, lymph node metastasis, the differentiation degree (P<0.05)．The expression of RUNX3 and CyclinD1 was negatively associated (r=-0.375,P=0.009).ConclusionsThe expression of RUNX3 is decreased in pancreatic carcinoma. The expression of CyclinD1 is increased in pancreatic carcinoma. They may play an important role in the carcinogenesis and progression of pancreatic carcinoma.

Pancreatic neoplasms; RUNX3; CyclinD1; Immunohistochemistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.04.013

福建省自然科學基金(2009J01326)

363000 福建漳州，福建醫科大學附屬漳州市醫院肝膽外科(林志川、李建國)，病理科(吳春暖、沈洪武、鄒宗楷)

李建國，Email：jjxln649@163.com