p130、cullin-1和p53在子宮漿液性腺癌中的表達

[摘要] 目的 檢測p130、cullin-1和p53在子宮漿液性腺癌（USAC）中的表達，探討其臨床病理意義。 方法 全面手術病理分期的USACⅠ期病例10例，正常增生期子宮內膜組10例作為對照。檢測p130、cullin-1和p53蛋白表達及mRNA水平。 結果 USAC病例組與正常增生期子宮內膜組相比，p130蛋白和p130 mRNA在USAC中的表達減少，而cullin-1蛋白和cullin-1 mRNA表達升高。 結論 USAC有獨特的臨床和病理特征，USAC中cullin-1蛋白和cullin-1 mRNA表達增加，以cullin-1為中心的SCF復合體介導的泛素-蛋白酶水解過程失活，可能與上述改變有關。USAC中p53蛋白表達增多，而p130蛋白和p130 mRNA表達減少，可能與USAC患者預后較差有關。

[關鍵詞] 子宮漿液性腺癌；p130；cullin-1；p53；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）03-0040-02

The expressions of cullin-1， p130 and p53 in uterine serous adenocarcinoma

DING Lijuan1 XUE Debin2 TENG Xiaodong3 XU Shaoting4 ZHANG Suojiang5

1.Department of Gynaecology and Obstetrics， Ningbo Wemen and Children's Hospital， Ningbo 315012， China; 2.Department of Pathology， Ningbo Wemen and Children's Hospital， Ningbo 315012， China; 3.Department of pathology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang University， Hangzhou 310000， China; 4.Department of Gynaecology and Obstetrics， the First Affiliated Hospital of Zhejiang University， Hangzhou 310000 China; 5.Department of Pathology， the Affiliated Women's Hospital of Zhejiang University， Hangzhou 310000， China

[Abstract] Objective To examine the expression of cullin-1， p130 and p53 in uterine serous adenocarcinoma （USAC） and discuss their clinicopathologic features. Methods Ten cases of USAC as FIGO stage I with full surgical and pathologic stage were scolled up， controlled with 10 cases of normal endometium. The expression of p130， cullin-1 and p53 protein were determined immunochemically， and the level of p130 and cullin-1 mRNA was examined by real-time RT-PCR. Results Compared with the expression of protein and mRNA in USAC cases and normal controls， the expression of p130 protein and mRNA in USAC was decreased， meanwhile the expression of cullin-1 protein and mRNA in USAC increased. Conclusion USAC has a distinctive clinical and pathologic feature. There was an increased expression of cullin-1 protein and mRNA in USAC， and the SCF complex， which was centered by Cullin-1， might take part in the above changes. Meanwhile， There was an increased expression of p53 and decreased expression of p130 protein and p130 mRNA in USAC， which might reflect the fact that the USAC patients suffered a bad clinic outcome.

[Key words] Uterine serous adenocarcinoma; p130; Cullin-1; p53; Immunochemistry

子宮漿液性腺癌（uterine serous adenocarcinoma，USAC）是一種少見的特殊類型子宮內膜癌，具有高度惡性生物學行為。我們檢測了USACⅠ期病例10例，用免疫組織化學方法檢測USAC標本中p130、cullin-1和p53蛋白表達，并用RT PCR方法檢測p130和cullin-1 mRNA表達，結合臨床隨訪資料分析探討這些分子標記物的臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 材料

回顧寧波市婦兒醫院病理科2000年1月～2005年12月有電腦檔案記錄的所有子宮內膜癌病例（共332例），復習原切片及免疫組織化學等病理資料，根據2003年版WHO女性生殖器官腫瘤學分類標準[1]，從中篩選出具有完整臨床資料、經過全面手術病理分期的USAC 31例典型病例（占同期子宮內膜癌的9.3%）。所有病例均由2位富有診斷經驗的婦科病理學醫師確診或會診，均有典型免疫組織化學表達。合作醫院提供30例相同條件病例。隨訪4～9年。根據FIGO標準（2001版）[2]，選擇10例全面手術病理分期為FIGOⅠ期病例，用于檢測分子標記物；選擇10例正常增生期子宮內膜作為對照。

1.2 方法

獲取存檔蠟塊，重新制作HE切片，并進行免疫組織化學染色（EnVision法），將具有典型組織學表現和免疫組織化學表達特征者納入臨床病理研究對象。復習原病理檔案大體檢查、病理分期等資料。復習病歷檔案，獲得臨床信息（包括年齡、民族、體質量、手術分期、其他患癌史、家族史、糖尿病史、孕產史等）以及術后治療。通過術后復查記錄和電話聯系獲得隨訪資料。免疫組織化學試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司，并在該公司完成免疫組化實驗。RT PCR實驗由上海康成生物技術有限公司完成。

1.3 免疫組化結果處理

p130陽性定位于細胞核，可表達于正常增生期子宮內膜。用圖像處理軟件，計算每例免疫組化陽性細胞百分數，每張切片上典型表達區域計數10個高倍視野，取其平均值作為綜合計分（半定量資料），用于統計學處理[3]。

cullin-1陽性定位于細胞核。用圖像處理軟件，將免疫組化陽性細胞百分數乘以陽性強度（1+，2+，3+），作為綜合計分（0~300）。cullin-1可表達于正常組織，作為內對照，其強度2+，計分80~120。將腫瘤細胞計分>120者視為cullin-1過表達[4]。

1.4 p130和cullin-1 mRNA結果處理

用看家基因GAPDH（不同樣品間基本恒定）作為內參，以樣品待測基因的值除以此樣品內參的值，最終得到的比值為樣品的待測基因的相對含量，為定量資料。

1.5 統計學處理

采用SPSS11.5統計軟件，采用卡方檢驗法比較不同分期患者術后3年和5年生存數、復發數。用t檢驗法比較p130和cullin-1免疫組化數據和基因檢測數據，比較USAC組與正常增生期子宮內膜組之間的統計學差異。

2 結果

所有病例均為典型USAC Ⅰ期病例，免疫組織化學檢測其p53蛋白（突變型）表達率都超過95%，而對照組不表達p53蛋白；p130蛋白在USAC組和正常增生期子宮內膜組表達的綜合計分分別為（0.46±0.01）和（0.91±0.04）。與正常增生期子宮內膜組比較，USAC組表達p130蛋白顯著增加（P ＜ 0.01）；p130 mRNA在USAC組和正常增生期子宮內膜組表達水平分別為（0.56±0.06）和（2.81±0.40），與p130蛋白表達減少相似，USAC組表達p130 mRNA水平比正常增生期子宮內膜組減少（P ＜ 0.01）；cullin-1蛋白在USAC組和正常增生期子宮內膜組表達的綜合計分分別為（213.85±20.28）和（14.56±1.97），與正常增生期子宮內膜組比較，USAC組表達cullin-1蛋白顯著增加（P ＜ 0.01）；cullin-1 mRNA在USAC組和正常增生期子宮內膜組表達水平分別為（7.86±1.04）和（5.38±0.53），與cullin-1蛋白過表達相似，USAC組表達cullin-1 mRNA水平均比正常增生期子宮內膜組升高（P ＜ 0.01），見表1。

3 討論

在USAC發生機制的分子遺傳學研究中，p53基因突變被認為是腫瘤發生過程中的早期事件[3]。cullin-1可能是腫瘤抑制物的成分，它參與構成SCF復合體，對p53水平有調節作用[4]，而p130可通過調節E2F-1基因表達產物，維持正常的細胞周期調控；p53突變時p130表達減少，從而失去對細胞周期的調節作用。可見，cullin-1、p53蛋白、p130三者形成一條潛在的調控通路，可能在USAC的發生、發展中發揮重要作用。

p53基因定位于染色體17p13.1，屬于核結合蛋白。正常的p53蛋白在DNA損傷或缺氧時被激活，導致依賴于活化CDK的抑制物p21和DNA修復基因轉錄增強，細胞周期停滯于G1期并進行DNA修復。而在p53基因缺失或在發生突變時，DNA損傷后不能通過p53蛋白的介導而進入G1停滯和DNA修復，因此遺傳信息受損的細胞可以增殖，最終可能發展成惡性腫瘤[5]。然而，臨床病理工作發現，p53檢測在USAC中的應用僅限于診斷和鑒別診斷，不能用于USAC的篩查或早期發現，也不能作為單獨的預后指標。并且，p53在USAC發生中的機制仍未完全明了。

對乳腺癌細胞系MCF-7的研究表明，cullin-1參與構成SCF（FBXO31）復合體，后者具有腫瘤抑制物的特點。在對兩個乳腺癌細胞系的研究中，cullin-1能抑制腫瘤細胞的克隆性生長，并抑制細胞增殖[6]。在乳腺癌細胞系中，SCF（FBXO31）調節細胞周期，在G2晚期向G1期過渡期間其表達量達到最高水平。對基因敲除小鼠胚胎纖維母細胞和人骨肉瘤細胞系U2OS的研究表明，在細胞周期調控中，cullin-1通過調控細胞周期基因的轉錄，對G（1）/S轉換和有絲分裂過程有重要調節作用[7]。因此，cullin-1除了具有直接參與構成腫瘤抑制物、調節細胞周期的功能外，還對p53蛋白、Rb蛋白具有調控作用。以往的研究多認為p53突變是USAC發生的早期事件，cullin-1改變是否可能是更早期的事件值得今后進一步研究。

p130蛋白為Rb基因表達產物之一，當細胞受到增生刺激時，Rb蛋白被磷酸化失活，使細胞進入S期；當細胞分裂成兩個子細胞時，失活的（磷酸化的）Rb蛋白通過脫磷酸化再生使得子細胞處于G1期或G0期的靜止狀態。如由于點突變或13q14的缺失使Rb基因失活，則Rb蛋白表達出現異常，受累細胞就無障礙地進入S期，而可能由此惡變[5]。p130作為潛在的腫瘤抑制因子，具有抑制細胞從G1期進入S期的、促進細胞分化成熟、抑制腫瘤發生等作用外，還受到p53基因的調控，并且其作用途徑可能與p53不同。在p53突變的情況下，是否可能通過調控p130基因的表達，或調控p130蛋白的功能，阻斷p53突變所產生的致癌作用，這一疑問可能為本課題今后的進一步研究留下了較大的空間。

綜上所述，USAC有獨特的臨床病理特征，其發病率相對較低，預后較差，臨床表現和預后因素與內膜樣癌有明顯不同，因此其手術方法和術后輔助治療方案也不能等同于典型的內膜樣癌。有必要收集大宗病例進行多中心臨床試驗以尋求合適的治療方案。通過研究USAC發病機制以尋找靶向治療目標和藥物，可能具有廣闊前景。本研究表明，p53、p130和cullin-1蛋白以及p130和cullin-1 mRNA在USAC中的表達均發生變化，并且與USAC預后有關。深入研究這些分子標記物在USAC中的作用機制以尋找潛在的靶向治療目標和藥物，具有廣闊前景。

[參考文獻]

[1] Tavassoli FA，Devilee P. World Health Organization classification of tumours，Pathology and genetics of tumours of the breast and female genital organs[J]. Lyon：IARC Press，2003，221-232.

[2] Creasman WT，Odicino F，Maisonneuve P，et al. Carcinoma of the corpus uteri[J]. J Epidemiol Biostat，2001，6（1）：47-86.

[3] 王雯，李兆申，許國銘，等. 食管反流大鼠腫瘤誘發過程中p53基因突變的研究[J]. 解放軍醫學雜志，2001，26（10）：713-714.

[4] 劉堅. REGy對p53蛋白活性調控的分子機制及其在腫瘤形成中的作用[D]. 華東師范大學，2010：22-26.

[5] 孫慧勤，鄒仲敏，卞修武，等. 正常血管和腫瘤血管生成的調節機制研究進展[J]. 中華病理學雜志，2000，29（3）：224.

[6] Galderisi U，Melone MA，Jori F，et al. pRb2/p130 gene overexpression induces astrocyte differentiation[J]. Molec Cell Neuros，2001，17（3）：415-425.

[7] 薛德彬，丁麗娟，夏愛麗，等. 子宮乳頭狀漿液性癌臨床病理研究及其輔助療法探討[J]. 中華病理學雜志，2010，39（10）：671-674

（收稿日期：2011-10-13）