1 買驗材料的改進
1.1 檢測生物組織中蛋白質的實驗材料改進
將豆漿或雞蛋清溶液改為煮熟的雞蛋白。操作過程中不需要使用試管,直接將蛋白塊放在培養皿中,先加雙縮脲試劑A液,再加B液,即可直接觀察實驗現象。雞蛋白為白色,與實驗現象紫色形成明顯顏色對比,實驗現象明顯,不需要另設對照實驗。實驗結束后將實驗器材清洗方便,用雞蛋清溶液做,如果稀釋不均勻,可能導致殘留在試管壁不容易清洗。
鑒定蛋白質的原理是利用堿性環境中的cu2+可以與蛋白質中的肽鍵發生絡合反應形成紫色絡合物。煮雞蛋的過程是蛋白質變性的過程,但蛋白質的變性僅僅是空間結構的破壞,未改變肽鍵的結構,因此反應仍然可以發生,現象仍然存在,可以鑒定蛋白質。
1.2 洋蔥細胞觀察植物細胞的質壁分離與復原的實驗材料改進
將洋蔥鱗片葉外表皮紫色較深的細胞改為切開后光照保濕培養2~3d的洋蔥鱗片葉內表皮細胞。在實際操作中用鑷子撕取表皮時,因外表皮與葉肉緊貼在一起,不易分離,往往容易撕破表皮細胞或帶有葉肉細胞。撕破表皮細胞的液泡,在顯微鏡下觀察,液泡的紫色變淺,有的液泡破裂后花青素流出紫色消失。帶有葉肉細胞的外表皮,顯微鏡下觀察,細胞重疊,層次加厚,觀察效果差。改進后內表皮與葉肉則易于分離,在剝洋蔥鱗片葉的過程中,常出現內表皮自然分離,內表皮撕取比較方便,且不容易破裂,既大大降低了實驗難度,又增強了實驗效果,還降低了實驗成本(洋蔥在實驗中利用率提高了)。
植物細胞液泡中花青素是在光照下形成的,采用光照保濕(維持細胞正常生理狀態)培養的方法,把洋蔥內表皮培養成紫色后,用洋蔥內表皮做實驗材料效果非常理想。
1.3 色素的提取和分離的實驗材料改進
改選用新鮮菠菜葉為烘干綠色葉片的研磨粉末。菠菜葉含水分較多,研磨時碎葉黏滑,充分研磨難度大;另一方面,水分多降低了丙酮的濃度,低濃度丙酮只能溶解少量色素。烘干后研磨的綠色葉片粉末,含水量相對較少,顏色深綠,含色素較多,層析時效果較好。但制備粉末時應注意葉片的方法處理:將葉柄和粗葉脈除去,然后將葉片磨碎。磨碎的粉末既有利于提高溶液的濃度,又易于長期保存,不同季節使用,尤其能解決獲取綠色葉片較困難的時期的材料來源問題。還可以簡化實驗步驟,節約實驗材料,提高實驗成功率。
實驗的目的是獲取了高濃度的色素溶液,且不受季節的限制,本實驗處理只是減少了水分,并不影響葉片中色素的種類和含量。
2 實驗試劑的改進
2.1 還原糖鑒定實驗
斐林試劑不穩定,在實驗中要求現配現用,但對于規模比較大的學校作實驗不太方便,有條件的學校可以甘油銅試劑或班氏(Benedict)試劑替代。甘油銅試劑的配制方法(見蘇教版《第一冊教師用書》)為:先將30g氫氧化鈉溶解在200mL蒸餾水中配成溶液A,將15g硫酸銅晶體溶解在200mL蒸餾水中配成溶液B,再將溶液A和溶液B混合并攪勻,則產生淡藍色沉淀(氫氧化銅),然后加入甘油8mL并用力搖使沉淀溶解,溶液呈深藍色透明。最后加蒸餾水500mL,即成甘油銅,可長期保存備用。班氏(Benedict)試劑的配制方法(見《基礎生物化學》)為:稱取檸檬酸鈉173g及碳酸鈉(NaCO3)100g加入600mL蒸餾水中,加熱使其溶解,冷卻,稀釋至850mL。另稱取17.3g硫酸銅溶解于100mL熱蒸餾水中,冷卻,稀釋至150mL。最后,將硫酸銅溶液徐徐加入檸檬酸鈉一碳酸鈉溶液中,邊加邊攪拌,混勻,如有沉淀,過濾后貯于試劑瓶中可長期使用,該試劑穩定,靈敏度高,即使葡萄糖含量很少(0.1%)也能生成大量沉淀。
2.2 蛋白質鑒定實驗
教材中介紹的雙縮脲試劑使用時要求現配現用,不能長期保存。改進型配方(見《植物生理學實驗指導》)為:依次溶解1.5g硫酸銅、6.0g酒石酸鉀鈉于500mL蒸餾水中,在不斷攪拌下加入質量分數為10%的氫氧化鈉300mL,然后加蒸餾水至1000mL,貯于棕色瓶中,蔽光,可長期保存。如有暗紅色沉淀出現,即不能使用。
3.3DNA的粗提取與鑒定實驗
教材實驗原理中介紹,DNA遇二苯胺(沸水浴)會變成藍色,因此,二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。實驗中,在使用二苯胺試劑前滴加幾滴乙醛可提高反應的靈敏度,使實驗現象更明顯。
3.4 觀察植物細胞有絲分裂實驗
在實驗中,用醋酸洋紅對洋蔥根尖進行染色后,可以放在酒精燈上略微加熱,這樣可使細胞質破壞,增進染色體的染色。但不宜過于加熱,避免將染料煮沸使細胞干縮毀壞,或染料沉淀而不能觀察。如用石炭酸一品紅(配置方法見《遺傳學實驗》)代替醋酸洋紅染色效果更好,石炭酸一品紅把核和染色體染為紅紫色,細胞質一般染不上顏色,故背景清晰,觀察效果更佳。
3.5 葉綠體中色素的提取和分離實驗
葉綠素保護試劑的改進:在實驗中,由于學生把握不好CaCO3的用量,致使難溶于水的CaCO3白色粉末明顯地殘存于濾液中,影響實驗效果。經過實驗,Na2CO3同樣具有保護葉綠素的作用,且有易溶于水的優點,故可改用少許Na2CO3代替CaCO3。
提取液的改進:除丙酮外,也可用酒精替代,結果大致相同。和酒精相比,丙酮有一定毒性,因而不妨換一下。另外一種提取液是:在加入丙酮2-3mL后,再加入2mL石油醚,可以提高類胡蘿卜素提取效果,色素帶分離現象更明顯。
層析液的改進(見人教版《第一冊教師用書》):層析液是一種脂溶性很強的有機溶劑,教材上給出了兩種層析液配方:一種是93號汽油,另外一種為20份石油醚,2份丙酮,1份苯混合而成。采用下列配方實驗效果也不錯:(1)汽油或四氯化碳加少許無水硫酸鈉;(2)9份體積分數為95%酒精加1份苯混合;(3)20份汽油,2份丙酮,2份石油醚,1份苯。
其中,采用配方(3)效果最好。