Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達及意義

甄運寰，顏登國，張汝一

(貴陽醫學院附屬醫院肛腸外科，貴陽 550004)

大腸癌是消化道常見的惡性腫瘤。目前，手術切除仍是治療大腸癌的主要措施。但術后5年生存率仍較低[1]。50%～60%的患者死于腫瘤的復發和轉移[2-3]。引起腫瘤復發和轉移的主要原因是腫瘤具有侵襲和轉移性。腫瘤的侵襲轉移是腫瘤細胞與宿主細胞之間一系列復雜的、多步驟、多因素相互作用的動態過程，主要包括腫瘤細胞與細胞外基質黏附、貼近腫瘤細胞的基質降解、腫瘤細胞在趨化因子的作用下向縱深方向移動和腫瘤淋巴管生成等。乙酰肝素酶(hparanase,Hpa)能降解細胞外基質(ECM)和基底膜(BM)組成的屏障，從而促進腫瘤的侵襲及轉移[4]。而血管內皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)誘導在腫瘤外周形成新的淋巴管[5]，使腫瘤細胞從新生淋巴管進入淋巴結，發生淋巴結轉移[6-8]。作者通過免疫組織化學檢測大腸癌組織中Hpa和VEGF-C蛋白的表達，探討其與大腸癌侵襲和轉移的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集貴陽醫學院附屬醫院肛腸外科1994～1999年收治的40例術前未經放化療，術后腫瘤組織石蠟塊仍保存完好的大腸癌病例。其中，男19例，女21例。年齡25～77歲，平均55.7歲。結腸癌11例，直腸癌29例。40例均為腺癌，高分化9例，中分化25例，未分化及低分化6例。浸潤深度在漿膜層以內16例，浸潤深度達到或超過漿膜層24例。有淋巴結轉移14例，無淋巴結轉移26例。臨床分期：按國際抗癌聯盟(union international control cancer,UICC)提出的TNM分期法，Ⅰ期11例、Ⅱ期13例、Ⅲ11例、Ⅳ5例。40例患者35例行根治性切除，5例行姑息性切除。正常組織來源于大腸腺瘤切除的大體標本中。

1.2試劑與方法 對大腸正常組織及大腸癌組織進行普通HE染色，確定所有切片中均存在所需組織。免疫組織化學染色采用Envision兩步法，兔抗人Hpa單克隆抗體購于武漢博士德生物工程有限公司；兔抗人VEGF-C多克隆抗體，購于北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組織化學通用型PV9000試劑盒和二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司。操作按說明書進行。

1．3結果判斷 由2位病理專家單獨閱片，結果再綜合分析確定。Hpa和VEGF-C染色陽性信號為胞漿呈清晰棕黃色顆粒。每張切片在400倍顯微鏡下選定10個視野計算陽性細胞的百分數。表達強度判斷，陰性(-)：全部腫瘤細胞無顯色或胞漿染色陽性的細胞數小于5%；(+)：陽性細胞5%～24%；(++)：陽性細胞25%～50%；(+++)：陽性細胞大于50%。

1．4隨訪 隨訪時間11個月至6年。術后經書信隨訪到38例，失訪2例，隨訪率為95%。生存5年以下者23例，生存5年或以上者15例。

1．5統計學處理 采用SPSS11.5統計軟件包處理，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2．1Hpa和VEGF-C表達比較 大腸癌組織中Hpa和VEGF-C的陽性表達率明顯高于大腸正常組織中的表達率(P<0.01)，見表1，封2圖1～2。

表1 Hpa與VEGF-C在大腸癌組織及正常組織中的表達

2．2Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達與臨床病理特征的關系 Hpa和VEGF-C在性別、年齡、腫物大小、腫物位置及浸潤深度方面的陽性表達比較，差異無統計學意義(P>0.05)；在有無淋巴轉移、Ⅲ、Ⅳ期與TNM Ⅰ、Ⅱ、生存期小于5年與大于或等于5年的陽性率比較，差異有統計學意義(P<0.01)，見表2。

表2 Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達和臨床病理特征的關系

表3 Hpa和VEGF-C的表達在大腸癌中的相關性

2．3Hpa和VEGF-C的表達在大腸癌中的相關性 Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達呈正相關，相關系數為0.570，P<0.01，見表3。

3 討 論

3．1Hpa和VEGF-C的表達與大腸癌發生、發展 侵襲和轉移是惡性腫瘤的最重要特征，是影響腫瘤治愈率的主要因素。大多數學者研究發現，Hpa在腫瘤的侵襲及轉移中發揮重要作用[9]。硫酸乙酰肝素(HS)是ECM和BM組成的屏障中的主要成分。Hpa是體內惟一能降解HS的酶，使ECM和BM組成的屏障受到破壞，是腫瘤的侵襲轉移中的一個關鍵酶。Hpa可以釋放和激活結合在HS上的堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)，bFGF能促進腫瘤細胞、內皮細胞和成纖維細胞增生遷移從而誘導腫瘤血管生成和使血管的通透性增強，促使腫瘤細胞的侵入血管和遠處種植。許多研究已證實，Hpa在許多高轉移惡性腫瘤細胞中表達水平很高[10-11]。VEGF-C屬血管內皮生長因子和血小板生長因子家族，主要與分布在淋巴管內皮細胞上的VEGFR-3受體結合，誘導在腫瘤外周形成新的淋巴管，并使新的淋巴管與已存淋巴管融合，是腫瘤細胞從新生淋巴管進入淋巴結，發生淋巴結轉移，通過淋巴系統向全身其他器官擴散[12]。VEGF-C與分布于血管內皮細胞上的受體 VEGFR-2結合，促進腫瘤血管增生，誘導新生血管形成，從而促進腫瘤細胞的血行轉移。許多研究中 VEGF-C高表達的患者生存時間和生存率明顯降低[13-14]。本實驗結果顯示，大腸癌患者中Hpa、VEGF-C的表達明顯高于正常組織，大腸癌有淋巴轉移、Ⅲ～Ⅳ期、生存時間小于5年者Hpa、VEGF-C的表達明顯高于無淋巴轉移、Ⅰ～Ⅱ期、生存時間大于或等于5年者，這與許多研究相一致。

3．2Hpa和VEGF-C 在大腸癌的臨床病理學特征中的表達 本實驗中Hpa和VEGF-C的表達與患者性別、年齡、腫物大小、腫物位置、腫瘤浸潤深度和腫瘤的分化程度均無關(P>0.05)。這與臨床上腫瘤的浸潤和轉移與性別、年齡、腫物大小、腫物位置無關相吻合。臨床上大腸癌腫瘤浸潤的深度、腫瘤分化程度與腫瘤轉移有一定的相關性，浸潤深度越深、腫瘤分化程度越差，發生轉移的可能性越高，這與臨床上分化程度與腫瘤轉移有關的觀點相矛盾，這可能說明腫瘤發生與轉移是較復雜的，是受多種因素影響的。Hpa和VEGF-C在有淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組，這提示Hpa和VEGF-C表達與大腸癌組織的淋巴結轉移密切相關。這可能與Hpa促進腫瘤血管生成及增加血管通透性，而VEGF-C能誘導腫瘤外周形成新的淋巴管和新的血管，從而使腫瘤細胞可通過淋巴-靜脈連接進入淋巴管或直接侵入與血管伴行的淋巴管，促進淋巴轉移有關。

3．3Hpa和VEGF-C在大腸癌中的相關性 Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達呈正相關，相關系數為0.570，P<0.01，說明Hpa和VEGF-C在大腸癌的發生、發展過程中發揮了重要作用，功能上可能具有互補性，Hpa能破壞ECM和BM組成的屏障，使腫瘤發生侵襲，VEGF-C使腫瘤所在位置形成淋巴管，使侵襲的腫瘤發生淋巴結轉移成為可能。二者均能誘導新生血管形成，促進腫瘤發生血行轉移。說明兩者在腫瘤的發生、浸潤及轉移過程中相互促進、關系密切。

3．4Hpa和VEGF-C與大腸癌分期及預后的關系 臨床上Ⅲ、Ⅳ期的大腸癌患者5年生存率明顯低于Ⅰ、Ⅱ患者[15]，Hpa和VEGF-C在Ⅲ、Ⅳ期大腸癌患者的陽性表達率明顯高于TNM Ⅰ、Ⅱ期；在生存期小于5年大腸癌中的陽性表達率明顯高于大于等于5年組(P<0.01)。提示Hpa和VEGF-C高表達的大腸癌患者腫瘤細胞侵襲和轉移的能力越強，預后越差。

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