聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)導(dǎo)入后代重組個(gè)體的檢測(cè)

劉云霞

（錦州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧 錦州 121017）

組蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，應(yīng)用于驗(yàn)證和檢測(cè)試材的DNA導(dǎo)入情況，通過(guò)觀(guān)察導(dǎo)入后代與供體DNA的共同和差異譜帶，來(lái)篩選含供體特異DNA譜帶的導(dǎo)入后代。這項(xiàng)技術(shù)的研究是外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入育種技術(shù)不可缺少的一部分。

1 試材

錦269麥、95109麥、340玉米。

2 方法

實(shí)驗(yàn)采用無(wú)水乙酸鈉—冰乙酸系統(tǒng)進(jìn)行電泳。

2.1 制樣

將試材種子浸泡2～4 h，按質(zhì)量體積比1：2加入樣品提取液研磨，然后4000 r/min離心15 min，取上清液，100℃水浴3 min，置冰箱中備用。

2.2 制備膠液

2.2.1分離膠：18.6%Acr——Bis膠液3.0 mL；pH 3.0的 82%乙酸鹽緩沖溶液 9.0 mL；1%AP1.5 mL；0.5%VC-FeSO4溶液1.5 mL。

2.2.2濃縮膠：18.6%Acr——Bis膠液3.0 mL；pH 5.0的 82%乙酸鹽緩沖溶液 6.5 mL；10%AP 1.0 mL；TEMED 40.0 mL；水 5.5 mL。

2.3 點(diǎn)樣

用微量注射器每槽加入20 μL預(yù)冷樣品液，加入適量甲基綠溶液作為前沿指示劑，上加20 μL40%蔗糖溶液。

2.4 電泳

采用0.3%甘氨酸—乙酸緩沖液，20 mA電流下電泳3 h。

2.5 染色

將凝膠在 200 μL、10%三氯乙酸染色液和 10 μL、1%考馬斯亮蘭R250染色劑中染色3 h以上。

3 結(jié)果

將凝膠置清水中浸泡，背景漂白后觀(guān)察藍(lán)色譜帶。通過(guò)觀(guān)察譜帶，發(fā)現(xiàn)錦269麥譜帶中確有幾條特異性條帶出現(xiàn)，并且其位點(diǎn)及分布與340玉米的譜帶相同，證明錦269麥中確有340玉米基因?qū)搿?/p>

綜上所述，組蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳法是外源DNA導(dǎo)入技術(shù)的間接驗(yàn)證方法。它應(yīng)用于導(dǎo)入后代重組個(gè)體的檢測(cè)，具有直觀(guān)、清晰、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。