淺談如何有效降低馬鈴薯脫毒苗擴繁污染率

王彥紅

（古交市種子管理站，山西 古交 030200）

近年來，脫毒馬鈴薯在山西省范圍內得到廣泛的推廣應用。由于馬鈴薯病毒會導致其產量和品質嚴重下降，擴繁馬鈴薯優良品種脫毒苗非常重要。在馬鈴薯脫毒苗生產過程中，各個環節都要嚴格執行技術規程，否則極易引起污染，影響馬鈴薯脫毒苗的擴繁成活率。

1 馬鈴薯脫毒苗擴繁過程中污染的原因

1.1 細菌性污染

1.1.1 培養基在植入基礎苗前發現長有細菌菌斑：有的是培養基高壓滅菌不徹底引起的；有的是培養瓶口處理不干凈，帶有抗逆性很強的雜菌引起的。

1.1.2 在植入基礎苗以后發現組織周圍有細菌污染：有的是操作工具消毒不到位或是操作不規范引起的；有的是基礎苗組織自身帶菌引起的；也有的是植入基礎苗操作過程中交叉感染引起的。

1.2 真菌性污染

1.2.1 在植入基礎苗前，培養基表面發現真菌污染：大部分是由于存放培養基的環境中真菌孢子濃度過大或是培養基瓶口密封不嚴引起的；如果在培養基內部存在大量真菌污染，很有可能是配制培養基的母液已經被真菌污染。

1.2.2 在植入基礎苗后發現培養基表面出現真菌污染，并且污染位置不固定：初期是由于無菌操作臺消毒不徹底或是接種室的真菌孢子含量過高；后期是由于基礎苗本身就攜帶有內生菌或是由于培養瓶封口不嚴。組織培養過程中，在脫毒苗組織周圍發現真菌污染，是由于基礎苗自身帶有真菌，只是菌源太少，進行組織分離操作時肉眼無法辨認，接苗以后由于條件適宜，真菌繼續生長引起真菌污染；如果真菌只是毫無規律地分布在培養基中，主要是由于培養基滅菌不到位或操作工具滅菌不徹底引起的。

2 如何有效降低馬鈴薯脫毒苗擴繁過程中的污染率

2.1 外植材料滅菌

在馬鈴薯脫毒苗組培過程中，一定要重視外植材料表面滅菌這一環節，不然就會影響繼續的培養工作。為了獲得無菌材料，對室外采集來的培養瓶及操作工具，首先要用自來水沖洗干凈，然后根據材料大小選用不同種類的藥劑進行不同時間的表面滅菌。

常用的藥劑有75%的乙醇溶液、9%左右的次氯酸鈉溶液等。用乙醇作殺菌劑滅菌時間不宜過長，約20s即可殺死外植體表面的絕大多數微生物。次氯酸鈉溶液滅菌處理后易于撤除，不留殘毒，是組培整個過程中常用的殺菌劑之一。為了取得十分好的殺菌效果，常采用乙醇和次氯酸鈉復合消毒技術。

2.2 培養基滅菌

用加壓濕熱滅菌法進行培養基滅菌，要求殺死全部微生物。在滅菌整個過程中需注意以下幾個環節：

2.2.1 當滅菌鍋氣壓達到0.05pa左右時進行一次冷空氣排放。高壓滅菌鍋內部冷空氣排放要干凈徹底，不然壓力表上的溫度和壓力指示與鍋內物體實際的溫度、壓力不符，就會引起滅菌不徹底，引起大面積培養基污染。

2.2.2 滅菌鍋內需滅菌的培養基不可以堆放過滿。否則，將阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內升溫減慢，引起培養基內部殺菌不完全。

2.2.3 升溫和降溫速度不可以太快。這樣可以避免滅菌不徹底的情況出現。

2.3 嚴格執行技術規程

掌握接種的基本技術環節是組織培養中最關鍵的環節，接種整個過程中產生的污染往往是不可避免的，我們只能是努力將污染降到最低限度，控制在5%以內。除常規的消毒環節外，還需注意以下一些問題：

2.3.1 對基礎苗徹底消毒。對選用的基礎苗用75%的乙醇溶液進行瓶外徹底消毒，并且要仔細檢查所拿取的基礎苗是否有被污染的，否則將會引起一瓶帶菌的基礎苗引發大量的接種組培苗被污染的情況。

2.3.2 接種室保持干凈，達到無菌組培室的要求。接種前對接種室進行20～30 min紫外線殺菌，然后用84消毒液在室內噴灑，做到降塵，保持接種室清潔無雜菌。

2.3.3 接種前對接種用的操作工具用滅菌鍋進行徹底滅菌。接種過程中，要將鑷子、剪刀及用到的操作工具放置于75%的乙醇溶液中進行徹底消毒，并且用75%乙醇溶液擦拭雙手，時刻保持清潔、無菌。

2.3.4 無菌操作臺面用75%的乙醇溶液擦拭。物體堆放不可以過滿，不然引起氣流不暢通，使操作臺的空氣得不到凈化，最后引起污染。

2.4 脫毒苗培養

注意脫毒苗的生長環境與培養條件，必要時進行調控，以促進脫毒苗有利生長。

2.4.1 光照：光照對脫毒苗的生長起著至關重要的作用，要求無菌培養室采光要非常好，平時要用日光燈進行調節，最好滿足每天16 h光照。將新接的脫毒苗放置在培養架的下層，有利于新接莖段的萌發和再繁殖；將培養一周以上的脫毒苗放置在培養架的上層，可使瓶苗的節間縮短，葉大莖粗，有利于形成壯苗。

2.4.2 溫度：把接好的脫毒苗放到無菌培養室之后，溫度要控制在25℃左右。一般低于15℃時會引起培養組織生長停滯，而高于30℃對生長也不利。

2.4.3 濕度：無菌培養室中的濕度會影響培養基的濕度，培養室濕度太低，培養基容易失水、干裂，影響生長；過高則易引起培養基底部長霉，引起污染。一般要求70%～80%的相對濕度，過低應多灑些水增加濕度，過高可以通風排濕。

2.4.4 消毒：用75%的乙醇溶液每周做一次噴霧降塵，殺死空氣中的真菌孢子，以降低污染率。

3 結論

綜上所述，擴繁馬鈴薯脫毒苗，關鍵之處在于滅菌要仔細徹底，操作要嚴格執行規程，努力降低馬鈴薯脫毒苗的污染率，提高脫毒種薯的種植面積，使其保持優良的種性，達到高產、高效的目的。