芍藥甘草湯方劑學實驗研究

張保國， 劉慶芳

(1.河南大學中藥研究所，河南開封475001;2.河南大學臨床學院，河南開封475000)

芍藥甘草湯出自《傷寒論》辨太陽病脈證并治太陽病變證篇，由芍藥、炙甘草兩味藥物組成。具有益陰和血，柔肝止痛的功能。傳統用于傷寒因誤用汗法傷及陰血而致腳攣急不能伸展，煩躁，吐逆之證。為使傳統經方逐步發展到現代科學知識水平，近年，人們對該方方劑藥效物質基礎、組分配伍規律及其藥理作用機制進行了深入研究，取得了較多的成果，為古方進一步開發和臨床新用提供了現代醫學依據。

1 方劑藥效物質基礎和組分配伍規律研究

1.1 方劑復方組分 芍藥甘草湯中芍藥 (白芍)中主要化學成分為單萜及單萜苷類化合物、部分三萜化合物以及鞣質等成分。亦含有類萜、揮發油、脂肪油、樹脂、糖、黏液質、蛋白質和金屬元素Mn、Fe、Cu、Zn、Cd及17種氨基酸［1-2］。三萜皂苷和黃酮類是甘草的主要活性成分，另含香豆素、脂肪酸、多糖、葡萄糖、蔗糖、淀粉、醇類等化合物［3］。通過對芍藥甘草湯HPLC血清指紋譜分析證實，白芍、甘草配伍后，32個血中移行組分中，其中17個為原方直接入血成分，15個為代謝產物，兩者生物利用度明顯提高，存在相互協同的作用［4］。

1.2 方劑組分配伍規律

1.2.1 配伍對方劑組分的影響 吳華振等［5］采用薄層色譜及反相高效液相色譜法，探討芍藥與甘草“酸甘化陰”配伍的化學內涵，發現芍藥與甘草配伍前后水提液總體成分無明顯變化，未發現新的物質產生;芍藥配伍甘草能夠促進芍藥苷、甘草酸的煎出。說明芍藥配伍甘草不產生新的物質，但對其中一些主要化學成分的煎出有一定影響。沈嵐等［6］采用HPLC-DAD-ESI-MS技術，分析芍藥甘草配伍體內外物質基礎變化，確認大鼠血中移行組分。結果顯示，芍藥甘草復方組方體外的主要成分為芍藥苷、兒茶素-5-O-葡萄糖苷、白芍苷、甘草苷、甘草酸等，入血移行成分中也發現此類糖苷類物質，另又發現了來源于甘草成分的葡萄糖醛酸結合物-甘草素葡萄糖醛酸和異甘草酸葡萄糖醛酸。王淑靜［7］通過灌胃給予大鼠芍藥甘草湯檢測血藥濃度，證實白芍與炙甘草配伍可互相促進有效成分甘草次酸和芍藥苷的吸收。

1.2.2 合煎與分煎對組分的影響 何麗仙等［8］以常規方法制備芍藥甘草湯合煎和分煎的提取物，采用HPLC法，探討芍藥甘草湯合煎和分煎提取物中化學成分的差異。結果證實，合煎后未發現明顯新峰，但合煎和分煎提取物各共有峰相對積分面積存在差異，合煎提取物中主要化學成分的提取率大于分煎提取物，且共有化學成分的比例也不同。表明芍藥甘草湯合煎和分煎提取物中主要化學成分組成比例存在差異。這種化學成分組成比例的改變，可能會改變中藥復方中各有效成分“協同作用”的結果，而導致藥效上的差異。

1.2.3 提取方法對組分的影響 董潔等［9］以芍藥甘草湯為試驗體系，探索不同提取分離方法對中藥復方物質組成的影響。結果表明，通過不同方法精制后芍藥甘草湯體系中指標性成分的含有量以及各指標性成分之間的比例都有變化，從“基本活性物質”和“伴生物質”兩方面明顯改變了芍藥甘草湯的物質組成。

1.2.4 煎煮時間和煎煮次數對組分的影響 孫麗榮等［10］采用高效液相色譜法，比較不同煎煮時間和煎煮次數對芍藥甘草湯中芍藥苷的影響。結果顯示，煎煮時間對芍藥甘草湯中的芍藥苷的析出量影響不明顯，而煎煮次數明顯影響各湯劑中芍藥苷的析出量，相同的煎煮時間和用水量，增加煎煮次數能增加湯劑中芍藥苷的析出量。

1.2.5 不同劑量配比對組分的影響 丘振文等［11］采用高效液相色譜法，探討不同劑量配比對芍藥甘草湯中芍藥苷煎出量的影響，結果各種配伍未見芍藥苷煎出量有明顯變化。說明不同劑量配比對芍藥甘草湯中芍藥苷的煎出無明顯的影響，該方法可作為芍藥甘草湯中芍藥苷的定量測定方法。

2 藥理作用及其機制研究

2.1 抗炎、鎮痛作用 芍藥甘草湯具有抗炎、鎮痛作用。朱愛江等［12］采用抗炎實驗證實，該方對大鼠足腫脹、小鼠耳腫脹有顯著抑制作用，能明顯減少氣囊炎性滲液中的前列腺素 E2(PGE2)、白細胞介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)，降低氣囊模型大鼠血清皮質醇水平，其藥物血清和有效成分芍藥苷能明顯抑制激活的多形核白細胞 (PMN)化學發光。抗炎作用的機制與抑制PGE2、NO、IL-6的產生，抑制PMN產生氧自由基，及影響下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸有關。劉陶世等［13］通過熒光脂質體研究芍藥甘草湯對磷脂酶A2(PLA2)的抑制效應及其配伍作用顯示，芍藥甘草湯、甘草、甘草酸和對照藥氯丙嗪對PLA2活性均具有較強的抑制作用，白芍抑制作用較弱，而芍藥苷幾乎無抑制作用;芍藥甘草湯復方對PLA2的抑制作用強于單味甘草和白芍。說明芍藥甘草湯對PLA2具有較強的抑制活性，白芍與甘草具有協同作用。洪建華等［14］通過小鼠鎮痛實驗發現，芍藥甘草湯能明顯提高熱板法中小鼠的痛閾值，減少扭體實驗中小鼠的扭體次數，顯著提高輻射熱照射大鼠的痛閾。鄭富超等［15］通過腹腔注射醋酸法復制疼痛小鼠模型實驗顯示，芍藥甘草湯能對抗醋酸所致的小鼠扭體反應，且芍藥比例為3∶1時鎮痛作用最好，與1∶1組和2∶1組比較，均有統計學意義 (P＜0.05，P＜0.01)。劉陶世等［16］觀察了芍藥甘草湯總苷、甘草總苷和白芍總苷的抗炎鎮痛作用，發現芍藥甘草湯總苷具有明顯的抗炎鎮痛作用，復方總苷在150～600 mg/kg劑量下顯著抑制二甲苯所致小鼠炎性耳腫脹，在75～300 mg/kg劑量下顯著抑制脫脂棉球引起的大鼠肉芽腫和雞蛋清引發的大鼠足跖腫脹;在150～600 mg/kg劑量下顯著減少乙酸所致小鼠的扭體次數，顯著延長小鼠熱板法的痛閾值。而且甘草總苷和白芍總苷抗炎鎮痛作用有弱于芍藥甘草湯總苷的趨勢，且甘草總苷的抗炎作用優于白芍總苷，但鎮痛效應弱于白芍總苷，說明其組成成分甘草總苷和白芍總苷具有一定的協同效應。鄭王巧等［17］采用福爾馬林致痛法實驗，發現較大劑量的芍藥甘草湯對福爾馬林致痛模型動物I相和II相疼痛反應均呈現抑制作用，并明顯降低冰醋酸致痛模型小鼠血清中PGE2和cAMP水平。表明PGE2/cAMP信號通路參與了芍藥甘草湯的鎮痛作用。時樂等［18］通過正交設計法對芍藥甘草湯主要部位群 (芍藥苷、甘草總黃酮、甘草總皂苷)不同比例組合的藥效學進行了比較，發現芍藥甘草湯中的3個主要部位群組合比例為1∶2∶2時不僅具有明顯的平滑肌抑制作用，而且還具有顯著的鎮痛作用。隋峰等［19］采用完全佛氏佐劑復制大鼠關節炎模型，分別給予芍藥、甘草以及芍藥甘草湯灌胃治療，觀察并分析大鼠的行為學、足溫、痛閾以及關節腫脹度的變化。結果證實，大鼠注射完全佛氏佐劑后，體質量明顯減輕，足溫升高，痛閾降低，關節腫脹明顯;各給藥組對上述指標均有不同程度的逆轉作用，尤以芍藥、甘草1∶1組最為明顯。表明芍藥、甘草以及芍藥甘草湯對大鼠佐劑性關節炎均有明顯的治療作用，且以芍藥和甘草配伍組效果最佳。

2.2 解痙作用 芍藥甘草湯能使多臟器平滑肌松弛，解除平滑肌痙攣。

2.2.1 對腸平滑肌的影響 樂永紅等［20］采用Magnus實驗，發現芍藥甘草湯全方和有效部位群所制備含藥血清對家兔離體十二指腸平滑肌均有興奮作用，有效部位群大劑量具有興奮家兔離體回腸的作用，而全方則無此作用。表明芍藥甘草湯有效部位群能增強家兔離體十二指腸和回腸的張力，作用優于全方。韓堅等［21］通過小鼠小腸墨汁推進實驗觀察芍藥甘草湯對腸道平滑肌運動的影響及其作用機制，證實該方能顯著性抑制正常和亢進狀態的小鼠小腸運動，顯著性抑制正常離體腸管的活動，并呈現一定的量效關系;對乙酰膽堿 (Ach)、組胺、新斯的明 (Neo)、氯化鋇 (BaCl2)等不同離體兔腸模型均具有顯著性抑制作用(P ＜0.05或P ＜0.01或P ＜0.001)。說明芍藥甘草湯抑制胃腸運動的機理可能與抗膽堿樣、鈣拮抗、抗組胺有關，也可能與α受體有關。

2.2.2 對輸尿管平滑肌的影響 楊曉溪等［22-23］通過結扎家兔單側輸尿管的方法復制輸尿管急性梗阻的動物模型，發現芍藥甘草湯能明顯降低梗阻輸尿管內基礎壓力，對輸尿管平滑肌痙攣具有解痙作用。而此作用與芍藥甘草湯劑量有一定依賴性，大劑量作用最強，小劑量則無明顯作用。另有實驗證實，芍藥甘草湯能明顯降低輸尿管平滑肌電活動頻率，對痙攣輸尿管平滑肌具有明顯地解痙作用。大劑量 (1.5 g/mL)可與口服阿托品解痙療效相當，甚至更好。中 (0.75 g/mL)、小 (0.375 g/mL)劑量則較口服阿托品解痙療效差。但阿托品作用具有出現快，維持時間較短的弊端。芍藥甘草湯作用盡管出現慢，但解痙療效鞏固持久。

2.2.3 對膀胱平滑肌的影響 常青等［24］通過家兔膀胱平滑肌肌電活動實驗顯示，芍藥甘草湯中、高劑量組及阿托品陽性對照組3×10-4g/kg能夠明顯增加家兔膀胱平滑肌肌電活動的電壓和膀胱平滑肌收縮時的膀胱壓力，與同時間點的空白組比較具有顯著性差異 (P＜0.05)。說明芍藥甘草湯能夠調節家兔膀胱平滑肌的肌電活動和膀胱收縮時的膀胱壓力，能夠影響家兔膀胱平滑肌舒縮功能。

2.2.4 對痙攣模型神經遞質的影響 田豐瑋等［25］通過改良吳氏法制作大鼠痙攣模型，發現芍藥甘草湯口服給藥，能明顯升高痙攣大鼠模型腦內甘氨酸、γ-氨基丁酸、5-羥色胺水平，明顯增加上肢伸直幅度，降低肌張力。說明芍藥甘草湯對痙攣大鼠腦內與痙攣相關的抑制性和調節性神經遞質有一定的影響，但量-效關系不明顯。提示芍藥甘草湯通過調節腦內與痙攣有關的神經遞質而對痙攣起到治療作用。

2.3 對肝損傷的保護作用 芍藥甘草湯具有保護急性肝損傷的作用。邸琳等［26］采用急性肝損傷昆明種小鼠模型實驗表明，芍藥甘草湯20、10、5 g(生藥)/kg灌胃給藥，對四氯化碳引起的小鼠血清谷丙轉氨酶 (ALT)活性升高有顯著的抑制作用，降低四氯化碳中毒小鼠血清中丙二醛(MDA)水平，對撲熱息痛和硫代乙酰胺所致的肝損傷小鼠血清中ALT和谷草轉氨酶 (AST)活性升高有明顯的降低作用，對酒精所致的肝損傷小鼠血清中ALT和AST升高有明顯的降低作用，同時降低肝組織中MDA水平，提高肝組織中超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽氧化酶 (GSHPX)活性。宋軍等［27-28］通過小鼠化學性及免疫性肝損傷模型，觀察芍藥甘草湯經提取、分離純化得到的有效部位群-芍甘多苷對血清轉氨酶和肝臟病理形態的影響，結果模型組小鼠血清轉氨酶及肝臟病理組織學評分明顯增高，芍甘多苷組血清轉氨酶，肝臟病理組織學評分有不同程度的降低。實驗又發現，芍甘多苷對CCl4誘發大鼠亞急性肝損傷升高的轉氨酶有明顯的降低作用，并使形態學上的肝細胞變性和壞死得到明顯改善和恢復，能降低血栓素B2(TXB2)，升高PGF1α/TXB2比值;能降低NO水平和NOS活性。表明芍甘多苷有明顯的肝臟保護作用。

2.4 利膽退黃作用 芍藥甘草湯有效部位群具有利膽退黃的藥理作用。宋軍等［29］采用SD大鼠灌胃給予不同劑量的芍藥甘草湯有效部位群芍甘多苷，觀察藥物對膽汁流量的影響;采用小鼠異硫氫酸-1-柰酯黃疸模型，灌胃給予不同劑量的芍甘多苷，觀察藥物對膽紅素和轉氨酶的影響。實驗結果表明，芍甘多苷具有增加正常大鼠膽汁流量，降低異硫氫酸-1-柰酯黃疸模型小鼠總膽紅素、1 min膽紅素及AST活性 (P＜0.05或0.01)。

2.5 抗乙型肝炎病毒作用 芍藥甘草湯在體外和體內均有顯著抗乙型肝炎病毒活性。戴瑛等［30］采用鴨乙型肝炎病毒(DH-BV)感染鴨體內實驗，觀察芍藥甘草湯經提取、分離純化得到的有效部位群-芍甘多苷抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。結果顯示，DSM體外無明顯細胞毒性作用質量分數下，在第4天、第8天對HBV轉染的HepG 2215細胞株排泌HBsAg、HBeAg以及2215細胞HBV-DNA的表達具有明顯的抑制作用。鴨乙型肝炎病毒 (DH-BV)感染鴨體內試驗，DSM 88、264、528 mg/kg口服可以顯著降低鴨血清中的DH-BV、DNA和DHBsAg滴度，停藥后7 d仍可保持一定的抑制作用。

2.6 抗肝纖維化作用 芍藥甘草湯具有明顯的抗肝纖維化作用。趙軍寧等［31］通過大鼠肝纖維化模型，發現芍藥甘草湯提取物芍甘多苷灌胃給藥對大鼠CCl4肝纖維化具有顯著降低轉氨酶、減輕肝損傷組織病理改變作用，對肝臟內羥脯氨酸水平也有一定降低作用。表明芍甘多苷可明顯抑制CCl4慢性肝損傷大鼠肝組織纖維化程度，可通過抑制肝內膠原纖維增生，阻止肝纖維化及肝硬化進程。

2.7 保護胃黏膜作用 芍藥甘草湯對胃黏膜具有保護作用。李靜［32］采用乙酸潰瘍型模型大鼠實驗表明，芍藥甘草湯能減少其胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性，增加大鼠再生黏膜厚度，促進表皮生長因子 (EGF)、一氧化氮 (NO)等保護因子的合成，促進氧自由基清除劑超氧化物歧化酶(SOD)的合成，降低攻擊因子丙二醛 (MAD)的損害。其增強胃黏膜的保護作用是臨床上治療急、慢性胃炎及消化性潰瘍的作用機理之一。

2.8 止咳、平喘、抗過敏作用 芍藥甘草湯具有止咳、平喘和抗過敏作用。劉平［33］運用小鼠氨水引咳、豚鼠枸椽酸引咳、豚鼠整體引喘、豚鼠氣管片等實驗表明，該方具有良好的預防和治療咳嗽的作用，具有一定的平喘作用，并隨劑量大小而有明顯差異;還可增加豚鼠離體氣管平滑肌的解痙百分率，其平喘作用可能是對氣管平滑肌的直接松弛的結果。吳濱等［34］通過雞卵白蛋白抗原制造大鼠哮喘模型顯示，模型組血清lL-4、IL-6及lgE高于正常組 (P＜0.01)，經治療后均有所降低，且地塞米松片5 mg/kg組和地塞米松片25 mg/kg合芍藥甘草湯5 g/kg組最顯著。表明支氣管哮喘的發病與血清IL-4、IL-6及IgE的異常有關，芍藥甘草湯對其具有調節作用。蔡宛如等［35］通過整體實驗，觀察芍藥甘草湯對組胺所致豚鼠支氣管收縮和卵白蛋白誘發的致敏豚鼠哮喘及致敏大白鼠顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒影響，結果3 g/kg和10 g/kg劑量的芍藥甘草湯均能顯著延長豚鼠引喘潛伏期 (P＜0.01或P＜0.001)和抑制大鼠顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒 (P ＜0.001)。關煒等［36］研究認為，芍藥甘草湯可以抑制卵蛋白 (OVA)致敏支氣管哮喘小鼠各類炎性細胞的增生，調節肺組織中氧化/抗氧化系統的平衡，減輕氧自由基對肺組織結構的氧化損傷程度，因而對支氣管哮喘有一定的預防治療作用。

2.9 對跟腱組織的保護作用 芍藥甘草湯能夠抑制大鼠跟腱細胞的凋亡，可以起到對大鼠跟腱組織的保護作用。任東坡等［37］通過電刺激、跳躍等方法制造大鼠末端病模型實驗結果發現，光鏡下各組大鼠末端區都有不同程度的凋亡細胞，細胞形態呈現水腫，腱區及跟骨區顯現玻璃樣變，毛細血管浸入等組織學變化。凋亡指數顯示，生理鹽水組凋亡細胞最多，正常組的凋亡細胞最少，中藥組的凋亡細胞呈現減少的趨勢。

2.10 增強免疫調節作用 芍藥甘草湯能顯著提高機體特異性和非特異性免疫功能。王璞等［38］通過觀察不同質量濃度芍藥甘草湯對系統性紅斑狼瘡轉基因動物模型MRL/Lpr小鼠的影響，證實高質量濃度芍藥甘草湯能明顯改善病鼠癥狀，延長生存期;改善CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞比例可能是藥物發揮免疫調節作用的作用機制之一。該方劑能安全有效用于治療系統性紅斑狼瘡活動期。石學魁等［39］通過研究芍藥甘草湯的特異性免疫功能，發現芍藥甘草湯大、中、小劑量 (4、2、1 g/kg)組均能顯著提高正常小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率、吞噬指數，促進正常小鼠淋巴細胞轉化率、溶血空斑及溶血素的形成。劉文輝［40］采用BALB/c小鼠免疫功能實驗證實，芍藥甘草湯能增強CD4+T淋巴細胞活性，增強腹腔巨噬細胞的活化，提高小鼠NK細胞的殺傷率，對于B淋巴細胞分泌抗體的功能有一定的促進作用，體外能有效的刺激小鼠脾細胞的增殖，并呈質量濃度依賴性。

2.11 通便作用 芍藥甘草湯具有促進腸道潤滑而便通的作用。齊微等［41］以小鼠糞便含水量、家兔離體腸管及小腸碳末推進實驗顯示，高劑量組 (25.4 g/kg)小鼠小腸碳末推進率與模型組比較，有顯著差異;低劑量組 (12.7 g/kg)與模型組比較，無顯著差異。芍藥甘草湯對家兔離體腸管呈抑制作用。說明在高劑量時，芍藥甘草湯能促進碳末推進 (可能為抑制痙攣的胃腸平滑肌使排便正常)。孫冬陽［42］通過小腸炭末推進率實驗證實，芍藥甘草湯可治療津虧便秘，白芍配伍生甘草瀉下作用較強，隨著白芍量的增加在一定范圍內瀉下作用有增強趨勢，在鎮痛最佳比例下本方也具有瀉下作用。

2.12 其他 芍藥甘草湯隨著劑量不同有著雙向調節的作用。即一方面可松弛痙攣，緩解疼痛，起鎮靜抑制作用;另一方面又可起興奮促進作用。表現在該方低質量濃度時可使胃腸呈興奮狀態，高質量濃度時卻抑制胃腸蠕動。同樣，對正常及胃酸缺乏者能增加胃酸分泌，而酸度高者使之暫時下降。芍藥甘草湯的雙向調節作用，可能與c-AMP能抑制胃酸分泌，c-GMP能刺激胃酸分泌，二者對胃酸分泌起相互對抗的調節作用有關［43］;芍藥甘草湯的抑制回腸收縮、雙向調節、鎮痛、抗炎、解痙作用，對消化性潰瘍有良好的治療［44］。

3 結語

芍藥甘草湯作為傳統經典方劑，有較高的臨床應用價值。日本學者早在上世紀90年代就本方的藥理研究報道內容較多，取得了相當進展。資料顯示，日本將芍藥甘草湯作為漢方鎮痛的有效方劑，不論寒熱虛實皆可應用，多偏重于臨床療效的觀察。21世紀初近五年間，我國對該方進行了大量的實驗方劑學研究，認為芍藥甘草湯具有很好的抗炎、鎮痛、鎮靜、解除平滑肌痙攣、保護胃黏膜、保護肝臟、增強免疫、通便等多種藥理學作用。近年，在實驗研究的基礎上，通過中醫辨證論治，已將該方廣泛運用于臨床各科，且取得了顯著療效。今后，應加強該方的分子生物學和中醫臨床的結合研究，從多學科、多系統、多病種的角度探討芍藥甘草湯的作用機制。

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