羊肚菌菌絲體、菌核培養(yǎng)的試驗

王偉偉

（甘肅省小隴山林業(yè)實驗局觀音林場，甘肅 天水 741038）

羊肚菌（Morchella esculenta）是一種珍貴的食用和藥用真菌，子實體味鮮美，營養(yǎng)豐富，含有19種氨基酸和多種維生素，所含有的營養(yǎng)成分是其它種類的食用菌所不及的。其性平，味甘寒無毒，具有益腸胃、化痰理氣之功效。隨著人們生活水平的日益提高，對營養(yǎng)均衡的追求不斷加強(qiáng)，羊肚菌越來越受人們的喜愛，所以人工栽培技術(shù)的提高也就顯得更加迫切了。因而尋找羊肚菌菌絲的最適培養(yǎng)材料，探索和分析羊肚菌的腐生性，對于羊肚菌的人工栽培無疑是必須的。Volk and Leonand認(rèn)為羊肚菌菌絲的營養(yǎng)生長及菌核的形成、生長是其生活史的重要階段。本試驗初步觀察了三種野生羊肚菌在不同培養(yǎng)基上菌絲生長、菌核產(chǎn)生的特征。

1 材料與方法

1.1 菌絲培養(yǎng)

菌種：粗腿羊肚菌（Morchella crassipes），羊肚菌（M.esculenta），尖頂羊肚菌（M.conica）。取新鮮子實體，表面用0.1%升汞消毒，挑取菌柄頂端內(nèi)部組織，放入PDA斜面。另在PDA三角瓶中懸掛子實層，收集于囊孢子，萌發(fā)后移置PDA斜面，15～25℃室溫培養(yǎng)，長滿后備用。培養(yǎng)基：①PDA培養(yǎng)基。②豆芽汁培養(yǎng)基，黃豆芽100g煮汁，蔗糖50g，瓊脂20g，水1000mL。③葡萄糖硝酸鈉培養(yǎng)基，葡萄糖30g，硝酸鈉1.5g，硫酸鎂0.5g，磷酸氫二鉀1.0g，硫酸亞鐵0.01g，瓊脂20g，水1000mL。④完全培養(yǎng)基，蛋白胨2g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0.5 g，瓊 脂20g，水1000mL。⑤PDA 綜 合 培 養(yǎng) 基，PDAl000mL，尿素1g，三氯化鐵0.1g。⑥土壤浸液培養(yǎng)基，葡萄糖10g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，尿素1g，石膏l(xiāng)g，瓊脂20g，野生羊肚菌生長處的土壤浸液1000mL。以上各種培養(yǎng)基經(jīng)1.2kg／cm230min滅菌后制成斜面種后置于15～25℃室溫培養(yǎng)。

1.2 菌核培養(yǎng)

菌種：粗腿羊肚菌（M.crassipes）。培養(yǎng)基：①麥粒；②麥粒，蔗糖1%，碳酸鈣1%；③棉子殼；④棉子殼，蔗糖1%，碳酸鈣l%；⑤棉子殼，混合泥漿，碳酸鈣1%，蔗糖l%；⑥麥粒復(fù)合培養(yǎng)基，麥粒浸漲煮熟，按一定比例加入蛋白胨、酵母膏、酪蛋白、微量元素液及混合泥漿（砂、土、腐殖質(zhì)、蒸餾水混合，使pH6.0～6.5，含水60%～65%）。方法：用1000mL廣口瓶作栽培容器，先將培養(yǎng)基拌勻裝入瓶內(nèi)再將混合泥漿裝入，留適當(dāng)空間，用牛皮紙和聚丙烯膜封口，于1.5kg／cm2下滅菌2h，冷卻后接斜面種，室溫5～15℃、弱光下培養(yǎng)，試驗均設(shè)三個重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長特征

初分離的菌絲體為白色或灰白色，稀疏，緊貼培養(yǎng)基。5天左右顏色逐漸變深，其中4、6號培養(yǎng)基上的為淺黃褐色，3號培養(yǎng)基為黃褐色，5號培養(yǎng)基灰褐色，并產(chǎn)生大量水珠，1、2號培養(yǎng)基為紅褐色。7天左右可見管底散生1～3mm大小的菌核。6號培養(yǎng)基上菌絲生長旺盛，可作為培養(yǎng)羊肚菌菌絲較好的培養(yǎng)基，1、2、4號培養(yǎng)基次之，3、5號培養(yǎng)基長勢較差。

羊肚菌菌絲有絲狀、絨毛狀和顆粒狀三種形態(tài)。生長前端多為絲狀匍匐菌絲，后逐漸為絨毛狀的氣生菌絲，繼續(xù)培養(yǎng)則出現(xiàn)顆粒狀。鏡檢顆粒狀菌絲為高度扭曲的變態(tài)菌絲，這可能是菌絲對營養(yǎng)衰竭或不良外界條件的應(yīng)變形態(tài)。

三種羊肚菌中，以粗腿羊肚菌生長較好，速度快，旺盛；其它兩種長勢稍弱。在兩種分離方式中，以子實體分離物生長較好，孢子分離物生長較弱。三種羊肚菌均可產(chǎn)生菌核，菌核為淺黃褐至棕褐色；在菌絲滿管后，于管底散生，后逐漸聚集。不同的培養(yǎng)基菌核形成表現(xiàn)各異，以子實體分離物在6號培養(yǎng)基上產(chǎn)生菌核量多且個體較大，l、3、4、5號培養(yǎng)基上產(chǎn)生數(shù)量較少，2號培養(yǎng)基不產(chǎn)生菌核。孢子分離物則較復(fù)雜，尖頂羊肚菌在2號培養(yǎng)基上不產(chǎn)生菌核，粗腿羊肚菌僅在1、6號培養(yǎng)基上產(chǎn)生，而羊肚菌在2、6號培養(yǎng)基上不產(chǎn)生菌核。

2.2 菌核培養(yǎng)特征

不同培養(yǎng)基對菌絲生長及菌核產(chǎn)生有明顯影響。1號培養(yǎng)基上無菌核形成；2號培養(yǎng)基菌核較小黃色，散生于瓶壁；3號培養(yǎng)基有個別褐紅菌核；4號培養(yǎng)基菌核褐紅，散生于培養(yǎng)基表面；5號培養(yǎng)基在土層有較大褐紅菌核，且有大量白色絨毛狀菌絲球；6號培養(yǎng)基在土層有大量成片菌核，黃褐色。

從總體上來看，在6號培養(yǎng)基上菌絲生長濃密、旺盛、潔白外，其余5種培養(yǎng)基上的菌絲生長均稀疏。蔗糖、氯化鈣對菌核形成有促進(jìn)作用（2、4號培養(yǎng)基）；而只有在加土的5、6號培養(yǎng)基中才能在土層的瓶壁上產(chǎn)生較大的菌核，說明土壤的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)及貧脊條件對產(chǎn)生大量菌核是必需的。

3 討論

3.1 在羊肚菌菌絲體培養(yǎng)中，以含野生羊肚菌生長土壤浸出液6號培養(yǎng)基表現(xiàn)最好，因此進(jìn)一步研究這些土壤中的營養(yǎng)成分對羊肚菌生長的作用有一定意義。

3.2 不同培養(yǎng)基或分離方式對菌核的產(chǎn)生影響不同，供試的三種羊肚菌均可產(chǎn)生菌核，這一點與T.N.Kaul報道的不一致。

3.3 羊肚菌是食用菌中可產(chǎn)生菌核的少數(shù)種之一。Volk and Leonand對羊肚菌的生活史研究指出，菌核是羊肚菌子實體產(chǎn)生的重要階段，因此研究菌核形成與發(fā)育的生理生化特性，是進(jìn)行人工栽培的關(guān)鍵因素之一。