白背葉黃酮類化學成分研究

韋 松 曲 磊 鄭作文

（廣西中醫(yī)學院，廣西 南寧 530001）

白背葉為大戟科野桐屬植物白背葉Mallotus apelta(Lour.)Muell.-Arg.的干燥葉［1］，又名白鶴葉、白面戟、白面風、白桃葉、白膜樹。廣泛分布于廣西、河南、安徽、浙江、江西、湖南、廣東、海南等省區(qū)。味微苦、澀、平。白背葉的根、莖、葉入藥。白背葉的藥理作用主要表現(xiàn)為止血、抑菌、抗肝纖維化、抗癌等作用［2］。前期研究發(fā)現(xiàn)白背葉所含的總黃酮和洋芹素對人肝癌和人胃癌細胞的增殖均有顯著抑制作用［3-6］。本實驗對白背葉的黃酮類化學成分進行了系統(tǒng)的分離，以期得到新的抗癌活性成分。

1 材料和儀器

XT4-100A型顯微熔點測定儀(溫度未校正)，BRUKER TENSOR27 FT-IR；Finnigan Trace DSQ四級桿質譜儀；BRUKER Drx-500MHz、BRUKER AV-400MHz核磁共振波譜儀；柱層析和薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)；聚酰胺粉為浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠生產(chǎn)；AB-8大孔吸附樹脂為天津市光復精細化工研究所產(chǎn)品；反相硅膠C-18為YMC公司產(chǎn)品；Sephadex LH-20為通用公司產(chǎn)品；所用試劑均為分析純；所用藥材由廣西中醫(yī)學院藥用植物教研室韋松基教授鑒定。對照品由中藥化學教研室提供。

2 提取與分離

白背葉的葉陰干后粉碎得粉末5 kg，用三倍量70%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏275 g。將浸膏混懸分散于2000 mL水中，分別用石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分減壓濃縮，得到石油醚部位28 g，乙酸乙酯部位43 g，正丁醇部位46 g。

乙酸乙酯部位用硅膠柱分離，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)硅膠、聚酰胺、ODS和Sephadex LH-20等柱層析進一步分離，得到化合物1～4。正丁醇部位進行大孔樹脂柱層析，以水-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)硅膠、聚酰胺、ODS、Sephadex LH-20等柱層析進一步分離，得到化合物5和化合物6。

3 結構鑒定

化合物1:淡黃色粉末(MeOH)，mp 343～345℃，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。IR(KBr)cm－1:3300(OH)，1660(C=O)，1600，1500(芳環(huán))，820(芳香鄰二氫)。與洋芹素對照品共TLC，在3種展開系統(tǒng)下其Rf值完全一致，且混合熔點不下降。Rf值和IR(KBr)vmax均與文獻［7］報道對照品Apigenin的數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物1為Apigenin即洋芹素。

化合物2:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，mp 226～228℃，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應呈陽性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。IR(KBr)cm－1:3432(OH)，1652(C=O)，1612，1596，1502，1445(芳環(huán))。與洋芹苷對照品共TLC，在3種展開系統(tǒng)下其Rf值完全一致，且混合熔點不下降。Rf值和IR(KBr)Vmax均與文獻［8］報道對照品 Apigenin-7-O-β-D-glucoside即洋芹苷的數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物2為洋芹苷。

化合物3:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應呈陽性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。EI-MS m/z:270［M］+，為黃酮苷失去糖支鏈的相對分子質量。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.95(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，H-6')，6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，H-5')，6.85(1H，S，H-3)，6.42(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，12.95(1H，brs，5-OH)，5.09 ～3.26為葡萄糖上的氫信號，2.15(3H，S，-CH3)。13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:164.3(C-2)，103.1(C-3)，182.0(C-4)，161.4(C-5)，99.6(C-6)，162.7(C-7)，94.8(C-8)，156.9(C-9)，105.2(C-10)，121.0(C-1')，128.6(C-2')，116.0(C-3')，161.1(C-4')，116.0(C-5')，128.6(C-6')，99.5(C-1″)，73.0(C-2″)，76.2(C-3″)，69.8(C-4″)，73.9(C-5″)，63.4(C-6″)。170.2(C=O)，20.6(-CO-CH3)(端甲基)。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道 Apigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucoside一致，故鑒定化合物3為Apigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucosid 即芹菜素-7-O-β-D-(6″-O-乙?；?-葡萄糖苷。

化合物4:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應呈陽性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。EI-MS m/z:414［M-p-coumaryl］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.94(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，H-6')，6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，H-5')，7.91(2H，d，J=8.3 Hz，H-2?，H-6?)，6.90(2H，d，J=8.3Hz，H-3?，H-5?)，6.80(1H，S，H-3)，6.40(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.76(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，13.00(1H，brs，5-OH)，7.45(1H，d，J=15.5 Hz，H-7?)，6.32(1H，d，J=15.5 Hz，H-8?)，4.48～3.14為葡萄糖上的氫信號。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:162.7(C-2)，103.1(C-3)，182.0(C-4)，156.9(C-5)，99.4(C-6)，164.3(C-7)，94.7(C-8)，161.4(C-9)，105.4(C-10)，121.0(C-1')，128.6(C-2')，116.0(C-3')，161.2(C-4')，116.0(C-5')，128.6(C-6')，99.5(C-1″)，73.0(C-2″)，73.8(C-3″)，70.0(C-4″)，76.2(C-5″)，63.4(C-6″)，124.9(C-1?)，130.2(C-2?)，115.7(C-3?)，159.8(C-4?)，115.7(C-5?)，130.2(C-6?)，145.0(C-7?)，113.7(C-8?)，166.5(C-9?)。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］報道 Apigenin-7-O-β-D-(6″-p-coumaryl)-glucoside 即芹菜素-7-O-β-D-(6″-反式-對-香豆酰基)-葡萄糖苷一致，故鑒定化合物4為芹菜素-7-O-β-D-(6″-反式-對-香豆?；?-葡萄糖苷。

化合物5:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。ESI-MS m/z:594［M］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:8.00(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，H-6')，6.99(2H，d，J=8.6 Hz H-3'，H-5')，6.75(1H，S，H-3)，13.70(1H，brs，5-OH)；5.03～3.29為兩個葡萄糖上的氫信號。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:164.1(C-2)，102.6(C-3)，182.3(C-4)，158.7(C-5)，107.6(C-6)，161.3(C-7)，105.3(C-8)，155.2(C-9)，103.7(C-10)，121.6(C-1')，129.1(C-2')，115.9(C-3')，161.2(C-4')，115.9(C-5')，129.1(C-6')，71.0(C-1″)，72.0(C-2″)，77.9(C-3″)，69.1(C-4″)，81.9(C-5″)，59.9(C-6″)，73.4(C-1?)，71.0(C-2?)，78.9(C-3?)，70.6(C-4?)，80.9(C-5?)，61.3(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］報道Vicenin 2一致，故鑒定化合物5為Vicenin 2。

化合物6 淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。ESIMS m/z:564［M］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:8.00(2H，d，J=8.5 Hz H-2'，H-6')，6.88(2H，d，J=8.5 Hz H-3'，H-5')，6.75(1H，S，H-3)，13.8(1H，brs，5-OH)，5.05 ～2.49為兩個糖上的氫信號。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:163.6(C-2)，103.7(C-3)，182.0(C-4)，158.7(C-5)，108.3(C-6)，161.1(C-7)，103.7(C-8)，155.2(C-9)，103.7(C-10)，121.9(C-1')，129.1(C-2')，116.0(C-3')，161.1(C-4')，116.0(C-5')，129.1(C-6')，74.2(C-1″)，70.0(C-2″)，75.1(C-3″)，70.1(C-4″)，71.2(C-5″)，74.6(C-1?)，70.7(C-2?)，73.5(C-3?)，70.1(C-4?)，81.3(C-5?)，61.4(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］報道Corymboside一致，故鑒定化合物6為Corymboside。

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