中藥復方護骨膠囊對激素誘導骨質疏松大鼠骨密度和骨形態計量的研究

胡伶平 洪曼杰 胡敏華 孫平

中藥復方護骨膠囊對激素誘導骨質疏松大鼠骨密度和骨形態計量的研究

胡伶平 洪曼杰 胡敏華 孫平

目的探討中藥復方護骨膠囊對去卵巢大鼠骨丟失的影響。方法3月齡SPF級雄性SD大鼠30只，平均分為3個組，激素組（Met）：皮下注射甲強龍(Met)5mg/kg/d，每周5次；中藥組(CH)：在Met組基礎上給予中藥復方護骨膠囊(150mg/kg/d)灌胃，實驗期12周，正常對照組給予一定量的生理鹽水，實驗期同樣為12周，測定大鼠的右側股骨時可用DXA進行測定，同時進行腰椎行骨密度(BMD)測定，而后對其進行分析。結果Met組腰椎和股骨BMD顯著低于Nrm組；CH組腰椎和股骨BMD顯著高于Met組。Met組Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs顯著低于Nrm組，Tb.Sp、ES/BS顯著高于Nrm組；中藥組Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs顯著高于Met組，Tb.Sp，ES/BS顯著低于Met組。結論中藥復方護骨膠囊具有促進骨形成的作用，并能提高骨質疏松的骨密度，具有預防骨質疏松等特點，并在治療上也能起到一定的作用，值得在臨床上推廣應用。

骨質疏松；糖皮質激素；骨密度；骨形態計量學

糖皮質激素是一種很好的抗炎藥物，并且也具有抗休克等作用，所以糖皮質藥物在器官移植，腫瘤治療上比較常見[1]。有文獻指出糖皮質藥物在對患者使用后，容易導致患者的骨質疏松[2-5]。在祖國傳統醫學中，骨質疏松屬于“骨萎”、“骨痹”、“骨枯”等范圍，腎為先天之本，藏精主骨生髓，骨髓的生長發育，腎精充足則骨骼強健有力；反之則骨骼失養[6]。護骨膠囊，是由制何首烏、淫羊藿、熟地黃等多味中藥加工而成的復方膠囊制劑，本方根據中醫“腎主骨生髓”的理論，采用補肝腎，益精血，調理陰陽的治則，輔以養血活血，祛風除濕，強筋壯骨之法，兼止痛鎮靜組成的綜合作用的方劑，用于治療中醫辨證屬于腎精虧虛、筋骨失養證的骨質疏松癥[7]。用雌性大鼠去勢建立絕經后骨質疏松癥動物模型，探討護骨膠囊對骨質疏松的防治作用，為護骨膠囊能得到進一步的應用提供科學的依據。

1 材料與方法

1.1 模型與分組實驗 模型采用3個月左右的雄性SD大鼠30只，大鼠的體質量為(206±19)g，對這30只大鼠進行適應喂養7d左右，而后將這30只大鼠隨機分激素組（Met）：注射甲強龍(Met)5mg/kg/d在大鼠的皮下，且每周對其注射5次；中藥組(CH)：在Met組基礎上給予中藥復方護骨膠囊(150mg/kg/d)灌胃，實驗期12周，正常對照組給予一定量的生理鹽水，實驗期同樣為12周。30只大鼠都在籠子中進行了喂養，讓它們自由進食，大鼠喝的水用平常的純凈水，實驗期為12周。實驗期過后采用氯胺酮對各組的大鼠進行麻醉，而后用放血的方式將其處死，根據實驗需要留取第5腰椎(L5)、右側股骨和脛骨。

1.2 股骨和L5骨密度測定 測定的儀器采用QDR4500A型雙能X線骨密度測定儀，而后將大鼠的第5腰椎與股骨放在儀器上，然后利用相關軟件對其進行分析。QDR4500A型雙能X線骨密度測定儀的掃描速度為10mm/s，掃描間距0.5mm×0.5mm。

1.3 脛骨骨形態計量學分析 30只大鼠在實驗結束前在其皮下注射鹽酸四環素和Calcein，可在13～14d進行注射。取右側脛骨用低速鋸(Buehler，USA)將其切開暴露骨髓腔，將脛骨上段置于磷酸-福爾馬林緩沖液中，用乙醇對骨染色脫水，包埋后用切片機對包埋塊實施切片，切成4～9μm大小。用Masson-Goldner Trichrome對較薄的切片進行染色，透明后封片，薄片刻用于測量破骨細胞及觀察骨小梁，較厚的切片不進行染色，直接封片觀察，厚片用于骨形態計量學測量。采用圖像數字化分析儀對其進行檢測，測算參數之含義和計算公式見文獻[6]。

1.4 統計學方法 數據處理采用統計學軟件SPSS 13.0進行統計分析，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，組間兩獨立樣本t檢驗及單因素方差分析(one-way ANOVA)進行統計分析，Ρ<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腰椎和股骨骨密度的變化 Met組L5和股骨BMD顯著低于Nrm組(P<0.01)；CH組L5和股骨BMD顯著高于Met組(P<0.01)，見表1。

表1 各組大鼠骨密度結果(g/cm2)(±s，n=8)

表1 各組大鼠骨密度結果(g/cm2)(±s，n=8)

注：aP<0.05,bP< 0.01vs Nrm,cP<0.01vs Met。

分組 L5股骨Nrm組 0.221±0.005 0.241±0.013 Met組 0.205±0.004b 0.213±0.008b CH組 0.212±0.005ac 0.229±0.007bc

2.2 脛骨骨組織形態計量學的變化 Met組的靜態學指標均顯著降低(P<0.01)，CH組各指標與Met組相比較顯著增加(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠脛骨干骺端(松質骨)靜態指標結果(±s,n=8)

表2 各組大鼠脛骨干骺端(松質骨)靜態指標結果(±s,n=8)

注：aP<0.01vs Nrm,bP<0.05,cP<0.01vs Met。

分組 %Tb.Ar(%) Tb.Th(μm) Tb.Sp(μm) Tb.N(#/mm)Nrm組 32.89±10.90 50.04±10.10 177.01±30.75 4.03±0.51 Met組 17.59±9.11a 36.22±8.37a 522.80±147.22a 2.16±0.93a CH組 25.15±8.74b 42.02±11.62b 400.42±70.19ac 3.12±0.83b

Met組動態學指標MS/BS、MAR和BFRs較Nrm組均顯著降低(P<0.001)，CH組各指標較Met組顯著增加(P<0.05)；動態學指標ES/BS，Met組較Nrm組顯著增加(P<0.001)，CH組較Met組顯著降低(P<0.01)，見表3。

表3 各組大鼠脛骨干骺端(松質骨)動態指標結果(±s，n=8)

表3 各組大鼠脛骨干骺端(松質骨)動態指標結果(±s，n=8)

注：aP<0.05,bP<0.01vs Nrm,cP<0.05,dP<0.01vs Met。

分組 MS/BS(%) MAR(μm/d)BFRs(μm/d×100) ES/BS(%)Nrm組 10.89±1.78 1.55±0.20 11.98±3.05 6.04±1.31 Met組 3.70±0.78b 0.83±0.16b 2.98±0.98b 10.4±2.84b CH組 5.47±1.13bd 1.18±0.18bd 5.18±1.92ac 7.22±1.56d

3 討論

糖皮質激素在哮喘及風濕免疫性疾病中比較常用，有文獻指出長期使用糖皮質激素很容易導致人體的骨量丟失，引發繼發性骨質疏松，所以給臨床使用造成了很大的障礙。有文獻報道[8]經常使用糖皮質激素的人群，有一半以上會出現骨量丟失，并且會因為長期使用而導致骨質疏松，且很容易引起骨折。有些病人在使用糖皮質激素1～6月時，骨量的丟失是最快的，如果長期使用會給患者的治療帶來很大的影響。經調查，經常使用糖皮質激素人群的骨折率是正常人的1～3倍，因此如何有效地預防和治療骨質疏松已成為了目前亟待解決的問題[9]。

在我國的醫學界認為，補腎益精類中藥方劑有增加成骨細胞活性、抑制破骨細胞活動、防治異常骨丟失、調節骨代謝的作用[10]。護骨膠囊，是由制何首烏、淫羊藿、熟地黃、龜甲、巴戟天、杜仲、續斷、骨碎補、當歸等多味中藥加工而成的復方膠囊制劑。本方根據中醫“腎主骨生髓”的理論，采用補肝腎，益精血，調理陰陽的治則，輔以養血活血，祛風除濕，強筋壯骨之法，兼止痛鎮靜組成的綜合作用的方劑，用于治療中醫辨證屬于腎精虧虛、筋骨失養證的骨質疏松癥。在前期對護骨膠囊治療絕經后婦女骨質疏松癥的臨床研究中，觀察到護骨膠囊通過激活成骨細胞的功能、促進新骨的形成、增加骨密度、明顯改善骨痛等主要癥狀來治療骨質疏松癥[11-12]。

對骨質疏松患者進行診斷時，可測定患者的骨密度，同時對骨密度的測定還能起到預防骨折發生的特點，同時也可作為對骨質疏松患者的療效評價。本研究結果表明，中藥復方護骨膠囊對激素誘導骨質疏松大鼠的股骨和腰椎BMD有顯著提高作用，能夠有效阻止激素誘導大鼠的骨量丟失。骨組織計量學能有效地研究藥物在患者體內抗骨質疏松的效果，還能研究骨組織的形態及骨組織的結構。本研究表明，Met組動態學指標MS/BS、MAR和BFRs較Nrm組均顯著降低(P<0.001)，CH組各指標較Met組顯著增加(P<0.05)，說明中藥復方護骨膠囊對糖皮質激素引發的骨質疏松具有很好的預防作用，且能很好地改善骨顯微結構。在骨吸收方面，中藥組能拮抗GC誘導破骨細胞骨吸收增強的作用，抑制骨吸收，維持骨量。

糖皮質激素藥物在臨床上應用很多，而長期使用糖皮質激素會造成骨質疏松，為繼發性骨質疏松癥的首要病因，且目前治療手段有限。本研究首次報道了中藥復方護骨膠囊對激素誘導骨質疏松大鼠有較好的防治作用，為其進一步的臨床研究提供了科學依據。

[1] 許榮海，黃美虹，許幼仕.糖皮質激素的合理應用[J].當代醫學，2010,16（10）：33-34.

[2] Gennari L,Bilezikian JP.Glucocorticoid-induced osteoporosis:hope on the HORIZON[J].Lancet,2009,373（9671）:1225-1226.

[3] Van Brussel MS,Bultink IE,Lems WF.Prevention of glucocorticoidinduced osteoporosis[J].Expert Opin Pharmacother,2009,10(6):997-1005.

[4] Silverman SL,Lane NE.Glucocorticoid-induced osteoporosis[J].Curr Osteoporos Rep,2009,7(1):23-26.

[5] Caplan L,Saag KG.Glucocorticoids and the risk of osteoporosis[J].Expert Opin Drug Saf,2009,8(1):33-47.

[6] Parfitt AM,Drezner MK,Glorieux FH,et al.Bone histomorphometry:standardization of nomenclature,symbols,and units.Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee[J].J Bone Miner Res,1987,2(6):595-610.

[7] Vestergaard P,Rejnmark L,Mosekilde L.Fraeture risk assoeiated with systemic and topical cortieosteroids[J].J Intern Med,2005,257(4):374-384.

[8] Kaji H,Yamauchi M,Chihara K,et al.The threshold of bone mineral density for Vertebral fracture in female patients with glucoeortieoid-induced osteoporosis[J].Endocr J,2006,53(1):27-34.

[9] Rehman Q,Lane NE.Effect of glucocorticoids on bone density[J].Med Pediatr On Col,2003,41(3):212-216.

[10] 丁桂芝,劉忠厚,周勇.中西醫結合防治骨質疏松癥的基礎與臨床研究進展[J].中國骨質疏松雜志,1997,3(2):81.

[11] 洪曼杰,盧麗,王曉東,等.中藥復方護骨膠囊治療原發性骨質疏松癥的臨床研究[J].中國骨質疏松雜志,2008,14(12):891-895.

[12] 王曉東,鄧偉民,洪曼杰,等.護骨膠囊治療絕經后婦女骨質疏松骨折的臨床研究[J].實用醫學雜志,2011,27(9):1662-1664.

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.22.014

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