韭菜子不同炮制品對正常和腎陽虛小鼠交配能力的影響

吳文輝， 胡昌江， 劉俊達， 李 倩， 龍蘭艷

(成都中醫藥大學藥學院，四川成都611137)

韭菜子為百合科植物韭菜Allium tuberosum Rottl.ex Spreng.的干燥成熟種子，具有溫補肝腎，壯陽固精，暖腰膝的功效，始載于《名醫別錄》，列為中品，蘇頌謂:“案許宋說文，韭字象葉出地上形，一種而久生，故謂之韭，一歲三、四割，其根不傷，至冬壅培之，先春復生”［1］。韭菜子作為壯陽補腎用入藥在我國已有數千年歷史之久，韭菜子炮制入藥的歷史同樣悠久，至漢代《華氏中藏經》“酒浸三宿，濾出焙干，杵為末”［2］開始有炮制方法的記載，隨著朝代更替其炮制方法也有著豐富發展。從漢代到清代韭菜子記載的炮制方法有:酒浸焙、酒炙、醋炙、炒制、蒸曝炒等，但歷代文獻均未見有鹽炙炮制方法的記載［3］，而韭菜子現代的炮制方法比較統一，自《中國藥典》1977年版以后均僅收載鹽炙法，酒炙法只在各地方標準收載［4］。為了研究傳統酒炙韭菜子對治療腎陽虛的作用，本實驗通過生品，鹽炙品以及酒炙品對正常和腎陽虛小鼠交配能力影響的對比研究，為臨床合理用藥提供科學依據［5］。

1 實驗材料與儀器

1.1 材料 氫化可的松注射液 (100 mg/20 mL，天津金耀氨基酸有限公司，批號1004072)，乙烯雌酚片 (0.5 mg/片，上海利生制藥廠，批號:20090505)，氯化鈉注射液 (500 mL/瓶，四川科倫藥業有限公司，批號:1008251)，韭菜子購于成都荷花池藥材市場，經成都中醫藥大學胡昌江教授鑒定為百合科韭菜的種子，鹽炙和酒炙按照《中國藥典》2010年版炮制方法炮制。

1.2 實驗動物 昆明種小白鼠，成都達碩生物科技有限公司提供，實驗動物生產許可證號:SCXK(川)2008-24。

1.3 實驗儀器 JJ200電子天平 (感量0.01 g，常熟市雙杰測試儀器廠)，計時秒表 (中國卡西歐有限責任公司)，紅外線攝像頭 (臺灣多安科技有限公司)。

2 實驗方法

2.1 藥物制備 韭菜子按照《中國藥典》2010年版鹽炙與酒炙方法炮制［6］。由于對韭菜子有效化學物質基礎不明確［7-8］，故本實驗采用醇水雙提的方法。取韭菜子140 g，分別用10倍量和8倍量75%乙醇提取兩次，殘渣再用10倍量與8倍量水提取兩次，第1次1.5 h，第2次1 h。合并濾液減壓回收，濃縮至1.08 g生藥/mL，放冰箱冷藏備用。陽性藥物制備:金匱腎氣丸52 g，用130 mL水溶解，放冰箱冷藏備用［9］。乙烯雌酚混懸液制備:乙烯雌酚片0.5 mg碾碎成粉末，用25 mL水配制成混懸液［10-12］。

2.2 韭菜子不同炮制品對腎陽虛小鼠交配能力的影響 昆明小鼠雄性60只，雌性3只，體質量22～25 g。雄性小鼠按體質量隨機分為6組:正常對照組，模型組，金匱腎氣丸組，生品韭菜子組，鹽炙韭菜子組，酒炙韭菜子組，每組10只。正常對照組和模型組灌胃純水0.4 mL/20 g，其余各組分別灌胃相應藥物0.4 mL/20 g，每日一次，連續30 d。從給藥第4天開始，除正常對照組皮下注射生理鹽水0.1 mL/20 g外，其余各組均注射氫化可的松0.1 mL/20 g，每日一次，連續7 d，造模同時連續給藥［13-14］。于給藥后第30天給藥1 h后觀察30 min內交配能力實驗，雌性小鼠于交配前3天按照0.4 mL/20 g灌胃乙烯雌酚混懸液，使之發情時間同步于交配時間，結果見表1。

2.3 韭菜子不同炮制品對正常小鼠交配能力的影響 昆明小鼠雄性48只，雌性小鼠3只，體質量22～25 g，雄性小鼠按體質量隨機分成4組:正常組，生品組，鹽炙品組，酒炙品組，每組12只。正常組灌胃純水0.4 mL/20 g，其余各組灌胃相應藥物0.4 mL/20 g，每日一次，連續30 d。于給藥后第30天給藥1 h后觀察30 min內交配能力實驗，雌性小鼠于交配前3天按照0.4 mL/20 g灌胃乙烯雌酚混懸液，每日一次，使之發情時間同步于交配時間，結果見表2。

表1 對腎陽虛小鼠交配能力的影響Tab.1 Impact of mating ability to yang deficiency mice

表2 對正常小鼠交配能力的影響Tab.2 Impact of mating ability to normal mice

2.4 統計學處理 數據采用SPSS17.0統計軟件處理，兩組間比較用Student T檢驗，多組間比較用Dunett T檢驗。

3 結論與討論

3.1 表1中數據表明:韭菜子生品和鹽炙品僅對腎陽虛小鼠的跨騎次數增加有統計學差異 (P＜0.05)，韭菜子酒炙品對腎陽虛小鼠的潛伏時間減少和跨騎次數增加均有顯著性統計學差異 (P＜0.01)，酒炙品組與鹽炙品組和生品組之間進行比較，結果顯示酒炙品組在跨騎次數的增加上與生品組和鹽炙品組有統計學差異且更優 (酒炙品組與生品組比較P＜0.05，酒炙品組與鹽炙品組比較P＜0.05)。表2中數據表明:韭菜子生品和鹽炙品對正常小鼠的跨騎潛伏時間減少和跨騎次數的增加沒有統計學差異，酒炙品對正常小鼠的潛伏時間減少 (P＜0.05)和跨騎次數增加 (P＜0.01)均有統計學差異，跨騎動物百分比也明顯提高，酒炙品組與鹽炙品組和生品組之間進行比較，結果顯示酒炙組在跨騎次數的增加上與生品組和鹽炙品組有統計學差異且更優 (酒炙品組與生品組比較P＜0.05，酒炙品組與鹽炙品組比較P＜0.05)。綜上所述，韭菜子在用于治療腎陽虛時應用酒炙品。

3.2 韭菜子生品組能顯著提高氫化可的松造模后小鼠的交配能力，說明韭菜子本身具有壯陽補腎的功效。模型組小鼠采用氫化可的松造模后，與正常組比較，小鼠的跨騎潛伏時間顯著延長，跨騎次數顯著減少，說明小鼠經氫化可的松造腎陽虛模型后能顯著降低小鼠交配能力，從腎主生殖的方面再次驗證氫化可的松造腎陽虛模型的適用性。韭菜子生品組與鹽炙組比較，跨騎潛伏時間和跨騎次數沒有統計學差異，從傳統中藥炮制理論方面鹽制入腎以及緩和藥物燥性和古書記載韭菜子在臨床應用中存在燥性，說明韭菜子鹽炙可能主要作用是降低其燥性而非增強其補腎壯陽之功效，本課題組也將對韭菜子鹽炙降低其燥性做進一步研究。韭菜子酒炙品在跨騎次數增加上優于生品與鹽制品，與傳統酒炙理論相符，也進一步驗證了傳統炮制理論中認為酒炙壯陽，同時也說明酒炙才是增強韭菜子補腎壯陽的主要原因，本課題也將對酒炙韭菜子的化學物質基礎以及酒炙增強其補腎壯陽作用的機理做進一步研究。

［1］中國植物志編輯委員會.中國植物志:第14卷［M］.北京:北京科學出版社，1980:170.

［2］華 佗(漢).華氏中藏進［M］.北京:中華書局，1985:50.

［3］中國中醫研究院中藥研究所.歷代中藥炮制資料輯要［M］.北京:內部出版，1973.

［4］福建省衛生廳.福建省中藥炮制規范［S］.福州:福建科學技術出版社，1988:348.

［5］龔千鋒.中藥炮制學［M］.北京:中國中醫藥出版社，2003:228.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:244.

［7］胡國華.韭菜籽化學成分及其生物活性研究［D］.上海:華東理工大學，2006.

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［9］彭蘊茹，沈明勤，羅宇慧，等.金匱腎氣丸防治小鼠腎陽虛的實驗研究［J］.中成藥，2004，26(5):395-397.

［10］陳 奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京:人民衛生出版社，2006:1094.

［11］張永祥.中藥藥理學新論［M］.北京:人民衛生出版社，2004:427.

［12］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.上海:上海科技出版社，2006:597.

［13］邵命海，肖 靜，王毅興，等.從“腎主生殖”角度評價腺嘌呤與氫化可的松誘導的腎陽虛模型［J］.上海中醫藥雜志，2008，42(2):57-59.

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