非小細胞肺癌微管蛋白-Ⅲ表達與紫杉醇療效的關系探討

張繼朋，胡曉璐，李高峰，陳瑞彬

(昆明醫學院第三附屬醫院，云南省腫瘤醫院胸外科，昆明650118)

肺癌的發病率和致死率已躍居各項腫瘤之首，嚴重危害人類的健康。化療在局部晚期非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者的治療中起至關重要的作用，但受藥物的耐藥性限制［1］。β微管蛋白-Ⅲ是近年來發現的耐藥蛋白，相關研究表明，其表達高低與紫杉醇的療效有一定關系［2］。該項研究采用免疫組化法檢測63例NSCLC患者的β微管蛋白-Ⅲ表達水平，探討其與紫杉醇療效關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取云南省腫瘤醫院胸外科2010年6月至2011年6月收治的63例不能手術，接受以紫杉醇為主化療的Ⅲa期以上的NSCLC患者。男37例，女26例，男女比例1.4∶1，平均年齡61歲。鱗癌29例，腺癌34例。分化程度:高分化19例，中-低分化44例。KPS評分≥80分。標本足夠進行免疫組化檢測(標本來源纖維支氣管鏡、淋巴結活檢、CT引導下穿刺活檢)。以肺大泡，肺隔離癥等11例患者作為對照組。入院時完成腦MRI、胸部CT、腹部CT、骨單光子發射型計算機斷層顯像(SPECT)，常規檢查心、肺、肝、腎等功能，以明確臨床分期。化療采用TP方案:紫杉醇175 mg/m2第1天，順鉑50 mg/m2第1～3天。每4周為1個療程，共治療4個療程。

1.2 試劑和免疫組化染色方法 一抗兔抗人β微管蛋白-Ⅲ購自美國Cell Signal公司，SP免疫組織化學試劑盒購于福州邁新有限公司。采用免疫組化SP法檢測β微管蛋白-Ⅲ在組織中的表達，嚴格按照試劑盒操作規程進行。

1.3 染色結果判定 以病理科兩位副主任以上醫師進行雙盲法閱片，β微管蛋白-Ⅲ蛋白的表達位于細胞胞質內(包括核周)，出現清晰黃色顆粒著色為陽性細胞。根據陽性腫瘤細胞所占比例分級:陽性細胞數＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;再按染色強度打分:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;兩項得分相乘，并取其平均值。按照分數分為4個等級0～1分為(－)，2～4分為(+)，5～8分為(++)，9分以上為(+++)，(+)以上為陽性表達［3］。

1.4 療效評價方法 按照WHO實體瘤標準評定療效分為完全緩解、部分緩解、疾病穩定、疾病進展。以完全緩解+部分緩解為有效。

1.5 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件包對數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 β微管蛋白-Ⅲ在正常肺組織和肺癌組織中的表達 在63例NSCLC患者中 β微管蛋白-Ⅲ在NSCLC中陽性表達率65.08%(41/63)，高于對照組的陽性表達率27.27%(3/11)，差異有統計學意義(χ2=5.553，P＜0.05)。

2.2 β微管蛋白-Ⅲ的表達與化療療效之間的關系63例患者均順利完成治療，完全緩解為12例，部分緩解為31例，有效率為68.25%(43/63)。β微管蛋白-Ⅲ中、低表達組完全緩解10例，部分緩解28例，有效率為86.38%(38/44)，高表達組完全緩解2例，部分緩解3例，效率為26.31%(5/19)，差異有統計學意義(χ2=18.909，P＜0.05)。

2.3 β微管蛋白-Ⅲ的表達與臨床特征之間的關系β微管蛋白-Ⅲ表達與患者性別、是否吸煙及病理類型無明顯相關性(P＞0.05)。β微管蛋白-Ⅲ表達陽性率中-低分化者高于高分化者，差異有統計學意義(P＜0.05)(表1)。

表1 β微管蛋白-Ⅲ的表達與臨床特征之間的關系 ［例(%)］

3 討論

β微管蛋白是構成細胞骨架的主要成分之一，可在正常組織表達，如睪丸組織，也可在肺癌、前列腺癌等組織中表達，在有絲分裂、細胞器組成與運輸及信號轉導等方面發揮重要作用［4-5］。β微管蛋白-Ⅲ是其中一個亞型，Kavallaris等［6］研究NSCLC的A549-T12、A549-T24、A549等3種細胞對紫杉醇的耐藥性，得出前兩者的耐藥性相當于第三者的十余倍，經反轉錄-聚合酶鏈反應分析得出β微管蛋白-Ⅲ在前兩者中的表達遠高于在第三者中的表達，由此推測，β微管蛋白-Ⅲ是紫杉醇耐藥的主要因素。Verdier Pinard等［7］采用電點聚焦和質譜儀等方法聯合檢測耐紫杉醇細胞株的β微管蛋白，發現在6種型β微管蛋白只有β微管蛋白-Ⅲ表達增高，推測它才是微管作用藥物耐藥的唯一標志物表明，β微管蛋白-Ⅲ在NSCLC患者中的表達與紫杉醇的療效有很大關系。

紫杉醇是新型抗微管藥物，被廣泛應用于肺癌、乳腺癌、卵巢癌的治療中。作用途徑是紫杉醇與微管蛋白N端第31位氨基酸和第217～231位氨基酸結合，使微管蛋白呈聚合狀態，維管束與微管組織中心喪失相互連接，于G2/M期阻斷細胞周期，有絲分裂異常或停止，使癌細胞無法分裂而死亡［8-9］。

該項試驗研究表明，β微管蛋白-Ⅲ水平與腫瘤細胞對紫杉類化療藥物的敏感性呈負相關，β微管蛋白-Ⅲ陽性表達與分化程度有關，分化程度越低，陽性表達率越高，其表達高低與性別、吸煙與否及病理分型無明顯相關性，結果與國內外相關報道類似。Seve等［3］應用免疫組織化學方法檢測了91例NSCLC組織β微管蛋白-Ⅲ表達水平，其中47例采用紫杉醇相關化療方案，發現β微管蛋白-Ⅲ高表達組紫杉醇化療有效率遠低于低表達組(12.5%vs 61.9%)，無進展生存期分別為105 d和335 d，總生存期分別為206 d和525 d。楊俊全等［10］采用免疫組化法檢測75例Ⅳ期NSCLC患者，均采用含有紫杉醇藥物的化療方案，β微管蛋白-Ⅲ陽性表達率為58.7%，患者性別、年齡及組織類型與其表達高低無關。β微管蛋白-Ⅲ高表達患者紫杉類化療有效率低于低表達組(25.0%vs 48.9%)，證實高表達NSCLC患者對紫杉類藥物耐藥且預后不良。上述研究說明β微管蛋白-Ⅲ表達高低與紫杉醇耐藥有一定的關系。

綜上所述，β微管蛋白-Ⅲ表達的高低與紫杉醇的療效有一定的關系，為臨床醫師的選藥提供了一定的依據，也有益于化療療效的判斷。

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