B細胞激活因子與過敏性紫癜相關性研究①

侯佳宜 (山西省中醫院檢驗科，太原030012)

B細胞激活因子與過敏性紫癜相關性研究①

侯佳宜 (山西省中醫院檢驗科，太原030012)

目的:通過分析B細胞激活因子(BAFF)與患者免疫球蛋白在不同類型過敏性紫癜(HSP)中的表達，初步探討BAFF在過敏性紫癜免疫發病機制中的作用。方法:收集HSP活動期患者，包括皮膚型30例、關節型30例、腹型32例、腎型31例、混合型41例，將健康人40例作為對照組。速率散射比濁法測定免疫球蛋白水平;ELISA方法檢測BAFF蛋白含量。結果:IgA僅在混合型HSP中增高，IgG和IgM在各組中并無增高;不同類型HSP活動期患者血清中BAFF表達水平均明顯高于對照組;混合型HSP患者血清中BAFF表達水平與同型患者IgA表達水平呈中等程度的相關性。結論:BAFF與HSP發病時的體液免疫增強有關。

過敏性紫癜;B細胞激活因子;免疫球蛋白

過敏性紫癜(Henoch-schonlein purpura，HSP)是一種以侵犯毛細血管為主要病變的變態反應性疾病[1]。發病機制至今仍不明確，近年研究認為免疫機制紊亂是HSP發生和發展的關鍵，是導致患者系統性血管炎病理改變的始發因素。TNF家族的B細胞激活因子(B cell-activating factor belong to the TNF family，BAFF)是1999年發現的腫瘤壞死因子(TNF)超家族新成員，又稱為B淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator，Blys)，在體內 BAFF 有膜結合型和可溶性兩種活性形式?？扇苄缘腂AFF大量存在于外周血及淋巴組織細胞的培養上清中，主要由嗜中性粒細胞和巨噬細胞分泌。BAFF是B淋巴細胞生長、發育和分化中重要的免疫調控因子，主要通過誘導B細胞增殖、分化和分泌免疫球蛋白，增強體液免疫應答[2]。目前研究表明，BAFF過度表達刺激B淋巴細胞產生大量抗體是自身免疫性疾病的主要發病機制[3]，但關于BAFF在HSP發病機制中的意義報道甚少。為了研究BAFF在HSP患者體液免疫功能紊亂的關系，本實驗采用速率散射比濁法與酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定過敏性紫癜患者外周血清中免疫球蛋白和BAFF的表達水平，初步探究HSP的免疫學發病機制。

1 材料與方法

1.1 研究對象 根據美國風濕協會的診斷分類標準，收集我院2010年4月至2010年12月住院或門診HSP患者，包括皮膚型30例、關節型30例、腹型32例、腎型31例、混合型41例，均為初診活動期，并將正常健康人40例作為對照組。

1.2 主要試劑與儀器 人B淋巴細胞刺激因子ELISA檢測試劑盒(武漢博士德公司)、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM 檢測試劑盒(美國 Beckman公司)、

M

ultiskanⅢ自動酶標檢測儀(Labsystems公司)、Well wash MK2自動洗板機(Labsystems公司)、全自動特定蛋白儀(美國Beckman公司)。

1.3 速率散射比濁法測定HSP免疫球蛋白 將標本3 000 r/min離心10分鐘，分離血清。免疫球蛋白IgG、IgA、IgM檢測試劑盒內含有稀釋液、緩沖液、抗血清等，按說明書配制，根據全自動特定蛋白儀程序要求進行樣品測定。

1.4 ELISA方法檢測 BAFF蛋白含量 將標本3 000 r/min離心10分鐘，分離血清。酶標孔加樣品和標準品100 μl，37℃溫育90分鐘，不洗;加生物素標記的 BAFF抗體 100 μl，37℃溫育 60分鐘，0.01 mol/L TBS洗滌3次;加親和素-過氧化物酶復合物(ABC)100 μl 37℃ 溫育 30 分鐘，0.01 mol/L TBS洗滌5次;每孔加入TMB顯色液90 μl，37℃避光反應20分鐘，加終止液，在450 nm波長處測定各孔的OD值;在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣品濃度值。

1.5 統計學處理 數據采用SPSS11.0統計軟件進行統計分析。用±s表示結果，兩組間比較以t檢驗進行分析，相關分析采用Spearman直線回歸分析法，求相關系數(r)，并作顯著性檢驗。

2 結果

2.1 HSP患者血清中免疫球蛋白表達水平 不同類型HSP活動期患者血清中免疫球蛋白的比較見表1。IgA僅在混合型HSP中增高，與對照組相比較，有統計學意義(P＜0.05);而IgG和IgM在各組中與對照組相比較無統計學意義。

2.2 HSP患者血清中BAFF表達水平以及與免疫球蛋白表達水平相關性分析 不同類型HSP活動期患者血清中BAFF表達水平均明顯高于對照組(374.65 ±16.23)pg/ml，且各型之間未見顯著性差異(圖1)?；旌闲虷SP患者血清中BAFF表達水平(8 130±574.99)pg/ml與同型患者IgA表達水平呈中等程度的相關性(r=0.681，P ＜0.05，圖2)。

表1 不同類型HSP活動期患者免疫球蛋白的比較(x ± s，g/L)Tab.1 The level of immunoglobulin in the different subtypes of HSP and control(±s，g/L)

表1 不同類型HSP活動期患者免疫球蛋白的比較(x ± s，g/L)Tab.1 The level of immunoglobulin in the different subtypes of HSP and control(±s，g/L)

Note:Compared with control group，1)P ＜0.05.

Groups n IgA IgG IgM Skin group 30 1.53 ±0.34 10.42 ±1.66 1.68 ±0.43 Joint group 30 2.13 ±0.43 11.79 ±2.41 1.38 ±0.62 Abdomen group 32 2.28 ±0.48 12.47 ±3.39 1.65 ±0.84 Kidney group 31 1.88 ±0.54 12.19 ±3.45 1.69 ±0.68 Mixed group 41 3.71 ±0.881) 11.51 ±4.33 1.67 ±0.65 Control group 40 1.45 ±0.61 12.90 ±1.71 1.43 ±0.32

3 討論

HSP的發病機制至今仍不明確，涉及體液免疫和細胞免疫功能的紊亂，同時有凝血機制的參與，遺傳因素的作用也日漸引起人們的重視[4，5]。國內外學者發現，HSP患兒體內有大量的IgA免疫復合物，沉積于全身組織、器官的小血管壁，通過激活補體和激發炎癥細胞活性導致相應組織、器官的炎性損傷[6]。本研究結果表明，混合型HSP中IgA增高，與國外研究結果一致。其他類型IgA不增高的現象，推測是因為大量的IgA形成免疫復合物沉積于血管壁，而導致外周循環中的IgA不見增高。此外，對HSP病人血清中IgG、IgM的研究并無一致結論，有人認為HSP發病時IgG水平升高，與腎臟系膜細胞抗原結合會導致紫癜性腎炎的病理性改變[7]，然而本研究并未發現各組HSP患者IgG和IgM水平的增高。

圖1 不同類型HSP活動期患者血清BAFF的比較Fig.1 The level of serum BAFF in the different subtypes of HSP and control

圖2 混合型HSP患者血清中BAFF與同型免疫球蛋白表達水平相關性分析Fig.2 The correlation between serum BAFF and IgA in mixed group

BAFF信號的正常表達與體液免疫應答的平衡密切相關。BAFF具有明顯的B細胞趨向性，通過與后者的特異性結合，不僅調節B細胞的數量，而且在其分化、發育及存活方面發揮重要的調控作用[8]。對于休眠 B細胞，BAFF通過誘導 NF-κB 的活性，促使其分化，進而上調抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，延長B細胞的壽命[9]。而有報道證實，BAFF與其相應受體BCMA結合后，活化長壽命漿細胞并增加免疫球蛋白的分泌[10]。BAFF誘發疾病的原因可能是BAFF含量高低影響到B細胞的存活信號以及產生自身抗體的B細胞選擇性凋亡。國內外學者已經證實，BAFF在體內的病理性表達與多種自身免疫性疾病有關，自身免疫性疾病的特征是B細胞耐受喪失，體內產生大量針對自身組織成分的抗體。如SLE患者血清BAFF水平較正常人明顯升高，高濃度的BAFF誘導抗DNA抗體高表達，并能促進抗雙鏈DNA的B細胞成熟[11-13]。研究也發現RA患者血清中BAFF表達量增加，并且病情嚴重的RA患者，滑液中檢測到高濃度BAFF及其受體BAFFR[14]。

BAFF已經成為自身免疫性疾病發病和治療的關鍵因素之一，但關于BAFF在HSP發病機制中的意義報道甚少。本研究結果發現，混合型HSP中IgA增高，因此，我們推測產生免疫球蛋白的B細胞功能異常在其發病機制中起著重要的作用。而是何種原因引起了B細胞異常生成免疫球蛋白IgA，我們進一步檢測了所有患者及對照組中BAFF的表達，發現不同類型HSP活動期患者血清中BAFF表達水平均明顯高于對照組，且混合型HSP患者血清中BAFF表達水平與同型患者IgA表達水平呈中等程度的相關，這些結果均進一步提示，B細胞是BAFF重要的作用靶細胞，HSP發病時，BAFF與其受體相互作用可導致體液免疫功能上調，B細胞異?；罨?，產生多種自身抗體、多克隆的免疫球蛋白，以IgA尤其是IgA1亞類為主，從而形成大量的IgA免疫復合物，導致了HSP的病理性改變。

綜上所述，HSP的免疫發病機制十分復雜，本研究發現混合型HSP患者的IgA分泌異常僅是體液免疫功能的部分表現，而BAFF的水平升高與IgA變化相關，提示在HSP這種免疫球蛋白表達異常增加的疾病中，BAFF至少部分參與了HSP的發病，很可能是體液免疫應答亢進的觸發因素。而BAFF通過何種途徑調節體液免疫以及BAFF在HSP發病時對細胞免疫是否有影響，有待進一步的研究。

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[收稿2012-02-14 修回2012-05-28]
(編輯 張曉舟)

Study on association of BAFF and Henoch-schonlein purpura

HOU Jia-Yi.Clinical Laboratory，Hospital of Traditional Chinese Medicine of Shanxi Province，Taiyuan 030012，China

Objective:To observe the level of BAFF and immunoglobulin in different subtypes of Henoch-schonlein purpura (HSP)，and to explore the role of BAFF in the pathogenesis of HSP.MethodsActive HSP patients were collected，including skin group(n=30)，joint group(n=30)，abdominal group(n=32)，kidney group(n=31)，mixed group(n=41)，40 healthy people were chose as control group.The level of immunoglobulin was examined with Rate Nephelometry and ELISA method was used to detect BAFF.ResultsThe level of IgA was higher in mixed group than in control group，IgG and IgM did not increase in HSP;different subtypes of HSP patients expressed significantly higher level of BAFF in serum than the control group;the expression of serum BAFF moderately associated with the level of IgA in mixed group.ConclusionBAFF was related to enhancement of humoral immunity when HSP was in onset.

Henoch-schonlein purpura;BAFF;Immunoglobulin

R392.8

A

1000-484X(2012)08-0752-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2012.08.018

①本文為山西省中醫藥研究院院級課題基金項目(No.201105)

侯佳宜(1983年-)，女，免疫學碩士，檢驗技師，主要從事自身免疫疾病發病機制方面的研究，E-mail:youhoujiayi0103@126.com。

·分子與細胞免疫學·