凡納濱對蝦“黑精莢”病防治方法的研究

(廣東海洋大學 水產學院,廣東 湛江 524025)

精子的質量影響對蝦的受精率和幼體的質量,對蝦精莢研究主要側重于精莢的形態、精莢的形成和再生、精莢和精子質量評價方法以及溫度和鹽度對精莢再生和質量的影響等方面[1-5]。凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)“黑精莢”病卻沒有引起人們的重視,至今未見報道。所謂“黑精莢”病指的是雄蝦貯精囊中的精莢變黃或變黑結塊,最后壞死。帶“黑精莢”的凡納濱對蝦,嚴重的由于精莢結塊出現交配困難現象,能交配的交配后卵子受精率也會很低,甚至由于精子質量太差而造成卵子不能受精,對養殖生產影響較大。許多對蝦繁育場因此而遭受巨大的經濟損失。為了查清楚引起黑精莢病的病因和探討其防治方法,作者做了些研究,以期對凡納濱對蝦人工繁殖有所幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用蝦

試驗的凡納濱對蝦是廣東海洋大學選育家系中挑選出來的健康和已有不同程度黑精莢的雄蝦分別進行試驗,雄蝦體質量為35～40 g,體長12～14cm。

1.1.2 試驗用水及試驗池

試驗用水是經沉淀、沙濾的海水,鹽度 25～30,pH 7.9～8.2,水溫為自然水溫 25～30℃,隨海區和室外天氣的變化而變化。試驗池為水泥池,面積為 20 m2(4 m×5 m),養殖密度10尾/m2。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離和鑒定

取出黑精莢,搗碎,在平板培養基上涂抹,按常規方法進行細菌鑒定。

1.2.2 形成黑精莢原因及預防試驗

試驗從2009年開始,對形成黑精莢的凡納濱對蝦的養殖環境條件和年齡進行綜合分析,并用沒有黑精莢的凡納濱對蝦進行針對性試驗,以確認形成黑精莢產生的原因。試驗時間90 d。

1.2.3 治療試驗

1.2.3.1 擠出黑精莢

試驗黑精莢的凡納濱對蝦60尾,用人工的方法輕輕將黑精莢從生殖孔中擠壓出來,放到池中培育。為防止細菌感染,第一、二天施用抗菌素,改投喂優質的餌料,如日本槍烏賊(Loliginidae japonicus)、蛤(Ruditapes philippinarum)和沙蠶(Perinereis aibuhitensis)等,連續培育觀察,直到新的精莢形成、成熟。

1.2.3.2 藥物治療

試驗有3種方法:(1) 用消毒劑進行試驗(表1);(2) 使用抗生素進行治療(表2);(3) 消毒劑與抗生素協同使用(表3)。每天換水后施藥,混合用藥于上午施用消毒劑,當天下午施用抗生素,治療時間為 10 d,觀察藥物治療的效果。

2 結果

2.1 引起凡納濱對蝦黑精莢的原因

2.1.1 精莢黑化過程

凡納濱對蝦雄蝦的精莢變黑發生在精莢成熟的個體,性腺未發育成熟的個體很少發生黑精現象。精莢黑化過程是逐漸的,初期在生殖孔附近出現淡黃色,此時的精莢具備受精能力,卵的受精率在85%～90%;中期細菌進一步感染到精莢里面,看上去整個精莢都帶點淡黃色,卵的受精率在40%～65%;后期精莢變黑、變硬,失去受精能力。

表1 消毒劑種類及用量Tab.1 Type and dosage of disinfectant

表2 抗生素種類及用量Tab.2 Type and dosage of antibiotics

表3 抗生素和消毒劑聯合用量Tab.3 Combination dosage of antibiotics and disinfectants

2.1.2 精莢黑化原因分析

用水浸法觀察黑精莢,沒有發現有真菌的菌絲,說明不是由真菌引起的。把黑精莢搗碎接種到培養基上可培養出細菌菌落,經初步鑒定,為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi),說明凡納濱對蝦的“黑精莢”病可能是由細菌引起的。

2.2 清潔池底間隔時間對黑精莢形成的影響

60 d的試驗表明,雄蝦在營養充足的條件下,每天清潔池底,出現精莢變黑的現象較少,少于2%,且發生的精莢變黑程度低,只是在離生殖孔不遠處有較淡的黃色,達到預防黑精莢的目的。如果不清潔池底,時間越長,出現黑精莢的比例越高,較多長時間(90 d)生活在底泥(主要是殘餌和蝦的糞便)的雄蝦,容易病變產生黑精莢,黑精莢率高達 43.2%～65.0%(表4)。

表4 不同管理水平對黑精莢形成的影響(水溫25～29℃,鹽度25～32)Tab.4 Influence of different pool cleaning ways on the formation of black spermatophore

2.3 擠出黑精莢后精莢再生的效果

擠出黑精莢后,雄蝦可再次形成精莢,形成精莢到成熟的時間為6～14 d(表5),且再次成熟的雄蝦精子質量好,受精率可達 85.4%～90.2%,與正常的雄蝦受精率沒有差異,說明這種方法可解決生產上雄蝦精莢黑化問題。但從表中5也可以看出,處理后的雄蝦死亡率較高,高的死亡率達28.3%。尤其是已變硬的精莢,很難擠出來,即使擠出來,蝦易受傷,不久也會死亡。

表5 擠出黑精莢后精莢重新形成和受精的情況Tab.5 Spermatophore formation and fertilization conditions after squeezing out the black spermatophores

2.4 藥物治療黑精莢效果

2.4.1 水體施用消毒劑的治療效果

直接施用消毒劑對治療黑精莢病效果見表6,3種消毒劑中二氧化氯有一定的治療效果,治痊率達45%。觀察發現:二氧化氯只對輕度病癥的有治療效果,對已變黑的精莢很難恢復,甲醛和高錳酸鉀治療效果不顯著。

表6 消毒劑的治療效果Tab.6 The disinfectant treatment results on black spermatophores control

2.4.2 抗生素的治療效果

單純使用抗生素對凡納濱對蝦黑精莢病治療效果不顯著(表7),諾氟沙星具最高的治痊愈率只有18%。

表7 抗生素治療效果Tab.7 The antibiotic treatment results on black spermatophores control

2.4.3 抗生素和消毒劑聯合用藥的治療效果

使用抗生素和消毒劑聯合用藥試驗 10 d,二氧化氯+諾氟沙星聯合用藥治療效果顯著,黑精莢治痊率高達85%,但已變硬的精莢無法恢復(表8)。其他2種組合效果不顯著。

表8 抗生素和消毒劑聯合用藥治療效果Tab.8 The combination treatment results on black spermatophores control using both antibiotics and disinfectants

3 討論

凡納濱對蝦雄蝦“黑精莢”現象比較普遍,在親蝦中均有發現,是影響受精率的重要因素之一,但一直沒有引起人們的關注。當親蝦的精莢變黑時,意味著精子生存的環境發生了改變,精子的活力和質量變差,甚至失去受精能力。對于產生黑精莢的原因國內外研究不多,孟慶顯[6]認為中國明對蝦黑精莢病是由真菌引起的,但是原發性還是繼發性感染尚難斷定。這點與凡納濱對蝦黑精莢病的病因不同,作者從黑精莢中沒有發現真菌,但分離出細菌,說明可能是由細菌感染引起。根據試驗過程中跟蹤檢查的結果,引起黑精莢病的具體的原因有4種:(1)對蝦長期生活在底質較臟的塘或養殖池中,受到細菌感染,患黑精莢的凡納濱對蝦占 43%～65%;(2)長期營養不良,精莢不飽滿時,患黑精莢的凡納濱對蝦占20%～35%;(3)水溫過高,當雄蝦在水溫高于32～33℃環境中培育時間超過20 d時,精莢容易變黑;(4)月齡超過15個月的雄蝦,長期生活在底質較臟的養殖池中,營養不良,患黑精莢病的幾率大增。由此推測,引起黑精莢病主要是由于親蝦長期生活在較臟的底質中,營養不良等因素引起細菌感染;培育水溫過高,引起精莢壞死變黑,因此,細菌感染可能是繼發的。海捕的斑節對蝦(Penaeus monodon)和墨吉明對蝦(Fenneropenaeus merguiensis)的雄蝦極少有患黑精莢病的,也間接說明了底質、水溫和營養是影響黑精莢產生的主要因素。

了解產生黑精莢病的原因后,可有針對性地做好預防黑精莢病的工作。方法是每天吸污、清掃池底積物,保持親蝦的池底清潔;勤換水,每天換水量達 50%～100%;進行適當的水體消毒;投喂優質餌料,尤其是營養豐富的鮮活餌料,控制水溫在 30℃以下,這樣就不會出現黑精莢病。這也是在親蝦催熟培育期間很少發生黑精莢病的原因。

發生黑精莢病后要及時治療,平時要進行水體消毒,早期發現可用二氧化氯消毒處理,當精莢變黃色,且只在生殖孔不遠處,沒有深入到精莢中部,這是用藥治療的最佳時機,聯合使用二氧化氯 1 mL/m3(濃度5%)+諾氟沙星2 mg/L,用藥一周時間治療,效果非常顯著,治愈率可達85%,甚至更高。但如果早期不采取預防和治療措施,讓其進一步發展,整個精莢都變黑,并結成硬塊,此時藥物是很難治療、讓其再恢復功能了。

當病菌進入到精莢中部后,藥物治療還有效果,但需要時間長,最好的辦法是將病變的精莢擠出來,讓新的精莢重新形成。重新形成的精莢飽滿,不會變黑,且精子的質量好,平均受精率達 90.2%。因此,用人工方法擠出黑精莢,讓新的精莢重新形成,是解決黑精莢病難題的有效途徑之一。但用人工擠黑精莢的方法,雄蝦死亡率較高,最高的死亡率達28.3%。在試驗過程中發現,若操作不熟練,很容易將納精囊和輸精管一起擠出來,引起雄蝦死亡;或擠不出精莢,用力過度使雄蝦受傷導致死亡。因此,以后可考慮改用電擊的方法,將黑精莢電擊出來,減少雄蝦死亡。另外,當精莢變黑,產生硬塊時,證明精莢已壞死,由于生殖孔小,也很難從生殖孔中擠出,這種雄蝦最好淘汰掉。

[1]趙連翠,蔡生力.對蝦精莢和精子的研究進展[J].海洋科學,2005,29(2):73-77.

[2]Dougherty W J,Dougherty M M.Electron microscopical and histochemical observations on melanized sperm and spermatophores of pond- cultured shrimp,Penaeus vannamei[J].Journal of Invertebrate Pathology,1989,54:331-343.

[3]Martin Perez-Velazqucz,William A,Bray,et al.Effect of temperature on sperm quality of captiveLitopenaeus vannameibroodstock [J].Aquaculture,2001,198:209-218.

[4]Perez-Velazquez Martin,Gonzalez-Felix M L.Dietary effects on sperm quality ofLitopenaeus vannameibroodstock[J].J World Aquac Soc,2003,34(1):92-98.

[5]袁路,蔡生力.溫度、鹽度對凡納濱對蝦精莢再生和精子質量的影響[J].水產學報,2006,30(1):63-68.

[6]孟慶顯.對蝦疾病防治手冊[M].青島:青島海洋大學出版社,1991:152-153.