復方醋酸甲地孕酮片的溶出度研究

聞宏亮，簡龍海，宋冬梅，楊永健（上海市食品藥品檢驗所，上海 201203）

復方醋酸甲地孕酮片（CMAT）為復方口服避孕藥，含醋酸甲地孕酮和炔雌醇2種組分。該2種組分均為難溶性藥物，其溶出速度直接影響到CMAT的吸收，因而對CMAT的溶出度控制尤為重要。但CMAT現行質量標準[1]檢驗項目中無溶出度檢查項。目前國內關于醋酸甲地孕酮和炔雌醇的單方制劑溶出度測定方法已有文獻報道[2，3]，但關于CMAT的溶出度測定方法尚未見文獻報道。故筆者對CMAT的溶出度測定方法進行研究，建立了高效液相色譜（HPLC）法同時測定醋酸甲地孕酮和炔雌醇含量、槳法測定二者溶出度的方法，為CMAT的標準提高提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

RC806溶出儀（天大天發科技公司）；1100 HPLC儀，包括自動進樣器、二元泵、柱溫箱、紫外檢測器、熒光檢測器、Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）。

1.2 試藥

CMAT（批號:100303、100701，規格:每片含醋酸甲地孕酮1 mg、炔雌醇0.035 mg）、輔料淀粉、預膠化淀粉、糖粉、糊精、硬脂酸鎂、黃色包衣預混劑均由某公司提供；醋酸甲地孕酮標準品（批號:100171-200503，純度:100.0%）、炔雌醇標準品（批號:100052-200308，純度:100.0%）均由中國食品藥品檢定研究院提供；甲醇、乙腈均為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:XtimateTMC18（15 cm×0.46 cm，5 μm）；流動相:乙腈-水（60∶40），流速:1.0 mL·min－1；柱溫:30 ℃；醋酸甲地孕酮選擇紫外檢測器，以最大吸收波長288 nm進行測定；炔雌醇參照復方左炔諾孕酮片溶出度測定方法[1]選擇熒光檢測器，激發波長:285 nm，發射波長:310 nm；進樣量:100μL。

2.2 標準品溶液的制備

分別取醋酸甲地孕酮、炔雌醇標準品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮100 μg、炔雌醇3.5 μg的溶液，分別作為標準品貯備液a、標準品貯備液b。分別精密量取上述貯備液各2 mL，置于同一100 mL量瓶中，用0.5%十二烷基硫酸鈉溶液（SDS）稀釋至刻度，搖勻，作為標準品溶液。

2.3 溶出介質的選擇

由于2種組分均為難溶性藥物，故參考文獻[1]，分別以0.000 5%聚山梨酯-80溶液、0.25%SDS和0.5%SDS為溶出介質，體積均為500 mL，采用槳法，轉速為75 r·min－1，加入樣品（批號:100303），分別在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min時取樣測定，計算各時間點的累積溶出率。結果，2種組分在0.000 5%聚山梨酯-80溶液中達到平臺期時的累積溶出率較低；在0.25%SDS中2種組分均溶出緩慢；在0.5%SDS中溶出迅速，45 min時的累積溶出率達到90%左右。故選擇0.5%SDS作為溶出介質。

2.4 溶出方法和轉速的選擇

本品為片劑，優先考慮選擇溶出度第二法[2]進行試驗。取樣品（批號:100303），以0.5%SDS為溶出介質，采用槳法，分別以50、75 r·min－1為轉速，在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min時取樣測定，計算各時間點的累積溶出率。結果，2種組分在75 r·min－1條件下，45 min時的累積溶出率均可達90%左右，而在50 r·min－1條件下達到平臺期時間稍晚，且45 min時醋酸甲地孕酮的累積溶出率僅為80%左右。故選擇槳法，以轉速75 r·min－1進行試驗。

2.5 含量測定方法學考察

2.5.1 專屬性試驗。按照處方稱取相當于1片重量的輔料，加0.5%SDS適量，超聲處理15 min，濾過，取續濾液作為空白輔料溶液。精密吸取標準品溶液、空白輔料溶液和“2.7”項下樣品溶液各100μL，進樣測定，結果空白輔料不干擾主藥的測定，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.5.2 線性關系考察。分別精密稱取醋酸甲地孕酮、炔雌醇標準品適量，用甲醇溶解并用溶出介質稀釋制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮0.394 1、0.985 25、1.970 5、2.955 75、3.941 μg，含炔雌醇0.014 32、0.035 8、0.071 6、0.107 4、0.143 2 μg的溶液，進樣測定，分別以醋酸甲地孕酮和炔雌醇峰面積（A）對相應濃度（c）進行線性回歸，得醋酸甲地孕酮的線性方程為A＝360.76c+4.610 2（r＝1.000 0）；炔雌醇的線性方程為A＝469.18c+0.167 6（r＝0.999 9）。結果表明，醋酸甲地孕酮和炔雌醇的檢測濃度線性范圍分別為0.394 1～3.941、0.014 32～0.143 2 μg·mL－1。本品規格為每片含醋酸甲地孕酮1 mg、炔雌醇0.035 mg，樣品溶液的濃度分別為2、0.07 μg·mL－1，均在線性范圍內。

2.5.3 精密度試驗。精密吸取“2.5.2”項下醋酸甲地孕酮、炔雌醇標準品溶液適量，分別用溶出介質稀釋制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮1.577、1.971、2.365 μg，含炔雌醇0.057 28、0.071 6、0.085 92 μg的溶液（相當于樣品濃度的80%、100%和120%），分別進樣測定5次，計算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇校正因子（校正因子為濃度與峰面積的比值）的RSD分別為0.1%和0.3%，表明方法精密度良好。

2.5.4 回收率試驗。分別精密量取標準品貯備液適量，置于200 mL量瓶中，加入混合輔料27 mg，制備分別含醋酸甲地孕酮0.985 3、1.577、1.971 μg·mL－1，含炔雌醇0.035 8、0.057 28、0.071 6 μg·mL－1的回收率試驗樣品，加0.5%SDS適量，超聲處理15 min，放冷，加0.5%SDS稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液進樣測定，計算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇的回收率。結果平均回收率分別為98.8%、99.6%，RSD分別為0.4%、0.3%（n＝9），詳見表1。

2.5.5 穩定性試驗。取“2.7”項下的樣品溶液（批號:100303），在室溫放置0、1、2、4、8、12 h后進樣測定，計算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇峰面積的RSD分別為0.1%和0.3%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

表1 回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.6 溶出均一性試驗

取2批樣品分別在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min取溶液5 mL測定，并即時補充相同體積、相同溫度的溶出介質，計算累積溶出率，結果見表2。

表2 2批樣品不同溶出時間累積溶出率結果（%，±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution rate of 2 batches of samples at different tim（e%，±s，n＝6）

表2 2批樣品不同溶出時間累積溶出率結果（%，±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution rate of 2 batches of samples at different tim（e%，±s，n＝6）

取樣時間/min 10 20 30 45 60 75 90 105 120醋酸甲地孕酮批號100303 56.5±9.8 82.7±3.5 88.4±2.9 92.3±3.2 94.2±3.0 94.9±2.8 95.4±2.8 95.7±2.6 96.1±2.4批號100701 55.6±9.5 80.2±2.3 85.3±2.188.9±2.7 90.2±2.8 90.9±2.9 91.6±3.0 92.1±2.8 92.3±2.9炔雌醇批號100303 69.3±9.6 87.6±2.7 91.5±2.6 93.7±2.8 94.9±3.2 95.2±3.195.6±3.0 96.1±2.8 96.8±2.6批號100701 59.9±6.184.2±3.0 88.4±2.9 92.1±3.4 93.4±3.7 94.2±3.4 95.5±3.4 95.9±3.3 96.0±3.3

由表2可見，2批樣品2種組分在45 min時累積溶出率均大于80%，在60 min時累積溶出率的標準差s均小于5%，故選擇溶出平臺期60 min為取樣時間，限度均擬訂為標示量的75%。從表2還可見2批樣品溶出均一性均良好。

2.7 樣品的溶出度測定

取2批樣品各6片，以0.5%SDS作為溶出介質，采用槳法，以轉速75 r·min－1進行溶出度試驗，取樣時間為60 min，結果見表3。

表3 2批樣品累積溶出率測定結果Tab 3 Accumulative dissolution rates of 2 batches of samples

3 討論

原衛生部標準采用紫外分光光度法測定醋酸甲地孕酮的含量，雖方法快速，但靈敏度低、專屬性差，且炔雌醇對醋酸甲地孕酮的測定有干擾。本文采用HPLC法克服了上述困難。但炔雌醇濃度較低，采用紫外檢測器測定時靈敏度達不到要求，而采用熒光檢測器可提高靈敏度[4]。

本試驗結果表明，建立的溶出度測定方法專屬、靈敏、快速、準確，可用于CMAT的溶出度測定。

[1]衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準（二部）第五冊[S].1998年版.1998:62.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:577、1 115、附錄86.

[3]李 芳，李 瑛，劉建平，等.不同生產廠家常用口服避孕藥體外溶出度考察[J].中國藥房，2007，18（7）:535.

[4]呂湘林，汪秀云，曹秀玲.含炔雌醇復方避孕制劑的分析[J].藥學學報，1986，21（7）:532.